采血管中添加劑與血樣中乙醇含量的相關(guān)性研究

鄧 啟

廣東恒安司法鑒定所，廣東 云浮 527300

乙醇檢測在司法實(shí)踐中有著重要意義，不僅僅是測定患者體內(nèi)酒精濃度的標(biāo)準(zhǔn)，還是確認(rèn)受檢者酒后駕車的證據(jù)。然而在司法實(shí)踐中，乙醇檢測結(jié)果容易受到多種因素影響，采集、包裝、檢測技術(shù)都會導(dǎo)致乙醇含量檢測結(jié)果的偏差，從而導(dǎo)致結(jié)果失準(zhǔn)的問題［1］。這不僅不利于受檢者行為性質(zhì)的認(rèn)定，在實(shí)際的司法活動中也會影響到其行為后果的認(rèn)定。因此為了提高乙醇測定結(jié)果的可靠性，有效推進(jìn)社會法治的進(jìn)行，我們務(wù)必要做好檢測過程中的質(zhì)量控制，明確影響測定結(jié)果的因素，找到其中的變化規(guī)律［2］。本文主要就采血管中添加劑差異對血樣乙醇含量測定結(jié)果影響進(jìn)行研究與評價，從而找到合適的采血管添加劑，或者明確添加劑對乙醇測定結(jié)果的影響，形成一套相對完備、客觀的乙醇含量測定標(biāo)準(zhǔn)?，F(xiàn)做以下報(bào)道：

一、資料與方法

（一）儀器和試劑

上海靈華氣相色譜儀GC9890B（單進(jìn)樣口雙色譜柱雙檢測器），上海思達(dá)自動頂空進(jìn)樣器HS-9A，氫火焰離子化檢測器（FID），上海靈華氣相色譜工作站。

無水乙醇和叔丁醇均為色譜純［3］。

乙醇標(biāo)準(zhǔn)液制備：乙醇母液——在100ml容量瓶中加入1/3超純水后將容量瓶置入分析天平中去皮，再用移液槍往容量瓶中加入1.0010g的無水乙醇，加超純水至容量瓶100ml刻度線，搖勻。得1000mg/100ml乙醇母液。用5ml分刻度吸管準(zhǔn)確吸取5ml乙醇母液置于已經(jīng)加入1/2超純水的50ml容量瓶中，容量瓶加水至50ml刻度線后搖勻。得100mg/100ml乙醇標(biāo)準(zhǔn)液。

叔丁醇內(nèi)標(biāo)工作液的制備：在100ml容量瓶中加入1/3超純水后將容量瓶置入分析天平中去皮然后用移液槍往容量瓶中加入0.5000g的叔丁醇后加超純水至100ml刻度線，得5mg/ml叔丁醇母液。用5ml分刻度吸管吸取4ml叔丁醇母液定容500ml搖勻后濃度為40μg/ml叔丁醇內(nèi)標(biāo)工作液［4］。

（二）方法

1.樣本處理及測定規(guī)則

取0.1ml乙醇標(biāo)準(zhǔn)液，置于頂空瓶內(nèi)，加0.5ml叔丁醇內(nèi)標(biāo)工作液，鋁蓋密封墊密封后混勻，放入頂空進(jìn)樣器自動進(jìn)樣色譜檢測分析，內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定量［5］。乙醇標(biāo)準(zhǔn)液的檢測結(jié)果為103.50mg/100ml。

分別用移液槍吸取2ml乙醇標(biāo)準(zhǔn)液于山東省成武縣華博醫(yī)療器械有限公司5ml規(guī)格（批次：20220105）EDTA-K2采血管、深圳美訊醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科技有限公司2ml規(guī)格（批次：202112305）檸檬酸鈉（1∶9）采血管、1.6ml規(guī)格（批次：20200528）檸檬酸鈉（1∶4）采血管、4ml規(guī)格（批次：2022 0113）肝素鋰采血管內(nèi)?；靹?，每種采血管平行測定9次。

2.色譜條件

自動頂空進(jìn)樣器工作條件：頂空瓶平衡溫度80℃，環(huán)溫度90℃，傳輸管溫度105℃；樣品平衡時間 10min；加壓時間 0.2min；充樣時間 0.2min；充樣平衡 0.05min；進(jìn)針時間 1.00min；清掃時間1.00min；載氣 N2純度 99.999%，載氣閥刻度4.0；加壓閥刻度 6.0。

氣相色譜儀工作條件：進(jìn)樣口溫度150℃柱箱溫度：60℃（恒溫），色譜柱（DB-ALC1 30m×0.530 mm×3.00μm），清掃閥刻度：8.0；尾吹閥刻度：5.0；檢測器：250℃（FID）；燃?xì)猓篐2 閥刻度：4.5；空氣閥刻度：7.5；樣品分析時間 6min。

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線

購買濃度為 0.1、0.2、0.5、0.8、1.0、2.0、3.0mg/ml有證乙醇標(biāo)準(zhǔn)液，用移液槍分別吸取系列濃度標(biāo)準(zhǔn)液0.1ml于頂空瓶內(nèi)，各加0.5ml（40.0μg/ml）叔丁醇內(nèi)標(biāo)工作液，鋁蓋密封墊密封后混勻，放入頂空進(jìn)樣器自動進(jìn)樣色譜檢測分析，每個濃度平行測定2份。以乙醇與叔丁醇色譜峰面積比（y）對乙醇質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。

（三）觀察指標(biāo)

1.對不同添加劑采血管下樣本中乙醇含量測定結(jié)果進(jìn)行評價和對比，分析不同添加劑對血樣中乙醇測定結(jié)果的影響特點(diǎn)。

2.在對比中總結(jié)不同添加劑對血樣中乙醇測定結(jié)果的影響，以此為基礎(chǔ)提高乙醇測定準(zhǔn)確度的策略。

（四）統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

研究相關(guān)數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，計(jì)數(shù)資料率表示，若涉及組間對比則分別經(jīng)t檢驗(yàn)或卡方檢驗(yàn)，檢驗(yàn)值P〈0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時不同添加劑采血管連續(xù)9次乙醇測定結(jié)果使用Excel軟件進(jìn)行匯總處理。

二、結(jié)果

（一）基本結(jié)果

從表1匯總結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，不同添加劑采血管血氧乙醇測定結(jié)果存在較大差異，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〈0.05），提示不同類型添加劑對血樣中乙醇測定結(jié)果的影響是不同的。

表1 不同添加劑采血管連續(xù)9次乙醇測定結(jié)果

單純就結(jié)果來看，采血管中添加劑為EDTA-K2和肝素鋰時乙醇含量測定結(jié)果最接近準(zhǔn)確值，而檸檬酸鈉添加劑采血管樣本的乙醇測定結(jié)果均低于準(zhǔn)確值且檸檬酸鈉添加比率越低測定結(jié)果偏差越大，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〈0.05）。

（二）精密度變化分析

表2為精密度變化匯總，以表1中數(shù)據(jù)為基準(zhǔn)，其中當(dāng)日數(shù)據(jù)為應(yīng)試溶液配置完成后24h檢測結(jié)果，次日數(shù)據(jù)為應(yīng)試溶液配置完成后48h檢測結(jié)果，第三日數(shù)據(jù)為應(yīng)試溶液配置完成后72h檢測結(jié)果，連續(xù)平行檢測9次得到結(jié)果偏差和基準(zhǔn)值之間的差異為精密度變化范圍，取最大差異和最小差異為界限。就精密度檢測結(jié)果來看，隨著溶液配置時間的增加，乙醇檢測結(jié)果偏差值越大，推測與乙醇緩慢揮發(fā)的特征有關(guān)。而不同添加劑采血管中樣本其精密度變化范圍和特點(diǎn)不同，其中檸檬酸鈉添加劑采血管中樣本乙醇檢測精準(zhǔn)度變化幅度最小，且檸檬酸鈉添加量比率越低偏差值變化越小，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〈0.05），肝素鋰和EDTA-K2添加劑采血管中樣本乙醇檢測結(jié)果精密度變化幅度較大，精密度變化特點(diǎn)和檸檬酸鈉添加劑采血管相比存在顯著差異（P〈0.05）。推測導(dǎo)致上述結(jié)果的原因主要有兩點(diǎn)：1.隨著時間的推移，溶液中乙醇會緩慢揮發(fā)，不同的添加劑會影響到乙醇的揮發(fā)速度，從而對不同時間節(jié)點(diǎn)乙醇含量測定結(jié)果的影響幅度產(chǎn)生差異。2.不同添加劑對血液凝聚狀態(tài)的影響不同，而血液的凝聚程度會影響到色譜相分析結(jié)果導(dǎo)致乙醇檢測結(jié)果上的偏差。

表2 不同添加劑下乙醇測定精密度變化

三、討論

根據(jù)GB19522-2010《車輛駕駛?cè)藛T血液、呼氣酒精含量閾值與檢驗(yàn)》，車輛駕駛員血液中的乙醇含量是酒后駕駛認(rèn)定的重要訴訟證據(jù)，然而血樣采集、送檢不規(guī)范都可能影響檢測結(jié)果，由于GA/T1556-2019《道路交通執(zhí)法人體血液采集技術(shù)規(guī)范》未對交通執(zhí)法活動中車輛駕駛?cè)藛T的血液采集用何種抗凝劑采血管進(jìn)行明文規(guī)定，這就導(dǎo)致乙醇檢測結(jié)果可靠性存在偏差，因此有必要就不同添加劑采血管對血樣中乙醇檢測的影響進(jìn)行研究，總結(jié)不同添加劑對乙醇檢測的影響［6］。

采血管大體上可分為三類：1.無添加劑：此管通常無特殊的添加劑，只在內(nèi)壁上涂有掛壁的藥劑，常用于腫瘤標(biāo)志物檢測、血清學(xué)檢測等；2.促凝劑：此管除了內(nèi)壁涂有防止掛壁的硅油外，管內(nèi)還會添加促凝試劑，常應(yīng)用于急診；3.抗凝劑：在采血管中的抗凝劑能對抗血液凝集，常用于血液成分檢測。

乙醇檢測中所用的采血管則是抗凝劑采血管，是為了獲取最接近采血時血液中的乙醇含量［7］。但添加劑的類型會影響到乙醇檢測結(jié)果，導(dǎo)致的原因主要有兩點(diǎn)：1.不同采血管中添加劑的液體體積不同，添加劑和血樣混合后對血樣的稀釋程度不同，因此在檢測時容易得到差異化的結(jié)果；2.受到檢測技術(shù)的限制，添加劑可對檢測結(jié)果產(chǎn)生干擾，從而導(dǎo)致檢測結(jié)果的偏差。因此在使用采血管時，我們要根據(jù)檢驗(yàn)成分、檢驗(yàn)技術(shù)和檢驗(yàn)?zāi)繕?biāo)來選擇合適添加劑的采血管，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

乙醇檢驗(yàn)是司法實(shí)踐中常見的檢驗(yàn)項(xiàng)目，該檢驗(yàn)結(jié)果或成為司法活動中的證據(jù)，因此務(wù)必保證乙醇檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性［8］。在本組研究中，就四種不同添加劑采血管的乙醇含量檢測結(jié)果進(jìn)行了對比和評價，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同添加劑采血管乙醇檢測結(jié)果存在差異，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〈0.05）；而根據(jù)檢測結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)，EDTA-K2和肝素鋰時乙醇含量測定結(jié)果最接近準(zhǔn)確值，其中EDTA-K2添加劑采血管檢測結(jié)果略低于準(zhǔn)確值，肝素鋰添加劑采血管檢測結(jié)果則略高于準(zhǔn)確值，而出于司法的公正性考慮，EDTA-K2添加劑采血管應(yīng)當(dāng)是血樣乙醇檢測的首選。當(dāng)然在使用其他類型添加劑采血管進(jìn)行檢測時，我們可以通過建立相應(yīng)算法的方式來規(guī)避檢測結(jié)果偏差導(dǎo)致的誤判。此外，在本研究中還對檢測精確度衰減進(jìn)行了評價，單純就結(jié)果來看采樣后檢測時間越長偏差越大，因此在司法實(shí)踐中要盡可能優(yōu)化血樣送檢流程，做到采血后第一時間送檢。