細針穿刺細胞學及抗酸染色用于淋巴結結核診斷的準確性分析

戴素娟 謝訓祿 李俊韜 郭廣秀

(贛州市人民醫(yī)院 江西 贛州 341000)

贛州市指導性科技計劃項目，編號GZ2018ZSF129

淋巴結結核是指感染結核分枝桿菌所致的淋巴結炎。包括體表和深部淋巴結結核，淺表淋巴結結核以頸部最多，其次為腋下，深部淋巴結結核主要發(fā)生在胸腔、腹腔和盆腔。頸部淋巴結預后優(yōu)良，是良性疾病，最不佳的并發(fā)癥是反復流膿，產(chǎn)生竇道，影響患者生活質量[1]。臨床對此病的觀點是系統(tǒng)治療，雖然為良性疾病，但由于其也會播散，嚴重時會反復流膿、流水，導致病情遷延不愈，甚至引起慢性竇道。輕者可采用藥物保守治療，嚴重者需采取手術治療[2]。此病對人體危害較大，及時準確的診斷能夠為治療提供有效的依據(jù)，而準確的診斷是治療的基礎，當下應用廣泛的診斷技術當屬細針穿刺細胞學、抗酸染色檢驗，本研究對收治的患者均應用此兩種方式診斷，觀察效果，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

時間：2019年1月-2020年12月；贛州市人民醫(yī)院收治80例淋巴結病變患者，男41例，女39例，年齡40～89歲，平均(45.36±4.22)歲。全部患者資料差異不顯著(P>0.05)。

納入標準：(1)病理結果證實為淋巴結結核；(2)病歷資料完善；(3)患者與家屬均知情，雙方簽署知情協(xié)議書，經(jīng)醫(yī)學倫理委員會審核通過。

排除標準：(1)合并肝、腎、心、腦等嚴重臟器功能不全者；(2)復治結核病與其他慢性傳染性疾病者。(3)精神病史者。

1.2 方法

穿刺涂片，采集標本，鏡檢全部安排專業(yè)病理醫(yī)師開展，取規(guī)格10mL一次性塑料注射器、一次性7號注射針頭取材，選取腫大淋巴結，對局部消毒，左手對淋巴結進行固定，右手用注射器經(jīng)皮穿刺，保證針頭刺進腫塊后，拉動活塞，收集適量液體變化方向，抽吸不同方位取材。收集足量材料后將負壓消除、退針。全部標本均開展細針穿刺細胞學診斷、抗酸染色檢驗。

細針穿刺細胞學：將材料吸出后選一份開展瑞氏染色-吉姆薩復合染色，安排專業(yè)病理醫(yī)師借助顯微鏡觀察病變細胞形態(tài)學特異性結構、特點。

抗酸染色檢驗：另一份材料直接涂片完成抗酸染色，安排專業(yè)病理醫(yī)師借助顯微鏡觀察。具體步驟為：待檢涂片置放于玻璃器皿中，加入已配好的0.4%裂解液TritoX-100，冷藏0.5h，取出涂片完成沖洗，晾干；添加5%苯酚(廠家：廣州古德新材料科技有限公司，批號：20180511)復紅染色15min，水洗到紅色消失；鹽酸酒精脫色2次，水洗。添加堿性美蘭染液(廠家：濟南百博生物技術股份有限公司，批號：20180522)復染5min，水洗、晾干檢驗，借助油鏡背景設置成藍色，抗酸桿菌呈紅色。計算觀察兩種診斷方式及聯(lián)合方式診斷的敏感度、特異度、準確度。觀察兩種診斷方式下淋巴結細胞學分型與抗酸染色結果。

1.4 統(tǒng)計學分析

2 結果

2.1 細針穿刺細胞學診斷淋巴結結核結果

以結核分歧桿菌培養(yǎng)作為金標準，判定淋巴結結核44例，非淋巴結結核36例。以此為依據(jù)，判斷細針穿刺細胞學診斷淋巴結結核的價值，其敏感度=36/44=81.81%，特異度16/36=44.44%，準確度=52/80=65.00%。見表1。

表1 細針穿刺細胞學診斷淋巴結結核結果

2.2 抗酸染色檢驗診斷淋巴結結核結果

以結核分歧桿菌培養(yǎng)作為金標準，判定淋巴結結核44例，非淋巴結結核36例。以此為依據(jù)，判斷抗酸染色檢驗診斷淋巴結結核的價值。其敏感度=38/44=86.36%，特異度20/36=55.56%，準確度=58/80=72.50%。見表2。

表2 細針穿刺細胞學診斷淋巴結結核結果

2.3 細針穿刺細胞學聯(lián)合抗酸染色檢驗診斷淋巴結結核結果

以結核分歧桿菌培養(yǎng)作為金標準，判定淋巴結結核44例，非淋巴結結核36例。以此為依據(jù)，判斷上述兩種方式聯(lián)合診斷淋巴結結核效果。其中，敏感度=40/44=90.91%，特異度30/36=83.33%，準確度=70/80=87.50%。此聯(lián)合診斷方式與細針穿刺細胞學、抗酸染色檢驗差異明顯(X2=0.340、0.889、1.047，P<0.05)。見表3。

表3 細針穿刺細胞學聯(lián)合抗酸染色檢驗診斷淋巴結結核結果

2.4 淋巴結細胞學分型與抗酸染色結果

細針穿刺細胞學及抗酸染色診斷后：細菌學：萋納氏染色法，均采用熱染法，依據(jù)我國結核病對細菌學檢驗流程進行分析，借助油鏡在檢查視野探尋到3條抗酸桿菌，未發(fā)現(xiàn)陰性。兩組診斷方式下淋巴結細胞學分型與抗酸染色結果，見表4。

表4 兩組診斷方式下淋巴結細胞學分型與抗酸染色結果[n(%)]

3 討論

3.1 淋巴結與淋巴結結核關系

淋巴結能夠與抗體、淋巴細胞相抗衡，同樣是受抗原刺激造成的免疫應答場所。一般情況下，淺表淋巴結光滑、柔軟，具有較高的質感，不會與鄰近組織粘連，常見體征即為淺表淋巴結腫大，能夠為診斷提供科學路徑，發(fā)病原因諸多[3]。在各種外界因素的刺激下，淋巴結中的淋巴細胞迅速增加，最終發(fā)生腫大。所以，明確淋巴結腫大的病因，臨床意義深遠。

淋巴結穿刺結核細胞的具體表現(xiàn)可劃分成5個時期，分別是：(1)增殖性反應階段：主要是成熟的淋巴細胞，組織細胞較少，偶爾會發(fā)現(xiàn)原幼淋巴、較少組織細胞。(2)淋巴結節(jié)階段：主要是成熟的淋巴細胞，組織細胞較少，有部分類上皮細胞。(3)結核結節(jié)階段：郎格罕巨細胞中的結核結節(jié)較多，清晰可見壞死組織與破碎的細胞。(4)淋巴結核干酪型：最多的是壞死組織、郎格罕巨細胞，清晰可見類上皮細胞。(5)纖維素增殖階段：經(jīng)對結核的治療，淋巴結成分會產(chǎn)生變化，淋巴細胞會被肉芽組織所代替。

3.2 細針穿刺細胞學檢查(FNAC)

細針穿刺細胞學檢查(FNAC)方式簡單，安全性高，經(jīng)濟價值高，短時間內能夠為患者供應準確的細胞學診斷，患者容易接受。臨床多年開展細針穿刺細胞學檢查發(fā)現(xiàn)：液化壞死期淋巴結核膿腫有以下特點：①淋巴結結核很多在腋下、頸部出現(xiàn)，幼兒多在腋下。②淋巴結結核性膿腫臨床表現(xiàn)為紅腫、痛、發(fā)熱等，一般位于單側，無痛等，部分淋巴結腫塊長徑達10cm。③穿刺物呈乳白色干酪樣，液化壞死期間以淡黃綠色膿樣呈現(xiàn)。④細胞學涂片上，會發(fā)現(xiàn)顆粒狀的物質，顏色為紫紅色，膿細胞較少。并其他感染者會發(fā)現(xiàn)存在不等的膿細胞。⑤由此可見：部分退化的類上皮細胞，主要是依據(jù)細針抽吸膿液性狀來決定，明確結核判斷，有助于及時診治結核。FNAC檢查會及時取得標本，膿液標本含量較高，其含菌量較大。所以，為提高診斷的準確性，細胞學醫(yī)師在診斷淋巴細胞方面的疾病時，應多加注意，不斷學習，提高自己的診斷水平。

3.3 抗酸染色檢驗

抗酸染色檢驗的診斷理念是：分枝桿菌細胞壁中存在大量的脂質，主要是分枝菌酸，包含肽聚糖的外部，由于此菌不易著色，著色的完成需通過延長染色時間實現(xiàn)。但分枝桿菌中其菌與染料相結合，酸性脫色劑會脫色，即抗酸染色。齊-尼氏抗酸染色法是在加熱的基礎下使分枝菌酸、石炭酸牢固結合為復合物，利用鹽酸酒精處理即不脫色。接著用堿性美浪復染后，分枝桿菌依然是呈紅色，其余細菌與背景中物質均呈藍色。此方法能夠提高病灶檢出率，Triton X-100是一類非離子型表面活性劑，可溶解脂質，細胞膜比較通透。免疫細胞化學中Triton X-100一般濃度在0.1%-0.2%，膜通透性較強，會將部分結合膜溶解，比較適合開展核酸表面抗原的免疫組化，處理時間較長，濃度高，會對染色數(shù)據(jù)造成影響。檢驗時，先用玻片對標本進行涂片，滴注石碳酸復紅2-3滴，在火焰高的部位緩緩加熱，以免其沸騰，產(chǎn)生蒸汽，暫離。發(fā)現(xiàn)染液蒸發(fā)量少時，添加染液，以免染液不足，加熱3-5min，待標本降溫后，用水清洗。接著脫色，使用酒精(3%)來脫色，沖洗時間保持在30s-1min。最后復染，用堿性美蘭溶液復染1min，用水清洗，吸干水分后用油鏡仔細觀察。

3.4 分析兩種檢驗方式對淋巴結結核的應用

細胞塊技術在文獻中報道較少，但能夠改善細胞學涂片的不足，細胞學涂片開展ICC時傳統(tǒng)涂片收集的細胞少、涂片厚薄不均導致陽性物質定位不清呈假陽性，無法依據(jù)需要連續(xù)切片與永久性保留標本。細胞塊技術可彌補上述不足，為淋巴結結核診斷提供有利條件。但細胞塊穿刺難度高，需要組織量大，針頭21-22號，存在一定有創(chuàng)性。

結核桿菌感染淋巴結時，細胞學變化特殊，產(chǎn)生的郎格漢巨細胞能夠改善漢巨細胞，淋巴結中出現(xiàn)類上皮細胞是結核桿菌繁殖引起的變化，是科學診斷淋巴結結核的方式，然而上皮細胞會有部分發(fā)生炎癥細胞學改變。所以，僅憑類上皮細胞對淋巴結核進行診斷，誤診概率較高。另外，因淋巴結結核干酪型無細胞學變化，瘤性、膿性等造成的類別不同的壞死無法區(qū)分，誤診概率極高，需聯(lián)合其余輔助檢查方式來診斷，如：抗酸染色、腺苷脫氨酶等測定，其中，抗酸染色對淋巴結的診斷迅速、便捷，且具有較高的經(jīng)濟價值，與我國國情相符，適合基層醫(yī)院。涂片染色陽性僅表明其含有抗酸桿菌，無法區(qū)別具體菌體。結核菌培養(yǎng)法具有較高的敏感性，其效果與涂片鏡檢法高，能夠直接取得菌落，方便判斷非結核分枝桿菌，是鑒別結核病的準則，但培養(yǎng)用時較長，實驗室不便開展常規(guī)檢查。我國因非結核分枝桿菌類型少，所以檢出抗酸桿菌，有助于結核病的診斷。所以，穿刺細胞學在診斷時，常規(guī)檢查可開展直接涂片抗酸染色，方便抗酸桿菌的探查，取得精準度較高的數(shù)據(jù)，尤其是對淋巴結結核干酪型判斷，直接采用直接涂片抗酸染色法方能夠清晰鑒別是否為抗酸桿菌。

本研究中，用兩種診斷方式開展不同檢查，從所得結果來看，借助油鏡在檢查視野探尋到3條抗酸桿菌，未發(fā)現(xiàn)陰性。這可能是由于抗酸桿菌于淋巴結結核的不確定性較強，穿刺期間觀察其是否與結核桿菌位置對應。另外，抗酸染色敏感性較高，量小的抗酸桿菌無法檢測出來。除此之外，從診斷敏感度、特異度、準確度來看，明顯是細針穿刺細胞學聯(lián)合抗酸染色檢驗診斷淋巴結結核最高，其次是抗酸染色檢驗，最后是細針穿刺細胞學診斷。由此得出：兩種方式相結合在淋巴結結核中的診斷準確度較高，取得數(shù)據(jù)更為精準，能夠為治療提供有效的憑證。

綜上所述，干酪壞死型細胞學檢驗、直接涂片抗酸染色數(shù)據(jù)相符合，抗酸桿菌陽性率較高。其余各階段直接涂片抗酸染色不容易符合，接近0。更是表明其診斷淋巴結結核時，具備類上皮細胞、干酪樣壞死，雖然同樣能夠用于結核診斷，但抗酸染色于淋巴結結核各階段陽性率有差異，懷疑是淋巴結結核時，穿刺涂片抗酸染色陰性者，需進一步開展實驗室檢查診斷。