地中海貧血血液學(xué)篩查與基因檢測結(jié)果的一致性分析

陳曉靜

（深圳大學(xué)總醫(yī)院檢驗科，廣東 深圳 518055）

0 引言

地中海貧血（簡稱“地貧”）是一組遺傳性溶血性貧血疾病，該病好發(fā)于東南亞以及我國南方等地區(qū)，在我國尤其是廣東、廣西等地區(qū)發(fā)病率較高，給社會和家庭造成了很大的負(fù)擔(dān)[1]。在廣東和廣西地區(qū)，α地貧缺失基因型比例較高的是 -α4.2、-α3.7和 -SEA[2]；而 β 地中海貧血，其突變型高達(dá)200多種，在中國人群中已被報道的大約有46種[3]。由于我國南方地區(qū)人口較多，且地貧基因檢測成本相對較高，不太適合用于大規(guī)模篩查，因此，建立適應(yīng)特定地區(qū)的地中海貧血血液學(xué)篩查指標(biāo)很有必要。本研究以地貧基因檢測結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，評價平均紅細(xì)胞體積（MCV）和平均紅細(xì)胞血紅蛋白量（MCH）等血液學(xué)指標(biāo)與地貧基因結(jié)果的一致性，并通過受試者工作特征( ROC)曲線評估MCV和MCH在篩查地中海貧血中的價值。

1 資料與方法

1.1 資料來源

收集深圳大學(xué)總醫(yī)院2018年6月至2022年1月確診為地貧患者130例，為“地貧組”（其中“α地貧組”78例，“β地貧組”52例），男性 61例，女性69例，平均年齡27歲；另收集130例地貧基因陰性者，男性62例，女性68例，平均年齡30歲，有28例血清鐵或者血清鐵蛋白減低，臨床診斷為缺鐵性貧血，其余102例作為“對照組”?！暗刎毥M”及“對照組”患者性別、年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2 觀察指標(biāo)與檢測方法

血常規(guī)五分類（包括MCV、MCH、RDW-CV等指標(biāo)）檢測使用Sysmex-XN9000全自動血細(xì)胞分析儀及相關(guān)配套試劑，血清鐵蛋白檢測使用羅氏Cobas 702 及相關(guān)配套試劑，地貧基因擴(kuò)增使用儀器為ABI2720基因擴(kuò)增儀，試劑來源為深圳亞能生物技術(shù)有限公司，操作嚴(yán)格按照實驗室SOP及儀器操作規(guī)程，其中α缺失及β突變使用邦德勝的第三方質(zhì)控品。

由于試劑盒檢測局限性，某些臨床少見β突變類型未設(shè)正常對照，檢測結(jié)果不能區(qū)分純合突變或雜合突變，故送深圳亞能生物技術(shù)有限公司進(jìn)行測序，以確認(rèn)基因型。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 地貧基因檢測結(jié)果

130例地貧患者中， α-地中海貧血缺失型78例，其中 --SEA/αα占68%；β-地中海貧血突變型52例，其中654M和41-42M占比較大。

2.2 全血細(xì)胞分析結(jié)果

130例地貧基因陰性者中，有28例血清鐵或者血清鐵蛋白減低，臨床診斷為缺鐵性貧血，其余102例作為“對照組”。將“對照組”“α地貧組”和“β地貧組”進(jìn)行比較，“地貧組”MCV和MCH均低于“對照組”（P＜0.05）；“地貧組”RDW-CV 均高于“對照組”（P＜0.05）；各血液學(xué)指標(biāo)檢測結(jié)果見表1、表2。其中MCV的正常值為80-100 fl， MCH的正常值為27-34 pg， RDW-CV的正常值為11.5-14.5%。

表1 各組MCV、MCH、RDW-SD及RDW-CV檢測結(jié)果

2.3 MCV、MCH及RDW-CV單項檢測

地貧的ROC曲線分析將“對照組”與“α地貧組”進(jìn)行比較，再將“對照組”與“β地貧組”進(jìn)行比較，對MCV、MCH及RDW-CV分別制作ROC曲線，結(jié)果顯示，MCV篩查α地貧的最佳截斷值為82.4 fl，ROC 曲線下面積（AUC）為 0.968；MCV 篩查β地貧的最佳截斷值為77.2 fl，ROC曲線下面積（AUC）為1.00。MCH篩查α地貧的最佳截斷值為 27.9 pg，AUC為 0.985；MCH 篩查 β地貧的最佳截斷值為25,7 pg，AUC為0.991。RDW-CV篩查α地貧的最佳截斷值為14.1，AUC為0.926;RDW-CV篩查β地貧的最佳截斷值為14.1，AUC為0.997。

表3 MCV、MCH、RDW-CV診斷地貧的效能

圖1 血液學(xué)指標(biāo)MCV、MCH、RDW-CV的ROC曲線(對照組- a地貧組)

圖2 血液學(xué)指標(biāo)MCV、MCH、RDW-CV的ROC曲線(對照組- β地貧組)

2.4 罕見型別送測序分析

確定基因型本實驗室遇到一例帶有CD14-15突變的患者，由于該型別為臨床少見突變類型，檢測系統(tǒng)未設(shè)正常對照，檢測結(jié)果不能區(qū)分純合突變或雜合突變，故送測序分析確認(rèn)最終基因型為CD14-15雜合突變。測序結(jié)果見圖3。

圖3 “CD14-15雜合突變”測序結(jié)果圖

3 討論

地中海貧血是一種人類單基因疾病，同時也是常染色體隱性遺傳病。α-珠蛋白基因簇定位于16號染色體16p13.3位點，β-珠蛋白基因簇定位于11號染色體11p15.3位點。地中海貧血主要是由于珠蛋白鏈不平衡所致，正常血紅蛋白不能形成，使紅細(xì)胞易被破壞，壽命縮短。其中α地中海貧血大多由于α珠蛋白基因的缺失所導(dǎo)致，而β地中海貧血主要是由于β珠蛋白基因的點突變引起的，影響的是β鏈的合成。靜止型地中海貧血一般無明顯臨床表現(xiàn)，或見輕度貧血；中間型地中海貧血表現(xiàn)為輕度至中度貧血；重型地中海貧血則會出現(xiàn)貧血、肝脾腫大、黃疸等癥狀。

根據(jù)α鏈和β鏈數(shù)量的不平衡程度，可以將地中海貧血分為地中海貧血基因攜帶者、中間型地中海貧血和重型地中海貧血三類。血液學(xué)表型發(fā)生變化是地中海貧血患者的一個特征，主要表現(xiàn)為MCV、MCH等指標(biāo)的改變，輕型地中海貧血患者可能其表型變化不大，但中間型和重型地中海貧血，其臨床表型的變化則較大。所以在實驗室診斷中，血液學(xué)表型分析是一線篩查指標(biāo)，而基因分型因則是確診指標(biāo)[4]。

有相關(guān)文獻(xiàn)報道，在廣東地區(qū)，α-地中海貧血基因的攜帶率約為8.19%，β-地中海貧血的檢出率約為2.54%[5]。由于我國南方地區(qū)（尤其是廣東省和廣西?。┤丝谳^多，且地貧基因檢測成本相對較高，不太適合用于大規(guī)模篩查，所以建立適應(yīng)特定地區(qū)的地中海貧血血液學(xué)篩查指標(biāo)是很有必要的，但仍需優(yōu)化篩查組合，且對于篩查異常者還是建議進(jìn)一步做基因檢測。

MCV 是反映紅細(xì)胞平均體積大小的指標(biāo)，MCH是反映紅細(xì)胞內(nèi)所含血紅蛋白平均量的指標(biāo)，RDW-CV 是反映紅細(xì)胞大小均一度的指標(biāo)，這3個指標(biāo)均對地中海貧血具有一定的篩查價值。而ROC曲線是一種全面評價試驗價值的有效方法,它以“敏感度”（即真陽性率）為縱坐標(biāo)、“1-特異度”（即假陽性率）為橫坐標(biāo)，依據(jù)分組測定的數(shù)據(jù)，計算敏感度及特異度并連接成曲線。通過計算ROC曲線下面積（AUC）來評價試驗的準(zhǔn)確性，并找出最佳截斷值[6-8]。

本研究中的數(shù)據(jù)表明，α地貧組和β地貧組MCV和MCH均低于對照組，RDW-CV均高于對照組?；诒狙芯康臄?shù)據(jù)，在α地貧中，MCV＜82.4 fl和（或）MCH＜27.9 pg是最佳截斷值；在β地貧中，MCV＜77.2 fl和（或）MCH＜25.7 pg是最佳截斷值。但由于本研究樣本量較少，還有待樣本量多時再作進(jìn)一步統(tǒng)計分析。

缺鐵性貧血是最常見的貧血之一，是一種小細(xì)胞低色素性貧血，它是由于機(jī)體內(nèi)缺乏鐵導(dǎo)致 Hb合成障礙而引起的[9]。缺鐵性貧血與地貧均屬于小細(xì)胞低色素性貧血，兩種貧血患者的血常規(guī)結(jié)果相似，所以需要血清鐵來進(jìn)行鑒別診斷。

地貧篩查和確診的常用標(biāo)本類型為外周血，但羊水也能作為標(biāo)本來源來檢測地貧基因，這在避免重癥地貧患兒的出生，實現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育方面有著重要的作用。由于本實驗室所用試劑盒檢測的是比較常見的23種地貧基因缺失和突變，所以有可能出現(xiàn)一些罕見型別無法檢出，或者部分少見的突變類型試劑盒里沒有設(shè)正常對照，檢測結(jié)果不能區(qū)分純合突變或雜合突變，需進(jìn)一步測序分析以確認(rèn)基因型，而測序結(jié)果的補(bǔ)充更好地為患者提供了準(zhǔn)確結(jié)果。

對于一些常規(guī)檢測方法仍不能明確基因型的地貧，必要時進(jìn)行產(chǎn)前診斷，采用基因測序等技術(shù)進(jìn)一步檢查，以防止漏檢一些罕見未知的缺失、突變[10]。隨著后基因組時代的到來分子診斷技術(shù)正朝著準(zhǔn)確、高通量和經(jīng)濟(jì)方向發(fā)展。在王珂等的研究中發(fā)現(xiàn)，運(yùn)用高通量測序技術(shù)篩選α地貧和β地貧的漏診率會大大降低，將有利于及早發(fā)現(xiàn)和診斷疾病[11]。