豬流行性腹瀉病毒疫苗研究進展

景鼎鼎 ，朱春華，肖方南，王晶晶，張 紅，吳琳嬌，陳磊清，吳允昆*

(1.福建師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院,福建 福州 350108；2.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 畜牧獸醫(yī)研究所，福建 福州 350013)

1971年，在英國首次分離得到冠狀病毒科α冠狀病毒屬的豬流行性腹瀉病毒(porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)[1]。PEDV感染仔豬后誘導(dǎo)仔豬的小腸上皮細胞萎縮脫落、Na+/H+通道蛋白活性降低，從而引起厭食、嘔吐、腹瀉和脫水等臨床癥狀，導(dǎo)致仔豬病情惡化并在幾天內(nèi)死亡PEDV對任何發(fā)育時期的豬均有感染能力，免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善的哺乳期仔豬更容易受到感染，感染后致死率可達100%[3]，保育期和育肥期的豬在感染后出現(xiàn)短時間腹瀉癥狀，成年豬感染后不會出現(xiàn)病癥[4]。自2010年始，PED在國內(nèi)許多地區(qū)陸續(xù)大規(guī)模暴發(fā)，之后在英國、美國、加拿大等國家也相繼暴發(fā)，給世界養(yǎng)豬業(yè)造成毀滅性的打擊[5-6]。此外，隨著PED的全球化趨勢愈加明顯，截至2021年10月下旬，NCBI網(wǎng)站已公布729條PEDV的全基因組信息，病毒持續(xù)變異、毒力顯著增強。同時仔豬接種疫苗容易引起應(yīng)激反應(yīng)，難以產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答，所以通過刺激妊娠期母豬產(chǎn)生溶于乳汁的分泌型免疫球蛋白A(secretory immunoglobulin A，sIgA)保護仔豬是較為有效的辦法[7]。據(jù)此，PARK等[8]進一步研究發(fā)現(xiàn)妊娠晚期與妊娠早期接種疫苗產(chǎn)生的免疫效果接近，早期接種疫苗不會對母豬造成較高代謝壓力，同時提高接種次數(shù)會增加初乳抗體含量，極大提高疫苗對仔豬的保護能力。

PEDV疫苗經(jīng)歷長期發(fā)展，從傳統(tǒng)的滅活、減毒疫苗到亞單位、活載體、轉(zhuǎn)基因植物疫苗以及核酸疫苗等[9]。這些疫苗在PEDV的預(yù)防中均發(fā)揮著重要作用。此外，基于納米材料的納米疫苗，能顯著提高疫苗的免疫效果，成為PEDV疫苗研發(fā)的熱點[10-11]。目前利用納米遞送系統(tǒng)已成功構(gòu)建出安全性高、靶向性好的多元劑型疫苗?，F(xiàn)就PEDV各類型疫苗研究展開綜述，并探討納米運載系統(tǒng)在PEDV納米疫苗開發(fā)中的潛在應(yīng)用前景，以期為病毒綜合預(yù)防提供參考。

1 病毒的結(jié)構(gòu)組成及侵染過程

PEDV基因組為全長約28 kb的單股正鏈RNA，由5′端帽子(cap)、3′端Poly(A)尾和7個開放閱讀框(open reading frames，ORF)組成[12]。如圖1所示，核酸編譯的4個結(jié)構(gòu)蛋白分別是：刺突蛋白(spike protein，S)、包膜蛋白(envelope protein，E)、膜蛋白(membrane protein，M)和核衣殼蛋白(nucleocapsid protein，N)。此外，ORF1a和ORF1b編譯非結(jié)構(gòu)蛋白nsp1 ～ nsp16。ORF3作為PEDV中唯一的輔助蛋白，通過抑制病毒感染誘導(dǎo)的細胞凋亡促進病毒的增殖[12-14]。

糞便中的PEDV以氣溶膠或直接接觸的形式傳播到口鼻，被口鼻腔黏膜下的樹突狀細胞(dendritic cells，DCs)攝取并遷移至淋巴結(jié)傳遞給CD3+T細胞，隨后通過體液循環(huán)轉(zhuǎn)移至腸黏膜結(jié)合受體[15]。S蛋白決定PEDV入侵宿主細胞的能力[16]，由 2個區(qū)域S1、S2組成，S1識別并結(jié)合受體細胞膜表面的功能受體氨基肽酶N(pAPN)與輔助受體神經(jīng)氨酸Neu5Ac[17-18]，隨后具有囊膜結(jié)構(gòu)的PEDV借助網(wǎng)格蛋白、小窩蛋白、脂筏蛋白介導(dǎo)的細胞內(nèi)吞途徑進入內(nèi)吞小體，低pH和組織蛋白水解酶L引發(fā)毒粒結(jié)構(gòu)蛋白的空間構(gòu)象改變，S2輔助病毒囊膜與宿主細胞膜融合，最后將RNA注入宿主細胞胞質(zhì)[19]。病毒基因表達的N蛋白輔助其增殖；E蛋白聚集在受體細胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，通過抑制視黃酸誘導(dǎo)基因蛋白Ⅰ(RIG-Ⅰ)介導(dǎo)的信號通路與非結(jié)構(gòu)蛋白協(xié)同調(diào)控病毒逃避宿主抗病毒天然免疫反應(yīng)[20]；M蛋白是病毒囊膜上含量最高的跨膜結(jié)構(gòu)蛋白，其保守的N末端部分序列暴露于囊膜外且具有免疫原性，可據(jù)此構(gòu)建中和抗體的識別位點[21]。PEDV早期感染未成熟的腸細胞，后期感染整個空腸的絨毛上皮細胞，致使細胞萎縮并從固有層脫落。此外，病毒感染會導(dǎo)致Na+/H+通道蛋白表達水平、轉(zhuǎn)運效率、mRNA豐度顯著下降，從而讓仔豬產(chǎn)生腹瀉、脫水的癥狀[22]。

圖1 PEDV病毒結(jié)構(gòu)示意圖(Cinema 4D作圖)

2 傳統(tǒng)疫苗

2.1 滅活疫苗滅活疫苗實質(zhì)是利用物理和化學(xué)的手段讓受到病毒侵染的組織或細胞失去活性后制備的疫苗。20世紀末，王明等[23]將感染組織用0.2% 的福爾馬林37℃恒溫振蕩24 h，再用氫氧化鋁殺菌得到滅活疫苗，有效性試驗檢測發(fā)現(xiàn)主動免疫保護率達85%，被動免疫率可達97.06%，能有效控制PEDV疾病的傳播。但自2010后，變異毒株數(shù)量激增并分化為GⅠ和GⅡ2種基因型，ZHANG等[24]通過對比PEDV的2種基因型毒株GⅠ(CV777)和GⅡ(CH/JX/01)的致病性和交叉保護效果發(fā)現(xiàn)，目前流行的GⅡ型PEDV毒株的滅活疫苗不僅能預(yù)防同源毒株，還能抵御GⅠ型毒株的攻擊，而利用GⅠ型毒株制備的疫苗對GⅡ型的感染免疫保護效果較差。

滅活疫苗制備簡單、安全有效、易于保存運輸、工業(yè)化成本較低在疫情暴發(fā)時能顯著控制病毒傳播。基于KNU-141112株生產(chǎn)的PEDV滅活疫苗被動免疫仔豬，其存活率提高至92%，并發(fā)現(xiàn)口服PEDV滅活疫苗可顯著提高DCs數(shù)量和IgA水平[25-26]。近期研究通過高效佐劑的替換、優(yōu)質(zhì)毒株的篩選等方法提高疫苗免疫效果[27-29]。胞壁酰二肽復(fù)合佐劑CVC 1303是PEDV滅活疫苗的一種新型佐劑，接種小鼠后發(fā)現(xiàn)小腸中sIgA滴度顯著提高[27]。PARK等[28]在滅活疫苗中添加作為佐劑的同源IgG Fc片段可誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生強烈的特異性免疫應(yīng)答。此外，LIU等[29]對比采用GⅡa與GⅡb亞型毒株制備的滅活疫苗發(fā)現(xiàn)，免疫仔豬均能誘導(dǎo)高水平IgG和γ干擾素(interferon-gamma，IFN-γ)，其中GⅡ a亞型能保護仔豬免疫兩種亞型毒株，而GⅡ b亞型疫苗對GⅡa亞型病毒的感染僅有25% ～ 50%的保護率。然而，滅活疫苗仍需面對免疫原性較低、持續(xù)免疫能力較弱，誘導(dǎo)妊娠期母豬產(chǎn)生的黏膜免疫應(yīng)答不強烈等挑戰(zhàn)。

2.2 減毒疫苗減毒疫苗是指經(jīng)過傳代培養(yǎng)病毒毒力顯著下降后制備的疫苗，其能模擬病毒的自然侵染過程誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生持續(xù)性免疫應(yīng)答，對仔豬提供高效且長效的保護。童昆周等[30]用Vero細胞系將PEDV G1強毒株傳至第83代獲得穩(wěn)定的弱毒株，攻毒試驗發(fā)現(xiàn)對仔豬的保護率可達94.6%。WU等[31]利用Vero細胞傳代培養(yǎng)PEDV CT毒株，與第10和64代毒株測序結(jié)果對比，第120代毒株的13個氨基酸突變導(dǎo)致PEDV毒力顯著降低，表現(xiàn)出優(yōu)良的細胞適應(yīng)性，能穩(wěn)定傳代刺激宿主產(chǎn)生高滴度抗體，可用于開發(fā)市場化GⅡa型減毒疫苗。BOONSOONGNERN等[32]通過研究母豬初乳、血清和仔豬血清中針對PEDV的IgA和IgG樣本陽性比率(S/P)的相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，較于陰性母豬組的仔豬，接種減毒疫苗的母豬所產(chǎn)仔豬的S/P水平顯著提高，母豬血清與初乳、仔豬血清之間的S/P呈正相關(guān)。弱毒疫苗因過度弱化、較長的先導(dǎo)開發(fā)時間以及可能存在與野毒株重組產(chǎn)生新變種等問題[33]，在疫苗推廣過程中有較大爭議。為克服上述挑戰(zhàn)，SINGH等[34]將PEDV在44℃熱處理10 min可逆地展開蛋白結(jié)構(gòu)，然后將其基因組暴露于RNase中碎片化，構(gòu)建保持完整病毒結(jié)構(gòu)但復(fù)制能力極顯著降低的減毒疫苗，可刺激機體產(chǎn)生高效特異性免疫，不僅避免毒株過度弱化而且碎片化的基因組難以重組，能顯著提高滅活疫苗的安全性。此外，胡興義等[35]比較使用滅活和減毒疫苗與單一使用其中一種疫苗發(fā)現(xiàn)，交替使用疫苗顯著提高乳汁中抗體滴度、免疫持續(xù)時間和安全性，并使仔豬的死亡率降低至3.69%。但這些研究僅是初步探索，缺乏足夠的數(shù)據(jù)支撐，因此有待于進一步深入研究。

截至目前，國內(nèi)已經(jīng)使用了3種基于CV777開發(fā)的二價或三價滅活疫苗和減毒活疫苗，并于2015年推出了一種基于GⅡa基因型的減毒二價疫苗[36]。具有細胞適應(yīng)性的83P-5毒株(P-5V)在日本作為減毒活疫苗用于預(yù)防PEDV的廣泛傳播[37]。

3 基因工程疫苗

3.1 亞單位疫苗亞單位疫苗是指利用表達系統(tǒng)生產(chǎn)病原微生物完全抗原或其部分結(jié)構(gòu)制備的疫苗，可添加佐劑、免疫輔助劑等成分提高其效價。較于傳統(tǒng)疫苗，不僅廉價，而且具有更高的安全性、產(chǎn)量和應(yīng)答效率?，F(xiàn)有研究中，LI等[38]使用PEDV抗原核心表位COE(499aa-638aa)替換大腸桿菌鞭毛蛋白的D3區(qū)域構(gòu)建出rSF-COE-3D亞單位疫苗，接種仔豬后海穴能顯著提高糞便中sIgA和血清抗體的水平。此外，rSF-COE-3D還能刺激小鼠脾細胞生成更多的CD3+、CD8+T 細胞以及高水平IFN-γ和細胞白介素-4(interleukin-4,IL-4)[39]。PEDV S2區(qū)域中含有能夠抑制病毒侵染受體細胞的HR1和HR2片段，從HR1、HR2中篩選出6段多肽，表達純化分析后發(fā)現(xiàn)HR2P片段不僅能高效抑制病毒侵染，還能誘導(dǎo)機體持續(xù)產(chǎn)生高水平中和抗體[40]。HO等[41]將COE與本氏煙草C端異亮氨酸拉鏈三聚化(GCN4pII)基序融合，構(gòu)建出天然三聚體結(jié)構(gòu)的COE，仔豬感染PEDV的癥狀明顯減輕。亞單位疫苗抗原的免疫原性過低，通過將生物型佐劑基因片段與病毒抗原基因片段重組共表達或添加具有佐劑作用的物質(zhì)，顯著增強亞單位疫苗的免疫原性，因此，研發(fā)安全高效佐劑在亞單位疫苗的發(fā)展過程中至關(guān)重要。

3.2 轉(zhuǎn)基因植物疫苗植物表達系統(tǒng)因其可正確折疊、修飾外源蛋白以及提供便利性的給藥形式受到廣泛關(guān)注，但存在外源蛋白表達過低的問題，難以實現(xiàn)規(guī)?；?。葉綠體在植物內(nèi)含量豐富，并能半自主表達外源蛋白，據(jù)此將外源蛋白基因重組到葉綠體基因組中，實現(xiàn)外源蛋白高效表達[42]。此外，HUY等[43]將大腸桿菌熱不穩(wěn)定腸毒素B亞基(LTB)與PEDV COE基因融合后重組進生菜基因組上，實現(xiàn)可生食性植物制備疫苗誘導(dǎo)仔豬產(chǎn)生黏膜免疫應(yīng)答，避免加熱破壞抗原結(jié)構(gòu)導(dǎo)致的免疫活性降低。TIEN等[44]發(fā)現(xiàn)霍亂毒素B亞單位(CTB)具有可使融合抗原穿過黏膜屏障進而提高抗原免疫原性的能力，在煙草rRNA的控制下將S1D和S1D-CTB序列克隆至煙草葉綠體表達系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)CTB可促進S1D的表達，表達效率提高20 ～ 40倍。據(jù)此，HUY等[45-46]用CTB基因替換LTB、PEDV S蛋白的S1D片段(636aa～789aa)替換COE，所表達抗原蛋白的溶解性、產(chǎn)量顯著提高且誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答更強烈。EGELKROUT等[47]優(yōu)化PEDV S蛋白基因的密碼子適應(yīng)玉米表達系統(tǒng)后，將其重組到玉米基因組上穩(wěn)定表達，表達量已達到20 mg/kg。植物系統(tǒng)表達量較過去已有顯著提高，但是抗原容易被消化系統(tǒng)水解[42,47]，生物利用度較低導(dǎo)致其應(yīng)用受到諸多限制，需要進行更多的研究論證，才能使轉(zhuǎn)基因植物疫苗規(guī)?；?。

3.3 活載體疫苗活載體疫苗是指將PEDV抗原表位基因重組進弱化后的病毒或細菌的基因組中制備的疫苗，其感染宿主可持續(xù)合成抗原蛋白刺激機體發(fā)生特異性免疫。LI等[48]構(gòu)建出L.casei-OMP 16-PEDV S重組菌株，用小鼠做免疫原性試驗，發(fā)現(xiàn)免疫小鼠血清中的中和抗體及IF、INF水平顯著升高。LU等[49]將PEDV S基因重組進乙型肝炎病毒基因組中，構(gòu)建病毒樣顆粒疫苗，被動免疫妊娠期母豬并對其仔豬進行攻毒試驗。結(jié)果表明，該疫苗可誘導(dǎo)母豬乳汁中sIgA含量增加，仔豬臨床癥狀明顯減輕且顯著降低仔豬的死亡率。YUAN等[50]利用豬痘病毒作為載體表達PEDV QS2014的截短S蛋白(rSPV-St)，發(fā)現(xiàn)接種rSPV-St疫苗的血清IgA滴度極顯著高于滅活疫苗免疫的仔豬。KE等[51]用高減毒重組水泡性口炎病毒表達刪除19個氨基酸的PEDV S蛋白，其通過肌內(nèi)注射誘導(dǎo)產(chǎn)生強烈的黏膜免疫，攻毒試驗發(fā)現(xiàn)，仔豬受到感染僅會持續(xù)幾天輕微腹瀉，并且死亡率降低至0%。

活載體疫苗在免疫持續(xù)時間、高效應(yīng)答等方面具有顯著優(yōu)勢，但是在實際應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)，疫苗的活載體單位存在毒力復(fù)壯、目的基因傳代丟失、接種后產(chǎn)生副作用等問題[32]。因為疫苗本質(zhì)是為接種個體提供防護，在安全性方面的顧慮影響了活載體疫苗的市場化，因此提高表達系統(tǒng)的穩(wěn)定性能顯著克服上述問題并加速活載體疫苗上市。

4 核酸疫苗

核酸疫苗又稱為第3代疫苗，本質(zhì)是將病原微生物的抗原表位基因重組到真核表達載體上直接導(dǎo)入受體細胞，利用宿主細胞持續(xù)合成抗原誘導(dǎo)機體產(chǎn)特異性免疫應(yīng)答[52]。SUO等[53]利用pVAX1真核表達載體構(gòu)建出3種陽性重組子，pVAX1-PEDV-S，pVAX1-PEDV-S1以及pVAX1-IL-18，發(fā)現(xiàn)3個重組子聯(lián)合使用可誘導(dǎo)高效的適應(yīng)性免疫應(yīng)答，接種小鼠并攻毒發(fā)現(xiàn)，小鼠血清中含有高濃度中和抗體IFN-γ和IL-4。YIN等[54]用PEDV S蛋白基因和豬輪狀病毒VP7基因構(gòu)建pPI-2.EGFP.VP7.S免疫8周齡小鼠，可誘導(dǎo)產(chǎn)生強烈的體液免疫和細胞免疫，較于皮下注射，肌肉注射質(zhì)粒濃度與免疫效果呈正相關(guān)。ZHANG等[55]成功構(gòu)建出由減毒鼠傷寒沙門菌傳遞的豬傳染性胃腸炎(TGEV)和PEDV S 蛋白的DNA疫苗 SL7207(pVAXD-PS1-TS)，能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生高水平的IFN-γ和IL-4并明顯緩解PEDV感染后的癥狀。

核酸疫苗具有較高的靈活性，能夠在PEDV GⅡa基因型爆發(fā)初期快速制備且高效限制病毒傳播，其次表達質(zhì)粒注入機體內(nèi)即可誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生強烈的黏膜免疫應(yīng)答，最后能夠與多種疫苗聯(lián)合使用提高免疫效果?？朔怂嵋呙绶€(wěn)定性差是目前研究的重點，部分學(xué)者認為通過優(yōu)化密碼子、新型佐劑和新型遞送系統(tǒng)穩(wěn)定保護核酸可克服上述問題[56]。

5 納米疫苗

在過去的10年中，納米技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用取得長足發(fā)展，特別是在疫苗遞送方面。許多納米顆粒已被廣泛應(yīng)用于開發(fā)動物病原微生物疫苗載體，納米顆粒的使用為設(shè)計疫苗載體系統(tǒng)提供了極大的可能，該系統(tǒng)具有靶向傳遞、提供穩(wěn)定抗原、作為有效的佐劑等優(yōu)點[11,57-58]。MAHONY[57]基于中空二氧化硅納米顆粒開發(fā)出針對PEDV的納米疫苗，可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生極高水平特異性細胞免疫，在宿主體內(nèi)具有良好的耐受性和生物相容性，能實現(xiàn)靶向遞送且顯著提高疫苗刺激機體產(chǎn)生的黏膜免疫應(yīng)答。ZHANG等[58]成功構(gòu)建智能相變屏蔽層聚合(甲基丙烯酸甲酯-丙烯酸甲酯-異丁烯酸甲酯-丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸-聚乙丙交酯)(PMMMA-PLGA)，其表面羧基解離產(chǎn)生負電荷保護抗原免受消化系統(tǒng)水解吸收，并在羅非魚體內(nèi)隨pH上升實現(xiàn)抗原靶向釋放，實現(xiàn)納米疫苗的口服性。目前應(yīng)用于構(gòu)建納米疫苗的材料包括有機、脂質(zhì)聚合、天然以及無機納米材料等[59]。有機合成的納米聚合物材料是將具有良好生物相容性、可降解性的有機物聚合形成的膠狀納米分子，可包裹、吸附抗原并在靶點釋放[60]。由仿造細胞膜構(gòu)建的磷脂雙分子層包裹抗原研發(fā)的疫苗，能有效運輸疏水性抗原，并可通過與聚乙二醇(PEG)混合達到延長免疫應(yīng)答持續(xù)時間的效果[61]。天然納米材料易于實現(xiàn)自我組裝，據(jù)此可構(gòu)建仿生病毒樣納米顆粒，模仿病毒自然侵染宿主的過程，可設(shè)計多種劑型用于防治疫情[62]。無機納米材料結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、靶向性好、可修飾性強，易被DCs和巨噬細胞捕獲[59]。通過對納米材料的優(yōu)化設(shè)計出系統(tǒng)毒性低、表面可修飾的納米疫苗，這種疫苗不存在病毒復(fù)制和重組的風(fēng)險，可實現(xiàn)遞送抗原并增強疫苗免疫原性。

納米材料在PEDV疫苗研發(fā)中也取得一些進展，KIM等[63]基于PEDV結(jié)構(gòu)蛋白成功構(gòu)建出病毒樣仿生人造納米顆粒，可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生Th2介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，誘導(dǎo)產(chǎn)生的特異性IgG滴度顯著高于滅活疫苗。LI等[62]將PEDV的免疫原蛋白與聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)共價結(jié)合，鼻內(nèi)接種妊娠期母豬后對其仔豬攻毒發(fā)現(xiàn)，較于被動免疫的仔豬，抗原-PLGA提高宿主淋巴細胞數(shù)量、IFN-γ以及中和抗體的水平。此外，CHOE等[64]從大腸桿菌表達系統(tǒng)中純化得到重組PEDV S蛋白aP2，比較結(jié)合aP2的鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素微球(HPMCP)和表達aP2的乳酸乳球菌的免疫效果，兩類疫苗均顯著提高血清和乳汁中的抗體水平，但HPMCP-aP2更高效，仔豬接種后體質(zhì)量減輕不顯著，僅出現(xiàn)輕微腹瀉癥狀便可自行痊愈。

近10年，隨著制備納米顆粒的技術(shù)發(fā)展，制備成本和合成條件逐步降低、負載量顯著提高，極大地推動納米疫苗的規(guī)模化[58,65]。此外，因為納米材料的粒徑、帶電性、表面基團等性質(zhì)常與納米疫苗的靶標性、佐劑性、抗原釋放能力有關(guān)，所以通過對納米顆粒理化性質(zhì)的進一步研究，有助于開發(fā)出更高效安全的納米疫苗。

6 總結(jié)與展望

PEDV廣泛流行造成極大的經(jīng)濟損失，養(yǎng)豬場迫切需要經(jīng)濟、安全且能實現(xiàn)大規(guī)模接種的疫苗。人們期望的“理想疫苗”應(yīng)該具備安全、經(jīng)濟、適用、穩(wěn)定性高等特點，目前市場上的PEDV疫苗仍需改進。隨著PEDV毒株的變異使得疫苗接種變得更加復(fù)雜和混亂，對于該病的預(yù)防措施變得尤為困難，因此針對最近流行的GⅡ型毒株的有效疫苗正在世界各地積極開發(fā)。此外，由于沒有明確的目標動物測試模型來證明疫苗的有效性，研究人員進行疫苗開發(fā)過程中主要通過設(shè)置自己的標準，如糞便稠度和臨床癥狀、病毒輸出、存活率以及攻擊后血清或初乳中的PED抗體(IgA、IgG和VN)水平等評估疫苗效果[66]。目前，大部分PEDV疫苗可誘導(dǎo)特異性免疫應(yīng)答，產(chǎn)生高滴度血清抗體，與直接作用于靶點誘導(dǎo)黏膜免疫的PEDV納米疫苗相比，其生物利用度較低。而在疫苗研制方面，PEDV與β屬冠狀病毒科的新冠病毒確有相似的一面，具有一定借鑒價值。未來，可期待核酸疫苗與納米運載系統(tǒng)融合，迅速對PEDV突變基因型做出響應(yīng)。雖然現(xiàn)階段只有少數(shù)納米疫苗處于早期臨床階段，但其在預(yù)防PEDV方面表現(xiàn)出巨大潛力，因此納米運載系統(tǒng)的發(fā)展可為PEDV的預(yù)防提供更優(yōu)質(zhì)的策略。