吡侖帕奈調(diào)控MAPK信號(hào)通路抗偏頭痛作用及其機(jī)制

翟慶齡，謝丹娜，王凱新，王雪貞，陳金波，董曉夢(mèng)

偏頭痛是世界上最常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病之一，許多信號(hào)傳導(dǎo)通路參與偏頭痛發(fā)病機(jī)制，如絲裂原活化蛋白激酶通路(mitogen actived protein kinase, MAPK)通路、一氧化氮(nitric oxide, NO)/可溶性鳥苷酸環(huán)化酶(soluble guanylate cyclase，sGC)/環(huán)磷酸鳥苷(cyclic guanosinemonophosphate, cGMP)通路等。垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(pituitary adenylate-cyclase-activating polypeptide，PACAP)已經(jīng)被證明是腦循環(huán)中作用強(qiáng)大的舒張因子，是偏頭痛關(guān)鍵生物學(xué)標(biāo)志物[1]。吡侖帕奈是一種高度選擇性、非競(jìng)爭(zhēng)性的α-氨基-3-羥基-5-甲基-4-異惡唑-丙酸(amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole-propionatereceptor,AMPA)受體拮抗劑，最開始被用作治療癲癇[2],基于癲癇與偏頭痛共同的病理生理特征，可能具有治療偏頭痛的作用。該研究應(yīng)用腹腔注射硝酸甘油建立大鼠偏頭痛模型，研究吡侖帕奈對(duì)偏頭痛大鼠的影響，同時(shí)檢測(cè)三叉神經(jīng)節(jié)(trigeminal ganglion，TG)中PACAP及MAPK信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)，以探討吡侖帕奈的抗偏頭痛作用及其機(jī)制，為抗偏頭痛藥物的研發(fā)提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組清潔級(jí)6周齡成年雄性SD大鼠40只，體質(zhì)量180～220 g，購(gòu)自濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司，許可證號(hào)：SCXK(魯)2019-0003。飼養(yǎng)環(huán)境溫度控制在21～22 ℃，保持12 h/12 h明暗間隔的人工晝夜節(jié)律，自由攝食和飲水。對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行的所有研究行為均嚴(yán)格遵照國(guó)際疼痛學(xué)會(huì)(International Association for the Study of Pain，IASP)的相關(guān)動(dòng)物保護(hù)及使用規(guī)定。大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為：空白組、硝酸甘油(nitroglycerin, NTG)組、吡侖帕奈50 μg/kg+NTG預(yù)防組、吡侖帕奈100 μg/kg+NTG預(yù)防組，每組10只。

1.2 方法

1.2.1偏頭痛大鼠模型建立 采用Pradhan改良的方法進(jìn)行造模，即每隔1 d給予NTG組、吡侖帕奈50 μg/kg+NTG預(yù)防組、吡侖帕奈100 μg/kg+NTG預(yù)防組腹腔注射稀釋后的硝酸甘油注射液(NTG 10 mg/kg)，空白組腹腔注射等量生理鹽水；共注射5次，即在第1、3、5、7、9天時(shí)完成各組注射。

1.2.2預(yù)防組給藥 造模前30 min吡侖帕奈50 μg/kg+NTG預(yù)防組、吡侖帕奈100 μg/kg+NTG預(yù)防組分別給予腹腔注射吡侖帕奈50、100 μg/kg，吡侖帕奈濃度設(shè)置參考Hara et al[3]的研究。實(shí)驗(yàn)流程設(shè)計(jì)示意圖見圖1。

圖1 研究的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.3眶周痛覺閾值測(cè)定 實(shí)驗(yàn)在藥物注射后1 h進(jìn)行。研究人員用手約束每只老鼠，防止它們逃離。用von Frey纖維絲懸于大鼠一側(cè)眶周皮膚上，相互垂直，從最小強(qiáng)度0.08 g開始刺激眶周皮膚，逐步增加至最大強(qiáng)度300 g。以纖維絲彎曲90°為標(biāo)準(zhǔn)，并在刺激部位停留2 s，刺激5次為1循環(huán)，每次刺激之前間隔3 s。若在5次刺激中有3次及以上出現(xiàn)大鼠用前爪撥開纖維絲、發(fā)動(dòng)攻擊或縮頭縮爪等行為表現(xiàn)，則判定該大鼠出現(xiàn)痛覺超敏，并記錄此時(shí)刺激強(qiáng)度(g)為疼痛閾值。若刺激強(qiáng)度達(dá)到300 g，但仍未出現(xiàn)上述痛覺超敏表現(xiàn)，則將300 g記為其痛閾值。實(shí)驗(yàn)表明，出現(xiàn)痛覺超敏的大鼠，其疼痛閾值多在20 g以下。

1.2.4爬籠及梳理面部行為測(cè)試 頭部梳理行為為大鼠用前爪或后爪清潔雙側(cè)頭部或面部。爬籠次數(shù)與梳頭時(shí)間的增加被認(rèn)為是自發(fā)性面部疼痛的一個(gè)指標(biāo)。用攝像機(jī)記錄并計(jì)算各組大鼠梳理面部的時(shí)間及爬籠子的次數(shù)。在腹腔注射NTG后30 min，將動(dòng)物置于樹脂玻璃箱中，首先適應(yīng)15 min，然后在箱前30 cm處放置攝像機(jī)，記錄20 min。

1.2.5畏光行為測(cè)試 偏頭痛的另一個(gè)特征是畏光，并且暴露在光線下會(huì)增加偏頭痛的嚴(yán)重程度。實(shí)驗(yàn)第9天給藥后1 h進(jìn)行畏光行為測(cè)試。明暗箱是一個(gè)80 cm×40 cm×35 cm的樹脂玻璃箱，被隔間分隔成兩個(gè)區(qū)域。在明暗箱里，隔間用白紙包裹，沒有蓋子，使用800流明LED燈照明。而另一個(gè)隔間用黑紙包裹，并蓋上蓋子。箱子中間有一個(gè)12 cm×12 cm的通道，大鼠可以自由穿梭。通過(guò)攝像裝置觀察并記錄10 min內(nèi)首次進(jìn)入明室的潛伏時(shí)間、在明箱的活動(dòng)時(shí)間及穿梭次數(shù)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中保持外界環(huán)境安靜，每次放入大鼠前要清理糞便并噴灑酒精去除異味，以便進(jìn)行下一組測(cè)試，確保每次檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1.2.6凈體質(zhì)量增長(zhǎng)量和凈食物消耗量測(cè)量 在每次注射藥物之前稱量大鼠的體質(zhì)量和食物，計(jì)算出體質(zhì)量和凈食物消耗量。

1.2.7免疫熒光染色 在第9天完成行為測(cè)定后用10%的水合氯醛深麻醉大鼠，用0.1 mol/L PBS溶液心臟灌流，再用4%多聚甲醛固定，取空白組及NTG組大鼠TG，經(jīng)30%蔗糖水脫水后行冰凍切片，切片厚度為40 μm。經(jīng)封閉液室溫封閉1 h后，一抗PACAP(美國(guó)Santa公司提供,貨號(hào)：sc-166180)、二抗Alexa fluor488驢抗鼠(1 ∶400)室溫孵育4 h，封片劑封片并用共聚焦顯微鏡觀察TG染色效果并拍照。

1.2.8Western blot實(shí)驗(yàn) 同1.2.7項(xiàng)深麻醉大鼠，置于冰上取各組TG放入滅菌EP管中加入裂解液及相應(yīng)的磷酸酶抑制劑，使用勻漿器將組織磨成勻漿狀態(tài)，4 ℃、1 500 r/min離心10 min。采用BCA法檢測(cè)上清液中的蛋白濃度。加入上樣緩沖液和裂解液將蛋白樣品的濃度配平，100 ℃加熱5 min使蛋白變性，分裝后保存于-80 ℃冰箱備用。配置SDS-PAGE膠，加入蛋白質(zhì)樣本電泳后轉(zhuǎn)移到PVDF膜。將膜浸泡在封閉緩沖液置于搖床溫柔搖晃2 h；在4 ℃條件下，分別用一抗如下：PACAP抗體(購(gòu)自英國(guó)Abcam公司，批號(hào)：ab181205)；phospho-ERK1/2 (Thr202/Tyr204) 抗體 (批號(hào)：#4370)、ERK1/2抗體(批號(hào)：#9102)、phospho-JNK抗體(批號(hào)：#9251)、JNK抗體(批號(hào)：#9252)、phospho-p38MAPK抗體(批號(hào)：#9215)、p38MAPK抗體(批號(hào)：#8690)和內(nèi)參GAPDH抗體(批號(hào)：#51332)均購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology公司。將一抗置于搖床孵育過(guò)夜；TBST清洗3次，每次10 min；二抗孵育，按說(shuō)明書稀釋相應(yīng)二抗，室溫孵育置于搖床溫柔搖晃2 h；TBST清洗3次，每次15 min；Western blot條帶經(jīng)Photoshopcs6.0軟件進(jìn)行灰度掃描分析。

1.2.9RT-PCR實(shí)驗(yàn) 用RNA提取試劑盒將組織裂解稀釋提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，于-20 ℃保存。設(shè)計(jì)PACAP引物，用GAPDH作為內(nèi)參。PACAP上游引物：5′-ACTCACCTTTGGTCAATCCC-3′，下游引物：5′-TGATCCCAGGGAAGCTGAGT-3′；GAPDH上游引物：5′-CATGTGTAGCGGAGCAAGGTT-3′，下游引物：5′-TGATCCCAGGGAAGCTGAGT-3′。PCR擴(kuò)增，反應(yīng)體系20 μl，2× AceQ qPCR Green Master Mix (High ROX Premixed)10 μl、Primer 10.4 μl、Primer 20.4 μl、TemplatecDNA 1 μl、ddH2O 8.2 μl。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性5 min，95 ℃變性10 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸60 s，循環(huán)40次。采用2-ΔΔCt法計(jì)算基因相對(duì)表達(dá)量。

1.2.10ELISA實(shí)驗(yàn) 同1.2.7項(xiàng)麻醉大鼠，各組大鼠經(jīng)頸靜脈取血1.5 ml，血液靜置后放入離心機(jī)中4 ℃、4 000 r/min離心5 min后取血清，使用ELISA試劑盒檢測(cè)PACAP濃度，嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 吡侖帕奈對(duì)NTG誘導(dǎo)的畏光、偏頭痛樣疼痛、眶周痛覺閾值減低的影響與空白組相比，NTG組在明室中的時(shí)間縮短且重新進(jìn)入明室的潛伏期更長(zhǎng)，在明暗箱間穿梭次數(shù)也更少(P<0.000 1)；吡侖帕奈預(yù)處理組不僅增加了大鼠在明室停留時(shí)間(圖2A)(F=62.62,P<0.000 1)，而且還縮短了重新進(jìn)入明室的潛伏期(圖2B)(F=147.10,P<0.000 1)，增加了穿梭次數(shù)(圖2C)(F=15.03,P<0.000 1)。在觀察大鼠頭部梳理和爬籠行為時(shí)，如圖2D所示，第1次和第2次給藥后，NTG組的頭部梳理時(shí)間長(zhǎng)于空白組(P<0.05)，而吡侖帕奈100 μg/kg+NTG預(yù)防組的大鼠頭部梳理時(shí)間比NTG組短(P<0.05)；隨著注射次數(shù)增多，與NTG組相比，吡侖帕奈100 μg/kg+NTG預(yù)防組頭部梳理時(shí)間有差異(給藥因素,F=36.51,P<0.000 1；時(shí)間因素，F(xiàn)=0.09,P=0.96； 雙因素,F=0.36,P=0.97)。如圖2E所示， NTG增加了爬籠時(shí)間，吡侖帕奈50 μg/kg +NTG預(yù)防組和吡侖帕奈100 μg/kg+NTG預(yù)防組減弱了NTG誘導(dǎo)的爬籠次數(shù)增加(給藥因素,F=29.37,P<0.000 1；時(shí)間因素，F(xiàn)=1.40,P=0.24；雙因素,F=0.67,P=0.78)。第1天四組之間的眶周疼痛閾值沒有顯著差異(圖2F)。從第2次給藥開始，NTG組與空白組之間存在差異，NTG組閾值降低(P<0.05)。NTG組的閾值從第3次到第4次給藥呈現(xiàn)出進(jìn)一步降低的趨勢(shì)(P<0.01)。第2次給藥后，吡侖帕奈50 μg/kg+NTG預(yù)防組和100 μg/kg+NTG預(yù)防組的眶周疼痛閾值高于NTG組(P<0.05)。給藥3次后，NTG組的閾值低于50 μg/kg和100 μg/kg吡侖帕奈+NTG組(圖2F)(給藥因素F=23.28,P<0.000 1; 時(shí)間因素,F=4.40,P<0.001；雙因素,F=0.96,P=0.49)。注射5次給藥后，各組大鼠代謝情況并沒有顯著差異，大鼠體質(zhì)量差異、食物消耗差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。體質(zhì)量測(cè)量(圖2G)：(給藥因素,F=3.20,P=0.04；時(shí)間因素，F(xiàn)=34.27,P<0.000 1；雙因素,F=0.64,P=0.81)；凈食物消耗量(圖2H)：(給藥因素,F=4.79,P=0.01；時(shí)間因素，F(xiàn)=6.31，P<0.001；雙因素,F=1.40,P=0.17)。各組行為學(xué)數(shù)據(jù)見表1、2。

表1 各組不同時(shí)間行為學(xué)測(cè)定

表2 各組明暗箱實(shí)驗(yàn)測(cè)定

圖2 吡侖帕奈對(duì)NTG誘導(dǎo)的畏光、偏頭痛樣疼痛、眶周痛覺閾值減低的影響低A：明室停留時(shí)間；B：重新進(jìn)入明室的潛伏時(shí)間；C：穿梭次數(shù)；D：梳理頭部行為；E：爬籠行為；F：眶周痛覺閾值；G：體質(zhì)量；H：凈食物消耗量；a:空白組(n=8)；b：NTG組(n=10)；c：吡侖帕奈50 μg/kg+NTG預(yù)防組(n=7)；d：吡侖帕奈100 μg/kg+NTG預(yù)防組(n=10)；與空白組比較：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.000 1；與NTG組比較：#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001，####P<0.000 1

2.2 吡侖帕奈對(duì)NTG誘導(dǎo)的PACAP水平升高的影響免疫熒光實(shí)驗(yàn)顯示，與空白組相比，NTG組大鼠TG中PACAP水平表達(dá)升高(圖3A、B)；Western blot結(jié)果顯示，與空白組相比，NTG組中的PACAP蛋白表達(dá)升高，吡侖帕奈50 μg/kg+NTG預(yù)防組、吡侖帕奈100 μg/kg+NTG預(yù)防組PACAP蛋白的表達(dá)降低(F=25.06,P<0.000 1)。RT-qPCR分析顯示，與空白組相比，NTG組中PACAP mRNA的表達(dá)升高(F=25.06,P<0.000 1)。吡侖帕奈50 μg/kg+NTG 預(yù)防組和吡侖帕奈100 μg/kg+NTG預(yù)防組降低PACAP的表達(dá)。ELISA結(jié)果與Western bolt和RT-qPCR的結(jié)果相似，與NTG組相比，吡侖帕奈100 μg/kg+NTG下調(diào)PACAP的水平但結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(W=4.218，P=0.88)。 見圖3D。

圖3 吡侖帕奈對(duì)NTG誘導(dǎo)的PACAP水平升高的影響a:空白組TG PACAP免疫熒光圖 ×40；B: NTG組TG PACAP免疫熒光圖 ×40；C：PACAP蛋白檢測(cè)Western blot圖；D：PACAP表達(dá)水平統(tǒng)計(jì)圖；a:空白組(n=4)；b：NTG組(n=6)；c：吡侖帕奈50 μg/kg+NTG預(yù)防組(n=6)；d：吡侖帕奈100 μg/kg+NTG預(yù)防組(n=6)；與空白組比較：**P<0.01，****P<0.000 1；與NTG組比較：#P<0.05,##P<0.01，###P<0.001，####P<0.000 1

2.3 吡侖帕奈調(diào)控MAPK信號(hào)通路對(duì)偏頭痛大鼠的影響Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖4所示，與空白組相比，NTG組p-JNK、p-ERK和p-p38MAPK蛋白表達(dá)升高；而吡侖帕奈100 μg/kg+NTG預(yù)防組p-JNK(F=22.76，P<0.000 1)、p-ERK(F=11.06，P<0.001)和p-p38MAPK(F=10.49，P<0.001)蛋白表達(dá)降低(圖4B),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而注射NTG后各組JNK、ERK和p38MAPK蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖4C)。這些結(jié)果表明，NTG可以促進(jìn)MAPK通路信號(hào)傳導(dǎo)以促進(jìn)偏頭痛的病理生理過(guò)程，但吡侖帕奈100 μg/kg可以抑制MAPK通路緩解偏頭痛。

圖4 吡侖帕奈調(diào)控MAPK信號(hào)通路對(duì)偏頭痛大鼠的影響a: MAPK、p-MAPK蛋白檢測(cè)的Western blot圖；B：p-MAPK蛋白水平統(tǒng)計(jì)圖；C: MAPK蛋白水平統(tǒng)計(jì)圖；a:空白組(n=4)；b：NTG組(n=6)；c：吡侖帕奈50 μg/kg+NTG預(yù)防組(n=6)；d：吡侖帕奈100 μg/kg+NTG預(yù)防組(n=6);與空白組比較：**P<0.01；與NTG組相比較：##P<0.01，###P<0.001，####P<0.000 1

3 討論

偏頭痛為一種常見疾病，偏頭痛動(dòng)物模型提示該疾病共同之處是存在關(guān)鍵信號(hào)通路的失調(diào)。本研究使用NTG誘導(dǎo)的偏頭痛大鼠模型進(jìn)一步驗(yàn)證偏頭痛發(fā)病機(jī)制中的MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路，探討吡侖帕奈調(diào)控MAPK信號(hào)通路對(duì)偏頭痛大鼠的影響，并且首次提出吡侖帕奈可能通過(guò)調(diào)控此通路發(fā)揮緩解偏頭痛作用。

吡侖帕奈是高度選擇性的突觸后膜神經(jīng)元離子AMPA受體拮抗劑，通過(guò)與AMPA受體非競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，阻止Na+、K+單價(jià)陽(yáng)離子進(jìn)出細(xì)胞，無(wú)法引起突觸后膜去極化，因此興奮性突觸后電位無(wú)法誘發(fā)，從而抑制興奮性突觸傳遞。有研究[4]證明NTG誘導(dǎo)AMPA受體亞基GluAlSer831位點(diǎn)磷酸化是偏頭痛模型小鼠痛覺敏化的關(guān)鍵機(jī)制；通過(guò)上調(diào)鈣通透型AMPA受體進(jìn)一步促進(jìn)痛覺敏化發(fā)生。因此，AMPA受體很可能在偏頭痛發(fā)生機(jī)制——痛覺敏化中起重要作用。偏頭痛與癲癇同為發(fā)作性疾病，其病理生理、治療方法有相似之處。因此，推斷作為抗癲癇藥物上市的AMPA受體抑制劑吡侖帕奈可能具有抗偏頭痛的作用。

NTG是一種NO供體，可以在一定條件下激活鳥苷酸環(huán)化酶模擬細(xì)胞內(nèi)NO的效應(yīng)[5]。NO是調(diào)節(jié)腦血流量及動(dòng)脈直徑的重要調(diào)節(jié)因子，參與偏頭痛的急性發(fā)作；NO還可以促進(jìn)皮層擴(kuò)散性抑制(cortical spreading depression,CSD)的發(fā)生，而CSD目前被廣泛認(rèn)為是偏頭痛先兆發(fā)作的潛在機(jī)制[6]。全身注射NTG還會(huì)引發(fā)健康人的即刻頭痛和偏頭痛易感患者的偏頭痛發(fā)作[7]。本研究通過(guò)建立NTG偏頭痛大鼠模型，觀察大鼠撓頭、爬籠行為、測(cè)定眶周痛覺閾值、計(jì)算畏光行為時(shí)間，模擬偏頭痛發(fā)作的臨床表現(xiàn)和特征。從行為學(xué)角度表明吡侖帕奈具有緩解偏頭痛癥狀的作用。原發(fā)性頭痛、特別是偏頭痛，與飲食障礙有雙向關(guān)系，有研究表明，88%的女性偏頭痛患者有節(jié)食經(jīng)歷，59%會(huì)暴食、26%會(huì)催吐[8]；飲食失調(diào)患者中74%患有偏頭痛[9]。因此本實(shí)驗(yàn)初步探索了偏頭痛大鼠的飲食障礙與體質(zhì)量增減情況，然而本實(shí)驗(yàn)中，5次注射NTG后NTG組大鼠與空白組、吡侖帕奈預(yù)防組大鼠的食欲減退程度才有顯著差異，其原因可能是大鼠的飲食失調(diào)需要更長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)觀察。

PACAP在偏頭痛中的標(biāo)志性作用已被越來(lái)越多的者證實(shí)。偏頭痛學(xué)早在2009年，Schytz et al[1]首次證明靜脈輸入PACAP38會(huì)引發(fā)偏頭痛樣發(fā)作，所有的健康受試者和超過(guò)90%的偏頭痛患者在輸注PACAP后誘發(fā)偏頭痛發(fā)作。K?rtési et al[10]發(fā)現(xiàn)口面注射弗氏完全佐劑可激活大鼠三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)，導(dǎo)致三叉神經(jīng)脊束尾核大量降鈣素基因相關(guān)肽和PACAP38釋放。Syed et al[11]的一項(xiàng)離體研究使用PAC1拮抗劑逆轉(zhuǎn)了PACAP38誘導(dǎo)的大鼠腦膜中動(dòng)脈管舒張。在本實(shí)驗(yàn)，與空白組相比，NTG誘導(dǎo)的偏頭痛大鼠TG組織和血液中的PACAP表達(dá)上調(diào)，而吡侖帕奈預(yù)處理可降低NTG誘導(dǎo)的大鼠TG組織和血液中的PACAP表達(dá)。這些結(jié)果表明吡侖帕奈治療偏頭痛作用可能是通過(guò)減少偏頭痛標(biāo)志性物質(zhì)PACAP表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。

MAPK信號(hào)在偏頭痛發(fā)病機(jī)制中的作用已經(jīng)在NTG誘導(dǎo)的動(dòng)物模型中得到印證[12]。Lai et al[13]認(rèn)為鉤藤堿的抗偏頭痛作用是通過(guò)抑制由NTG激活MAPK/核因子-kB(NF-kB)完成。這些研究均表明，MAPK通路在偏頭痛的發(fā)生和維持中有著密切的關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)中NTG誘導(dǎo)的偏頭痛模型大鼠TG組織中p-JNK、p-ERK和p-p38MAPK蛋白表達(dá)升高，進(jìn)一步驗(yàn)證了MAPK信號(hào)通路在偏頭痛發(fā)病機(jī)制中的重要作用；吡侖帕奈預(yù)處理組大鼠TG組織中p-JNK、p-ERK和p-p38MAPK蛋白表達(dá)降低，提示吡侖帕奈可能通過(guò)調(diào)控MAPK信號(hào)通路達(dá)到緩解偏頭痛的效果。

綜上所述，抗癲癇藥物吡侖帕奈有緩解偏頭痛的潛力?；贜TG誘導(dǎo)的偏頭痛大鼠模型，本實(shí)驗(yàn)預(yù)給藥吡侖帕奈可以緩解偏頭痛癥狀，并且進(jìn)一步驗(yàn)證MAPK通路參與了偏頭痛的發(fā)病機(jī)制過(guò)程，吡侖帕奈可能通過(guò)調(diào)控MAPK通路緩解偏頭痛，并為偏頭痛治療藥物的研發(fā)提供驗(yàn)依據(jù)。