納豆激酶對(duì)高糖缺氧誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用△

楊 倩 薛 瑢 董怡辰 范夏蓮 余 川 萬光明

糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)是常見的糖尿病視網(wǎng)膜微血管并發(fā)癥，是世界上中青年視力損害的主要原因之一[1]。研究表明，視網(wǎng)膜炎癥、血管通透性增加、視網(wǎng)膜異常新生血管、視網(wǎng)膜神經(jīng)結(jié)構(gòu)和功能紊亂等是DR發(fā)生的重要機(jī)制[2]，但是DR最主要的特征是早期代謝改變和缺血缺氧引起的視網(wǎng)膜微血管功能障礙[3]。視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)細(xì)胞位于視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮和脈絡(luò)膜之間，組成血-視網(wǎng)膜屏障，維持視網(wǎng)膜的正常功能[4-5]。有研究表明，RPE細(xì)胞在缺氧狀態(tài)下會(huì)導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙和凋亡，缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)表達(dá)升高,進(jìn)而調(diào)控血管內(nèi)皮生長因子A(VEGFA)分泌增多，細(xì)胞間緊密連接破壞,從而誘導(dǎo)新生血管形成[6-7]。

納豆激酶(NK)是一種堿性蛋白酶，由275個(gè)氨基酸殘基組成，是納豆中最有效的成分。由于具有強(qiáng)大的纖溶和抗血栓作用，且安全性高，副作用小，NK已成為預(yù)防和治療心血管疾病的新一代藥物[8]。最近有研究表明，NK在抑制脂多糖誘導(dǎo)的炎癥和氧化應(yīng)激損傷中起著至關(guān)重要的作用[9]。但是NK在高糖缺氧誘導(dǎo)的RPE細(xì)胞損傷中的作用及其機(jī)制尚不清楚。本研究擬探討NK是否對(duì)高糖缺氧誘導(dǎo)的RPE細(xì)胞損傷發(fā)揮保護(hù)作用，以期為DR的預(yù)防和臨床治療提供新的靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(ARPE-19)(中山大學(xué)中山眼科中心提供)，胎牛血清、DMEM培養(yǎng)基和胰蛋白酶(美國Gibco公司)、青-鏈霉素混合液(美國Hyclone公司)，PBS緩沖液(美國Corning公司)，CCK-8試劑盒(日本Dojindo公司)，氯化鈷(CoCl2，美國Sigma公司),NK(美國Abmole公司),Trizol試劑(美國Invitrogen公司)，cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒和熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)試劑盒(全式金生物技術(shù)有限公司)，RIPA試劑、二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量檢測試劑盒(碧云天生物技術(shù)有限公司),超敏ECL化學(xué)發(fā)光液(美國Millipore公司)，緊密連接蛋白-1(ZO-1)、HIF-1α抗體(美國Proteintech公司)，VEGFA抗體(上海生工生物工程股份有限公司)，白細(xì)胞介素(IL)-1β抗體、IL-18抗體、兔單克隆抗β-actin抗體、辣根過氧化物酶(HRP)-山羊抗兔IgG二抗(美國ABclonal公司)。引物由尚亞生物技術(shù)有限公司合成。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)ARPE-19細(xì)胞采用含體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清、100 U·mL-1青霉素和 100 U·mL-1鏈霉素的DMEM完全培養(yǎng)基，在37℃、體積分?jǐn)?shù)5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組及干預(yù)將ARPE-19細(xì)胞隨機(jī)分為正常糖組(NC組，培養(yǎng)基內(nèi)含5.5 mmol·L-1葡萄糖)、高糖組(HG組，培養(yǎng)基內(nèi)含25.0 mmol·L-1葡萄糖)以及分別加入不同濃度(100 μmol·L-1、200 μmol·L-1、400 μmol·L-1)CoCl2的干預(yù)組。參考文獻(xiàn)[10]，用不同濃度(0.5 μmol·L-1、1.0 μmol·L-1、2.0 μmol·L-1及3.0 μmol·L-1)的NK分別干預(yù)ARPE-19細(xì)胞篩選適宜濃度。NK處理組(NK+HG+CoCl2組)是在25.0 mmol·L-1葡萄糖和200 μmol·L-1CoCl2干預(yù)前用1.0 μmol·L-1NK預(yù)處理ARPE-19細(xì)胞4 h。每組細(xì)胞干預(yù)培養(yǎng)24 h后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.4 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察將分組培養(yǎng)24 h后的ARPE-19細(xì)胞置于倒置顯微鏡下，觀察各組細(xì)胞的形態(tài)變化。

1.5 CCK-8法檢測細(xì)胞活力將正常培養(yǎng)的ARPE-19細(xì)胞以每孔5×103個(gè)接種到96孔板中，24 h后棄培養(yǎng)液，每孔加入100 μL無血清培養(yǎng)基，進(jìn)行分組干預(yù)，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。干預(yù)24 h后，每孔加入10 μL的CCK-8溶液，繼續(xù)培養(yǎng)3 h后用酶標(biāo)儀檢測450 nm處各孔的吸光度(A)，計(jì)算細(xì)胞活力。細(xì)胞活力=(A實(shí)驗(yàn)組-A空白孔)/(A正常對(duì)照組-A空白孔)×100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.6 Western blot檢測蛋白表達(dá)水平用RIPA裂解液萃取各組 ARPE-19細(xì)胞的蛋白，BCA法測定蛋白濃度，各取20 μg的蛋白進(jìn)行Western blot 檢測。50 g·L-1的脫脂奶粉封閉后分別加入β-actin(150 000)、ZO-1(11000)、HIF-1α(11000)及VEGFA(11000)的一抗，4 ℃搖床孵育過夜。TBST洗滌后室溫孵育 HRP-羊抗兔IgG二抗(15000)1 h，TBST洗滌后加入超敏ECL化學(xué)發(fā)光液，用化學(xué)發(fā)光成像分析儀顯影。采用 ImageJ軟件進(jìn)行圖像處理與分析。以β-actin作為內(nèi)參，以目的蛋白與β-actin的蛋白產(chǎn)物條帶灰度值之比作為其蛋白的相對(duì)表達(dá)量，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.7 RT-qPCR檢測mRNA的表達(dá)用Trizol試劑提取不同處理后各組 ARPE-19細(xì)胞的總RNA。Nanodrop儀器測定RNA的濃度和純度。用cDNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，然后使用RT-qPCR試劑盒進(jìn)行RT-qPCR檢測，所有操作均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。設(shè)定 PCR程序：94 ℃預(yù)變性30 s，94 ℃變性30 s，60 ℃退火15 s，72 ℃延伸 10 s，擴(kuò)增40個(gè)循環(huán)。使用2-ΔΔCt方法定量表達(dá)水平。利用NCBI進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，引物序列見表1。

表1 RT-qPCR引物序列

2 結(jié)果

2.1 不同濃度的葡萄糖和CoCl2對(duì)ARPE-19細(xì)胞活力的影響CCK-8法檢測結(jié)果見圖1。由圖1可見，隨著CoCl2濃度的升高，干預(yù)組中ARPE-19細(xì)胞的活力呈明顯下降趨勢，同時(shí)可見HG+200 μmol·L-1CoCl2組和HG+400 μmol·L-1CoCl2組的ARPE-19細(xì)胞活力分別較NC+200 μmol·L-1CoCl2組、NC+400 μmol·L-1CoCl2組明顯降低(均為P<0.05)。HG組與NC組細(xì)胞活力相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，其他處理組細(xì)胞活力均較NC組明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.05)。當(dāng)CoCl2濃度增加為400 μmol·L-1時(shí)，ARPE-19細(xì)胞活力明顯降低，說明400 μmol·L-1的CoCl2對(duì)細(xì)胞損害嚴(yán)重。

圖1 各組ARPE-19細(xì)胞活力 與NC組比較，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.000 1；相同CoCl2濃度的兩組間比較，#P<0.05。

2.2 不同濃度葡萄糖和CoCl2對(duì)ARPE-19細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響ARPE-19細(xì)胞分組處理24 h后倒置顯微鏡下觀察可見，NC組細(xì)胞呈長梭形，單層伸展，貼壁生長，鑲嵌式排列，邊界清晰，形態(tài)規(guī)整，分布均勻，狀態(tài)良好；HG組細(xì)胞與NC組細(xì)胞相比未見明顯形態(tài)學(xué)變化。無論NC組還是HG組，隨著CoCl2作用濃度增加，ARPE-19細(xì)胞梭形扭曲逐漸嚴(yán)重，部分細(xì)胞縮小變圓，邊界不清，排列雜亂，細(xì)胞密度較低，生長狀態(tài)不佳。當(dāng)CoCl2濃度為400 μmol·L-1時(shí)，細(xì)胞形態(tài)明顯扭曲皺縮，細(xì)胞密度明顯降低，生長狀態(tài)差(圖2)。綜合CCK-8法檢測結(jié)果和細(xì)胞形態(tài)變化分析，當(dāng)CoCl2濃度為400 μmol·L-1時(shí)，細(xì)胞活力明顯降低，失去正常的細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)，細(xì)胞損害嚴(yán)重，因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)中將不再用400 μmol·L-1的CoCl2進(jìn)行干預(yù)。

圖2 各組處理24 h后的ARPE-19細(xì)胞形態(tài)

2.3 不同處理組細(xì)胞中ZO-1、HIF-1α和VEGFA蛋白的表達(dá)變化Western blot檢測結(jié)果顯示，與NC組比較，不同濃度CoCl2均可使ARPE-19細(xì)胞中ZO-1蛋白的表達(dá)水平明顯降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.05)，HG+200 μmol·L-1CoCl2組細(xì)胞中ZO-1蛋白的表達(dá)水平降低最為明顯(P<0.01)。相同濃度CoCl2作用時(shí)，聯(lián)合HG組均較聯(lián)合NC組ARPE-19細(xì)胞中ZO-1蛋白表達(dá)降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.05)。隨著葡萄糖和CoCl2濃度的升高，處理組細(xì)胞中HIF-1α和VEGFA蛋白的表達(dá)量均明顯增加，且呈濃度依賴性,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.05)。相同濃度CoCl2作用時(shí)，聯(lián)合HG組均較聯(lián)合NC組ARPE-19細(xì)胞中HIF-1α和VEGFA蛋白的表達(dá)水平增加明顯，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.05)(圖3)。

圖3 各組ARPE-19細(xì)胞中ZO-1、HIF-1α及VEGFA蛋白的表達(dá) 1：NC組；2：NC+100 μmol·L-1 CoCl2組；3：NC+200 μmol·L-1 CoCl2組；4：HG組；5：HG+100 μmol·L-1 CoCl2組；6：HG+200 μmol·L-1 CoCl2組。與NC組比較，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；相同CoCl2濃度的兩組間比較，#P<0.05，##P<0.01。

2.4 不同處理組細(xì)胞中HIF-1α、VEGFA、IL-1β和IL-18 mRNA的表達(dá)水平RT-qPCR結(jié)果顯示，與NC組比較，不同處理組ARPE-19細(xì)胞中HIF-1α mRNA的表達(dá)量均明顯升高，且具有CoCl2濃度依賴性，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.01)。NC+100 μmol·L-1CoCl2組ARPE-19細(xì)胞中VEGFA mRNA的表達(dá)水平較NC組有所增加，但是差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而其余處理組中VEGFA mRNA的表達(dá)水平均較NC組明顯升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.05)。相同濃度CoCl2作用時(shí)，聯(lián)合HG組ARPE-19細(xì)胞中HIF-1α和VEGFA mRNA表達(dá)均較聯(lián)合NC組明顯增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.01)。各處理組ARPE-19細(xì)胞中IL-18和IL-1β mRNA的表達(dá)量均較NC組明顯升高，且具有CoCl2濃度依賴性，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.01)。100 μmol·L-1CoCl2處理細(xì)胞時(shí)，聯(lián)合HG組較聯(lián)合NC組ARPE-19細(xì)胞中IL-18 mRNA的表達(dá)量上升，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。200 μmol·L-1CoCl2處理細(xì)胞時(shí)，聯(lián)合HG組較聯(lián)合NC組細(xì)胞中IL-18 mRNA的表達(dá)量略有升高，但是差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。相同濃度CoCl2作用時(shí)，聯(lián)合HG組ARPE-19細(xì)胞中IL-1β mRNA的表達(dá)量較聯(lián)合NC組增加均不顯著，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P>0.05)(圖4)。

圖4 各組ARPE-19細(xì)胞中HIF-1α、VEGFA、IL-1β和IL-18 mRNA的表達(dá) 1：NC組；2：NC+100 μmol·L-1 CoCl2組；3：NC+200 μmol·L-1 CoCl2組；4：HG組；5：HG+100 μmol·L-1 CoCl2組；6：HG+200 μmol·L-1 CoCl2組。與NC組比較，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.000 1；相同CoCl2濃度的兩組間比較，##P<0.01，###P<0.001，####P<0.000 1。

綜合以上結(jié)果分析可得，HG+200 μmol·L-1CoCl2干預(yù) ARPE-19細(xì)胞后，細(xì)胞中相關(guān)因子表達(dá)變化顯著，因此，后續(xù)研究中以HG+200 μmol·L-1CoCl2作為高糖缺氧損傷的細(xì)胞模型(即為HG+CoCl2組)。

2.5 不同濃度NK對(duì)ARPE-19細(xì)胞活力的影響CCK-8法檢測結(jié)果見圖5。由圖5可見，隨著NK濃度升高，ARPE-19細(xì)胞的活力呈逐漸降低趨勢，與NC組相比，2.0 μmol·L-1和3.0 μmol·L-1的NK處理細(xì)胞后，細(xì)胞活力明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.01)，說明濃度高于2.0 μmol·L-1的NK能抑制ARPE-19細(xì)胞的活力，因此選擇1.0 μmol·L-1的NK進(jìn)行后續(xù)研究。

圖5 不同濃度NK對(duì)ARPE-19細(xì)胞活力的影響 與NC組比較，**P<0.01，***P<0.001。

2.6 NK對(duì)高糖缺氧損傷的ARPE-19細(xì)胞中ZO-1、HIF-1α和VEGFA蛋白表達(dá)的影響Western blot檢測結(jié)果顯示，與NC組比較，HG+CoCl2組ARPE-19細(xì)胞中ZO-1蛋白相對(duì)表達(dá)量均明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，HIF-1α和VEGFA蛋白相對(duì)表達(dá)量均明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.000 1)。與HG+CoCl2組比較，NK+HG+CoCl2組ARPE-19細(xì)胞中HIF-1α和VEGFA蛋白相對(duì)表達(dá)量均明顯降低(均為P<0.001)，而ZO-1蛋白相對(duì)表達(dá)量明顯升高(P<0.05)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與NC組比較，NK+HG+CoCl2組ARPE-19細(xì)胞中ZO-1蛋白相對(duì)表達(dá)量降低(P<0.001)，HIF-1α和VEGFA蛋白相對(duì)表達(dá)量升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.05)(圖6)。NK可以升高高糖缺氧損傷的ARPE-19細(xì)胞中ZO-1蛋白的表達(dá)，并降低HIF-1α和VEGFA蛋白表達(dá)，說明NK對(duì)高糖缺氧誘導(dǎo)的ARPE-19細(xì)胞損傷可能具有保護(hù)作用。

圖6 Western blot檢測NK對(duì)高糖缺氧損傷的ARPE-19細(xì)胞中ZO-1、HIF-1α及VEGFA蛋白表達(dá)的影響 1：NC組；7：HG+CoCl2組；8：NK+HG+CoCl2組。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.000 1。

2.7 NK對(duì)高糖缺氧損傷的ARPE-19細(xì)胞中HIF-1α和VEGFA mRNA表達(dá)的影響RT-qPCR結(jié)果顯示，與NC組相比，HG+CoCl2組ARPE-19細(xì)胞中HIF-1α、VEGFA mRNA的表達(dá)量均明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.000 1)。與HG+ CoCl2組相比，NK+ HG+CoCl2組ARPE-19細(xì)胞中HIF-1α、VEGFA mRNA的表達(dá)量均明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.001)。與NC組比較，NK+HG+CoCl2組ARPE-19細(xì)胞中HIF-1α、VEGFA mRNA的表達(dá)量均升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(圖7)。NK可以降低高糖缺氧損傷的ARPE-19細(xì)胞中HIF-1α和VEGFA mRNA的表達(dá)水平，再次說明NK對(duì)高糖缺氧誘導(dǎo)的ARPE-19細(xì)胞損傷可能具有保護(hù)作用。

圖7 NK對(duì)高糖缺氧損傷的ARPE-19細(xì)胞中HIF-1α及VEGFA mRNA表達(dá)水平的影響 1：NC組；7：HG+CoCl2組；8：NK+HG+CoCl2組。*P<0.05，***P<0.001，****P<0.000 1。

3 討論

DR是一種復(fù)雜的代謝性疾病，其病理改變過程不僅與葡萄糖代謝異常有關(guān)，還與炎癥和細(xì)胞氧化應(yīng)激密切相關(guān)，最終可導(dǎo)致嚴(yán)重的視力障礙甚至失明[11-12]。正常條件下，RPE細(xì)胞通過其物理外屏障、促血管生成因子與抑制血管生成因子之間的動(dòng)態(tài)平衡，可以有效地抑制視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜新生血管的形成，當(dāng)視網(wǎng)膜發(fā)生疾病如DR或損傷時(shí)，視網(wǎng)膜血管閉塞，組織處于相對(duì)缺氧狀態(tài)，血管通透性增加，緊密連接破壞(如ZO-1和閉鎖蛋白的減少)，細(xì)胞中VEGF表達(dá)增多，脈絡(luò)膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖遷移至視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮下形成脈絡(luò)膜新生血管，啟動(dòng)新生血管性眼病的發(fā)生。因此，DR的發(fā)生發(fā)展與RPE細(xì)胞的損傷及功能異常密切相關(guān)[13-15]。

有研究應(yīng)用CoCl2制作缺氧模型，可能的原因是CoCl2降低脯氨酰羥化酶的活性，增強(qiáng)特異性轉(zhuǎn)錄因子HIF-1α的穩(wěn)定性，提高細(xì)胞內(nèi)HIF-1α的轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)水平，進(jìn)一步激活下游調(diào)控因子，使VEGF、PDGF等分泌增加，參與新生血管的形成，這與在缺氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)可達(dá)到相同的缺氧效果[16]。但是單純?nèi)毖醪⒉荒苣MDR的高糖病理環(huán)境，因此，本研究參考已有的報(bào)道，利用葡萄糖和CoCl2建立高糖缺氧的細(xì)胞損傷模型來體外模擬DR相似的體內(nèi)環(huán)境[17]，結(jié)果顯示，25.0 mmol·L-1的葡萄糖+200 μmol·L-1的CoCl2作用于ARPE-19細(xì)胞后，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，細(xì)胞中HIF-1α和VEGFA的蛋白和mRNA表達(dá)、IL-18和IL-1β的mRNA表達(dá)均明顯升高，因此，可以用25.0 mmol·L-1的葡萄糖+200 μmol·L-1的CoCl2干預(yù) ARPE-19細(xì)胞來模擬DR的相似病理環(huán)境進(jìn)行后續(xù)研究。

NK也稱為枯草納豆激酶，是由枯草芽孢桿菌分泌表達(dá)的一種堿性絲氨酸蛋白酶，研究表明，NK對(duì)心血管系統(tǒng)疾病發(fā)揮多種保護(hù)作用[9]。除此之外，NK已被證明具有多種生物學(xué)功能，包括抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗高血壓、抗血小板、降脂、抗炎和神經(jīng)保護(hù)作用[18-22]。近期研究表明，NK可以抑制脂多糖誘導(dǎo)的炎癥和氧化應(yīng)激損傷[9]，同時(shí)NK可以抑制小鼠氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變模型中視網(wǎng)膜新生血管的形成[10]。眾所周知，DR的主要病理特征包括炎癥、氧化應(yīng)激損傷、神經(jīng)結(jié)構(gòu)和功能損害等，我們大膽推測，NK可能對(duì)DR具有保護(hù)作用。因此，本研究采用NK對(duì)高糖缺氧損傷的ARPE-19細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，分析NK對(duì)高糖缺氧損傷的ARPE-19細(xì)胞的作用。本研究結(jié)果表明，NK干預(yù)后，高糖缺氧損傷的ARPE-19細(xì)胞中HIF-1α、VEGFA的蛋白和mRNA的表達(dá)下降，提示NK對(duì)高糖缺氧損傷的ARPE-19細(xì)胞具有保護(hù)作用，但是其作用的具體機(jī)制尚不清楚。

綜上所述，本研究證實(shí)了高糖和一定濃度CoCl2作用下，ARPE-19細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，細(xì)胞中ZO-1、HIF-1α、VEGFA、IL-18等因子表達(dá)水平改變，因此，可以體外采用25.0 mmol·L-1的葡萄糖+200 μmol·L-1的CoCl2干預(yù) ARPE-19細(xì)胞來模擬DR的相似病理環(huán)境。由于NK可以降低高糖缺氧損傷的ARPE-19細(xì)胞中HIF-1α、VEGFA的蛋白和mRNA表達(dá)，所以我們推測，NK對(duì)高糖缺氧損害的ARPE-19細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用。然而本研究僅為體外細(xì)胞研究，尚需要進(jìn)一步開展動(dòng)物研究，探討并明確NK對(duì)高糖缺氧損害的ARPE-19細(xì)胞的作用及分子機(jī)制，為預(yù)防和治療DR提供新的靶向目標(biāo)。