芪玉三龍湯通過(guò)PD-1信號(hào)通路增強(qiáng)Th1免疫反應(yīng)抑制肺癌轉(zhuǎn)移

焦安男，吳 歡，朱 潔，張 梅，李 平，李澤庚，陳 楊

在全球惡性腫瘤發(fā)病率和病死率的排名中，肺癌均居于首位[1]，其中約85%是非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)[2]，它的產(chǎn)生變化與腫瘤微環(huán)境改變及機(jī)體免疫系統(tǒng)失去平衡有緊密聯(lián)系。近幾年，免疫疾病的醫(yī)治與調(diào)節(jié)發(fā)展迅速，在NSCLC的治療中，程序性死亡蛋白-1(programmed death protein-1, PD-1)及其配體PD-L1抑制劑等的應(yīng)用取得了良好的效果。中醫(yī)藥輔助治療肺癌的效果已在多項(xiàng)研究中得到驗(yàn)證[3]，芪玉三龍湯(Qiyu Sanlong Decoction,QYSLD)處方來(lái)源基于長(zhǎng)期臨床實(shí)踐，前期研究[4-5]結(jié)果顯示QYSLD可以抑制肺癌增殖。為進(jìn)一步明確QYSLD抑制肺癌轉(zhuǎn)移的作用，該研究構(gòu)建了Lewis肺癌細(xì)胞株(lewis lung cancer cell line,LLC)細(xì)胞皮下移植瘤小鼠模型，從QYSLD通過(guò)介導(dǎo)PD-1信號(hào)通路，增強(qiáng)Th1免疫反應(yīng)，調(diào)節(jié)腫瘤免疫微環(huán)境的角度探討其對(duì)肺癌轉(zhuǎn)移影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)癌株 LLC購(gòu)自南京科白生物，用改良的RPMI-1640的培養(yǎng)基，其中包含10%胎牛血清、100 U青霉素、100 μg鏈霉素，在37 ℃含5% CO2的培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。傳代一次的時(shí)間為2～3 d，開(kāi)始用于實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞狀態(tài)為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。

1.1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 體質(zhì)量(20±2)g的無(wú)菌級(jí)雄性C57BL/6小鼠(批準(zhǔn)號(hào)：AHUCM-mouse-2019013)72只，鼠齡8周，購(gòu)自常州卡文斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，合格證號(hào)：SCXK(蘇)2011-0003，飼養(yǎng)于安徽醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心動(dòng)物房。

1.1.3實(shí)驗(yàn)藥物 QYSLD草藥(30 g黃芪、10 g玉竹、6 g壁虎、6 g地龍、20 g龍葵、20 g白花蛇舌草、20 g薏苡仁、6 g澤漆、10 g莪術(shù)及10 g貝母)購(gòu)自安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中藥房，將其放1.34 L蒸餾水(1/10，W/V)中進(jìn)行1 h的浸泡處理，武火煮沸30 min，文火60 min。用兩個(gè)70 μm白色細(xì)胞濾網(wǎng)上下疊加將提取液過(guò)濾，殘?jiān)萦?.07 L蒸餾水中，煮沸40 min。再通過(guò)兩個(gè)70 μm白色細(xì)胞濾網(wǎng)上下疊加再次過(guò)濾。在50 ℃真空中將兩種提取液混合濃縮至濃度為4.0 g/ml，制得QYSLD懸浮液。放置于4 ℃冰箱儲(chǔ)存，一周內(nèi)使用。用0.9%氯化鈉溶液將注射用順鉑(Cisplatin，DDP)稀釋至0.367 mg/ml。

1.1.4實(shí)驗(yàn)試劑 DMEM高糖細(xì)菌液、標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清FBS、磷酸鹽緩沖液PBS(美國(guó)HyClone公司)；RPMI-1640培養(yǎng)基(美國(guó)Invitrogen公司)；NH4Cl/Tris紅細(xì)胞裂解液(上海哈靈生物有限公司)；胰酶細(xì)胞消化液、青鏈霉素溶液(上海Beyotime公司)；CCK-8試劑盒、BD CBA小鼠炎癥試劑盒(上海碧云天生物技術(shù)有限公司)；皮爾斯低密度脂蛋白細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒(美國(guó)Pierce Biotechnology公司)；CD3、CD4、CD8、CD44抗體、PD1抗體(德國(guó)Merck公司)；Annexin V-PE試劑(德國(guó)Calbiochem公司)；熒光素FITC、熒光素PE-Cy5(美國(guó)Pierce公司)；絲裂霉素C(瑞士Roche公司)。

1.1.5實(shí)驗(yàn)儀器 培養(yǎng)瓶、6孔板、96孔培養(yǎng)板(美國(guó)Corning公司)；CKX41型倒置顯微鏡(日本OLYMPUS公司)；MCO-175型CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱(日本Sanyo公司)；LD4-8型臺(tái)式低速離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)；70 μm尼龍細(xì)胞過(guò)濾器(上海碧云天生物技術(shù)有限公司)；FACSCalibur 流式細(xì)胞儀(美國(guó)BD公司)；小鼠CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞濃縮裝置(美國(guó)bd-bioscience公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1構(gòu)建小鼠皮下移植瘤模型 將LLC細(xì)胞(對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期)用胰酶消化液消化離心(1 800 r/min×5 min)收集，再用無(wú)血清DMEM培養(yǎng)基重懸使其濃度為1×107個(gè)/ml，吸取0.2 ml細(xì)胞懸液，皮下注射入小鼠右前肢，構(gòu)建小鼠皮下移植瘤模型[6]，觀察30 min，小鼠與之前比較無(wú)異常，說(shuō)明接種成功。

1.2.2分組及給藥 模型建立10 d 后，皮下肉眼看到及摸到3～5 mm3的小圓狀硬物，待觸及的硬物長(zhǎng)到1 cm3左右以后，將每組中隨機(jī)一只小鼠的移植瘤取出進(jìn)行病理檢測(cè)是否均為癌細(xì)胞，以此來(lái)判斷建模是否成功。設(shè)置對(duì)照(Control)組、順鉑(DDP)組、芪玉三龍湯(QYSLD)組和聯(lián)合(DDP+QYSLD)組，18只/組。

小鼠的順鉑給藥劑量=7.34 mg/[kg·(0.2 ml/10 g)]=0.367 mg/ml[5]，小鼠的腹腔注射體積為0.2 ml/10 g，但反復(fù)注射順鉑會(huì)造成小鼠腎功能不全，所以注射藥量減半，即小鼠的腹腔注射體積為0.2 ml/20 g。臨床上，成人的QYSLD給藥量為134 g/60 kg=A。QYSLD小鼠給藥劑量設(shè)為B=9.01(小鼠和人的等效劑量折算系數(shù))×A=20.12 g/kg(與1倍的成人臨床用藥相當(dāng))，小鼠給藥體積為0.2 ml/10 g。所以，QYSLD小鼠給藥劑量為1.006 g/ml(與1倍的成人臨床用藥相當(dāng))，其4倍即4.024 g/ml。預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果為高劑量與中劑量效果相當(dāng)，即與2倍的成人臨床用藥相當(dāng)，因此正式實(shí)驗(yàn)采用2倍給藥，即40.24 g/kg，為方便給藥計(jì)算，采用40 g/kg。

實(shí)驗(yàn)分組給藥如下：① 對(duì)照組：每日按照0.1 ml/10 g 0.9%氯化鈉溶液灌胃，每日1次；② 順鉑組：第1、3、5日腹腔注射0.2 ml DDP溶液；③ QYSLD組：40 g/(kg·d)中藥藥液灌胃，每日1次；④ 聯(lián)合(DDP+QYSLD)組：40 g/(kg·d)中藥藥液灌胃，每日1次，同時(shí)0.2 ml DDP溶液每2 d注射1次。

1.2.3觀察記錄小鼠一般狀態(tài) 每天觀察記錄各組小鼠的精神活力、進(jìn)食、體質(zhì)量、毛發(fā)變化、大小便等各項(xiàng)生長(zhǎng)情況。

1.2.4繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線 第1天開(kāi)始每隔3 d測(cè)量1次其皮下腫瘤的長(zhǎng)徑(a)和短徑(b)測(cè)量小鼠皮下腫瘤的長(zhǎng)徑(a)和短徑(b)，計(jì)算腫瘤體積(V)，公式為:V(cm3) = ab2/2。

1.2.5標(biāo)本收集與準(zhǔn)備 21 d連續(xù)給藥，在給藥的第7、14和21天每組隨機(jī)選取6只小鼠處死，解剖小鼠，取出脾臟，分離脾淋巴細(xì)胞，檢測(cè)并分析腫瘤抗原特異性T細(xì)胞表面PD-1表達(dá)水平及腫瘤特異性Th1細(xì)胞反應(yīng)。給藥21 d后，將兩側(cè)肺臟從處死的小鼠胸腔中完整取出，利用解剖顯微鏡觀察統(tǒng)計(jì)肺表面轉(zhuǎn)移瘤結(jié)節(jié)數(shù)量。

1.2.6制備小鼠脾臟CD4+和CD8+T細(xì)胞 在給藥的第7、14和21天處死小鼠，分離脾臟，使用2.5 ml注射器柱塞通過(guò)70 μm尼龍細(xì)胞過(guò)濾器制備脾臟單細(xì)胞懸浮液，用NH4Cl/Tris溶液溶解紅細(xì)胞后，分別用小鼠CD4+T、CD8+T淋巴細(xì)胞濃縮裝置分離CD4+和CD8+T細(xì)胞，純度大于95%。

1.2.7ELISA法檢測(cè)小鼠腫瘤抗原特異性Th1細(xì)胞反應(yīng) 將骨髓細(xì)胞(bone marrow-derived dendritic cell，BMDC)從C57BL/6小鼠股骨和脛骨取出，用含2 mmol的谷氨酰胺、100 U/ml青霉素、10%胎牛血清、100 μg/ml鏈霉素和20 ng/ml GM-SF的RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)基每隔3 d更換1次。培養(yǎng)8 d后，將BMDC與LLC細(xì)胞裂解物(10 mg/ml)共培養(yǎng)16 h，加入50 μg/ml絲裂霉素C作用30 min。將接種LLC細(xì)胞21 d小鼠的脾臟淋巴細(xì)胞(1×106個(gè)/ml)與BMDC(5×105個(gè)/ml)共培養(yǎng)60 h，細(xì)胞增殖情況通過(guò)CCK-8試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。收集上述共培養(yǎng)后的細(xì)胞上清液，采用BD CBA小鼠炎癥試劑盒應(yīng)用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IFN-γ和TNF-α水平。按照50 ∶1的比例將上述與BMDC共培養(yǎng)后的小鼠脾臟淋巴細(xì)胞與LLC細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，所處的培養(yǎng)環(huán)境設(shè)置為37 ℃、5% CO2，進(jìn)行24 h的細(xì)胞培養(yǎng)。為了檢測(cè)對(duì)LLC細(xì)胞的殺傷效應(yīng)，應(yīng)用ELISA法通過(guò)皮爾斯低密度脂蛋白細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中乳酸脫氫酶(lactic dehydrogenase，LDH)水平。

1.2.8流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠PD-1細(xì)胞及記憶性CD4+T細(xì)胞凋亡情況 按照上述時(shí)間和方法處死小鼠獲得單個(gè)脾細(xì)胞，用CD16/CD32將脾細(xì)胞放在冰上孵育10 min封閉Fc非特異結(jié)合位點(diǎn)。將處理后的脾細(xì)胞分別與熒光素PE標(biāo)記的PD-1抗體及FITC標(biāo)記的CD3、CD4、CD8抗體在冰上孵育20 min后檢測(cè)確定記憶T細(xì)胞中PD-1的陽(yáng)性比例；將脾細(xì)胞與熒光素FITC標(biāo)記的抗CD44抗體和熒光素PE-Cy5標(biāo)記的抗CD4抗體，再進(jìn)行Annexin V-PE凋亡染色試劑盒進(jìn)行染色來(lái)檢測(cè)記憶性CD4+T細(xì)胞的凋亡情況。將CD4+T細(xì)胞內(nèi)的Foxp3用熒光素FITC染色，通過(guò)BD FACS Calibur流氏細(xì)胞儀將所有染色后的細(xì)胞上機(jī)檢測(cè)，使用CELLQuest軟件進(jìn)行分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 QYSLD對(duì)小鼠一般情況的影響小鼠給藥第5天開(kāi)始，DDP組小鼠精神活力最差，進(jìn)食減少，毛發(fā)枯燥，動(dòng)作遲緩，反應(yīng)力降低，聚集性強(qiáng)，體質(zhì)量降低量大，大小便量減少；Control組小鼠第7天開(kāi)始精神活力一般，毛發(fā)略枯，飲食和大小便均良好；QYSLD組及聯(lián)合組小鼠精神活力尚可，狀態(tài)相較DDP組優(yōu)，飲食良好，體質(zhì)量降低不明顯，毛發(fā)狀態(tài)尚好。其中，小鼠的生長(zhǎng)情況，QYSLD組最好，聯(lián)合組次之，均明顯優(yōu)于DDP組。

2.2 QYSLD對(duì)小鼠腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用觀察腫瘤生長(zhǎng)曲線可知，Control組與QYSLD組曲線變化相近，DDP組與聯(lián)合組曲線變化幾乎一致(圖1)。從腫瘤生長(zhǎng)曲線可知，Control組與QYSLD組曲線變化相近，DDP組與聯(lián)合組曲線變化幾乎一致(圖1)。將四個(gè)組別進(jìn)行兩因素析因設(shè)計(jì)的方差分析，得出QYSLD抑制腫瘤體積與質(zhì)量效果不明顯，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而DDP可以抑制腫瘤體積與質(zhì)量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，聯(lián)合組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果顯示，QYSLD可以平和地抑制肺癌移植瘤，尚且不能得出其與DDP聯(lián)合使用有顯著提高療效的作用。

圖1 腫瘤生長(zhǎng)曲線

2.3 QYSLD對(duì)小鼠CD4+T細(xì)胞免疫反應(yīng)上調(diào)作用將BMDC用特異性LCC抗原刺激，與小鼠脾淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)，為評(píng)價(jià)CD4+T細(xì)胞的功能，觀察細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IFN-γ和TNF-α的水平及細(xì)胞增殖情況，結(jié)果顯示，聯(lián)合組小鼠T細(xì)胞增殖能力最強(qiáng)，IFN-γ和TNF-α的分泌水平最高，QYSLD組次之，對(duì)照組和順鉑組較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。CD4+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的功能通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)數(shù)目來(lái)觀察，結(jié)果顯示，Control組小鼠中CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)目顯著增加，QYSLD組CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)目略增加，DDP組增加幅度比QYSLD組大，聯(lián)合組略減少，上述結(jié)果表明QYSLD和DDP聯(lián)合使用能夠上調(diào)肺癌荷瘤小鼠CD4+T細(xì)胞免疫反應(yīng)。見(jiàn)圖2。

圖2 QYSLD對(duì)肺癌荷瘤小鼠CD4+T細(xì)胞免疫反應(yīng)的影響A：細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α的分泌水平；B：細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IFN-γ的分泌水平；C：T淋巴細(xì)胞自身增殖能力變化程度；D：隨著治療時(shí)間的增加CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)目的變化情況；E：不同組CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)目在不同時(shí)間點(diǎn)的變化情況；與Control組比較：**P<0.01；與QYSLD組比較：##P<0.01

2.4 QYSLD對(duì)小鼠CD8+T細(xì)胞特異性殺腫瘤細(xì)胞效應(yīng)的影響小鼠脾淋巴細(xì)胞用抗原遞呈激活后，將其與LLC細(xì)胞共培養(yǎng)24 h后，隨著接種LLC細(xì)胞時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)上清液中LDH的含量逐漸增多，殺細(xì)胞效應(yīng)逐漸增強(qiáng)。CD8+T細(xì)胞特異性殺腫瘤細(xì)胞效應(yīng)在同一時(shí)間點(diǎn)QYSLD組和聯(lián)合治療組兩組小鼠均高于Control組(P<0.001)。結(jié)果表明QYSLD能夠上調(diào)肺癌荷瘤小鼠CD8+T細(xì)胞特異性殺腫瘤細(xì)胞效應(yīng)。見(jiàn)圖3。

圖3 QYSLD對(duì)肺癌轉(zhuǎn)移小鼠CD8+T細(xì)胞特異性殺腫瘤細(xì)胞效應(yīng)上調(diào)作用與Control組比較：*P<0.05，***P<0.001

2.5 QYSLD對(duì)小鼠T細(xì)胞中PD-1陽(yáng)性細(xì)胞的比例的影響21 d給藥后，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠脾臟T細(xì)胞中PD-1陽(yáng)性細(xì)胞的比例顯示，在對(duì)照組和順鉑組小鼠中PD-1陽(yáng)性細(xì)胞的比例高于其他組(P<0.001)。結(jié)果表明QYSLD可能通過(guò)下調(diào)PD-1信號(hào)途徑抑制肺癌的增殖。見(jiàn)圖4。

圖4 QYSLD對(duì)肺癌荷瘤小鼠T細(xì)胞中PD-1陽(yáng)性細(xì)胞的比例的下調(diào)作用A：CD3+ T細(xì)胞中PD-1陽(yáng)性細(xì)胞的比例；B：CD3+ CD4+T細(xì)胞中PD-1陽(yáng)性細(xì)胞的比例；C：CD3+ CD8+T細(xì)胞中PD-1陽(yáng)性細(xì)胞的比例；D：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)試驗(yàn)21 d之后各個(gè)組小鼠T細(xì)胞中PD-1陽(yáng)性細(xì)胞的百分比；與Control組比較：***P<0.001

2.6 QYSLD對(duì)小鼠CD4+記憶性T細(xì)胞中凋亡細(xì)胞比例的下調(diào)作用連續(xù)21 d給藥后，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肺癌荷瘤小鼠脾細(xì)胞中CD4+細(xì)胞凋亡狀況，得出DDP組和Control組小鼠的CD4+細(xì)胞的凋亡比例顯著高于QYSLD組和聯(lián)合組(P<0.001)。以上表明QYSLD可能通過(guò)減少PD-1信號(hào)途徑降低記憶性T細(xì)胞凋亡比例，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，阻止肺癌的轉(zhuǎn)移。見(jiàn)圖5。

圖5 QYSLD抑制肺癌荷瘤小鼠CD4+記憶性T細(xì)胞凋亡A：不同治療組小鼠CD44high CD4+T細(xì)胞的凋亡水平；B：不同治療組小鼠CD44high CD4+T細(xì)胞的凋亡情況；與Control組比較：***P<0.001

2.7 QYSLD對(duì)小鼠腫瘤細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移的抑制作用連續(xù)21 d給藥后處死小鼠，打開(kāi)胸腔完整取出肺臟，利用解剖顯微鏡觀察統(tǒng)計(jì)肺表面轉(zhuǎn)移瘤結(jié)節(jié)數(shù)量，結(jié)果顯示，與Control組相比，聯(lián)合組小鼠肺轉(zhuǎn)移瘤結(jié)節(jié)最少，DDP組次之(P< 0.001)，QYSLD組也明顯減少(P<0.001)。這表明QYSLD能夠抑制小鼠腫瘤細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移。見(jiàn)圖6。

圖6 QYSLD能夠抑制肺癌荷瘤小鼠腫瘤細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移A：不同組治療后小鼠肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)圖片；B：各組小鼠肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)目比較；C：各組小鼠肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)體積比較；與Control組比較：***P<0.001

3 討論

近年來(lái)，在癌癥治療的各種措施中，其中免疫治療備受關(guān)注,尤其是免疫檢查點(diǎn)分子PD-1及其配體PD-L1的發(fā)現(xiàn)已成為腫瘤免疫治療中里程碑式的標(biāo)志。多項(xiàng)研究[7]揭示PD-1/PD-L1信號(hào)通路與肺癌相關(guān)，臨床應(yīng)用PD-1/PD-L1抑制劑治療肺癌，取得了持久有效的藥物反應(yīng)和令人滿(mǎn)意的治療效果。

機(jī)體免疫功能與中醫(yī)的“正氣”有著緊密聯(lián)系，從現(xiàn)代免疫學(xué)角度闡述免疫治療與中醫(yī)“扶正消積”治法的關(guān)系研究已然越來(lái)越活躍[8]。國(guó)家級(jí)名老中醫(yī)韓明向教授遵循肺癌中醫(yī)學(xué)病機(jī)“整體正虛、局部積聚”，提出治療肺癌采用“益氣養(yǎng)陰、解毒消積、化痰祛瘀”的“扶正消積”方法，根據(jù)病機(jī)治法產(chǎn)生了治療肺癌的有效驗(yàn)方QYSLD，此方后由安徽中醫(yī)藥大學(xué)李澤庚教授帶領(lǐng)的研究團(tuán)隊(duì)不斷進(jìn)行多次基礎(chǔ)研究并更新改良而最終形成。

Th細(xì)胞是T細(xì)胞亞群，在機(jī)體免疫中有重要功能，是機(jī)體內(nèi)一類(lèi)重要的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，根據(jù)分泌出的細(xì)胞因子的不同主要將Th細(xì)胞分為T(mén)h1細(xì)胞與Th2細(xì)胞兩種。Th1細(xì)胞可以促進(jìn)細(xì)胞免疫[9]，Th2細(xì)胞參與體液免疫應(yīng)答以及抗體的生成[10]。生理狀態(tài)下，二者相對(duì)平衡，這是機(jī)體維持正常免疫功能重要條件之一，二者平衡失調(diào)，則機(jī)體免疫應(yīng)答功能降低，進(jìn)而使腫瘤免疫逃逸。

T細(xì)胞由多個(gè)免疫檢查點(diǎn)共同調(diào)控激活，而PD-1是其應(yīng)答途徑中的一員，PD-1是由PD-1基因編碼的Ⅰ型跨膜糖蛋白，共有PD-L1和PD-L2 兩個(gè)配體，其中PD-L1是其主要配體[11]。PD-L1由于腫瘤細(xì)胞及其微環(huán)境的促進(jìn)作用而過(guò)表達(dá)，PD-1/PD-L1信號(hào)通路進(jìn)而激活，從而宿主的免疫反應(yīng)被限制，適宜腫瘤生長(zhǎng)的微環(huán)境也就形成，機(jī)體不能夠約束腫瘤細(xì)胞，致使其免疫逃逸[12]。PD-1/PD-L1抑制劑可以抑制PD-1/PD-L1信號(hào)通路，進(jìn)而調(diào)節(jié)腫瘤生存環(huán)境，恢復(fù)T細(xì)胞對(duì)腫瘤的監(jiān)視和殺傷作用，提高了內(nèi)源性抗腫瘤的免疫應(yīng)答功能[13]，最終發(fā)揮抗腫瘤作用。