煙草根莖提取物對(duì)辣椒茶黃螨的殺螨活性研究

張紅琳

摘 要：以石油醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇和水5種溶劑對(duì)煙草根莖的平行提取物及順序提取物為材料，研究其對(duì)辣椒茶黃螨的觸殺毒力。試驗(yàn)結(jié)果表明，在不同溶劑的平行提取物及順序提取物中，分別以乙醇提取物對(duì)辣椒茶黃螨的致死率最高，48 h校正死亡率分別為89.56%和81.77%，分別顯著高于其他溶劑處理；乙醇平行提取物及順序提取物對(duì)辣椒茶黃螨的致死中濃度分別為0.935 7和1.100 8 mg/mL，顯著高于對(duì)照噠螨酮的0.133 6 mg/mL，乙醇提取物對(duì)辣椒茶黃螨的毒殺效果較噠螨酮差。

關(guān)鍵詞：煙草根莖；辣椒茶黃螨；殺螨活性

中圖分類號(hào)：S435.418.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1001-3547（2014）06-0074-04

茶黃螨（Polyphago tarsonemus Latus）又名側(cè)多食跗線螨，屬蜱螨目跗線螨科，是辣椒上為害最為嚴(yán)重的一類害螨[1]。其以刺吸式口器吸取植物汁液，為害植物的葉、花、果實(shí)、球莖、塊根等，其個(gè)體小，分布廣，繁殖快，世代重疊，每年田間可發(fā)生20代以上，且適應(yīng)性強(qiáng)，對(duì)植物特別是經(jīng)濟(jì)作物如辣椒、茄子、番茄、豇豆、菜豆、黃瓜等造成了不可估量的經(jīng)濟(jì)損失[2]。而化學(xué)農(nóng)藥的防治，將不可避免地產(chǎn)生3R（抗性Resistance、殘留Residue和再猖獗Resurgence）等問題[3]。同時(shí)，辣椒作為人們常備的食用原料，化學(xué)農(nóng)藥的大量使用將嚴(yán)重影響它的消費(fèi)市場(chǎng)[4]。因此，生物防治與生物農(nóng)藥特別是天然產(chǎn)物農(nóng)藥的使用給辣椒茶黃螨的防治提供了廣闊的發(fā)展空間[5]。早在20世紀(jì)初，除蟲菊、煙草、魚藤等植物已被作為天然產(chǎn)物農(nóng)藥進(jìn)行研究開發(fā)，在21世紀(jì)已發(fā)展成為成熟的商品化制劑廣泛使用，同時(shí)今天國(guó)內(nèi)天然產(chǎn)物對(duì)螨類控制效果的研究也取得了很大進(jìn)展，吳文君等[6]報(bào)道了殺蟲植物苦皮藤的毒殺成分，丁偉等[7]、吳靜等[8]、張永強(qiáng)等[9]報(bào)道了姜黃（Curcuma longa）、丁香（Syringa vulgaris）和黃花蒿（Artemisia annua）對(duì)朱砂葉螨有明顯的生物活性；曹揮等[10]報(bào)道了采用生化方法測(cè)定地膚三氯甲烷提取物對(duì)山楂葉螨體內(nèi)谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶、羧酸酯酶、單胺氧化酶、Ca2+-ATP酶活性的影響，使螨體內(nèi)神經(jīng)胺積累，造成神經(jīng)傳遞的阻斷從而導(dǎo)致螨體的死亡等。此外國(guó)內(nèi)外專家學(xué)者研究報(bào)道了印楝[11]，煙草[12]、瑞香狼毒[13]等植物源活性成分的殺螨活性，為開發(fā)天然產(chǎn)物殺螨劑奠定了研究基礎(chǔ)。

煙草（Nicotiana tabacum）全株都含煙堿，以葉中含量最多，約占全株含量的64%，其余，根占13%、莖18%、花5%，煙葉用于煙絲生產(chǎn)，根與莖對(duì)于煙草行業(yè)生產(chǎn)幾乎不再有經(jīng)濟(jì)價(jià)值。煙草產(chǎn)地豐富，全國(guó)均有種植，特別是云南、貴州、四川等地有大量基地進(jìn)行栽培。煙草中有效成分煙堿的殺蟲活性已有許多研究報(bào)道，并且也有很多以煙堿化學(xué)結(jié)構(gòu)為模板進(jìn)行開發(fā)的殺蟲劑產(chǎn)品，但有關(guān)煙草在殺螨活性或以煙堿為模板開發(fā)殺螨活性化合的研究還鮮有報(bào)道，尤其是針對(duì)辣椒茶黃螨的研究。為了明確該植物對(duì)辣椒茶黃螨的殺螨活性，本試驗(yàn)就煙草根莖提取物對(duì)辣椒茶黃螨的室內(nèi)生物活性進(jìn)行了測(cè)定。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

①供試螨類 茶黃螨（Polyphago tarsonemus Latus），采自重慶市忠縣田間的辣椒苗上，為在人工氣候室內(nèi)（25±1）℃、 RH（相對(duì)濕度）60%～80%條件下，用盆栽辣椒苗上飼養(yǎng)了多年所獲得的敏感品系。

②供試煙草根莖提取物 煙草（Nicotiana tabacum）購(gòu)于忠縣農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)，取根、莖，切片，陰干，粉碎機(jī)粉碎，備用。

供試煙草根莖平行提取物：稱取5份上述粉末，每份100 g，分別裝入5個(gè)10 L的燒瓶，以6∶1的比例依次分別向5個(gè)磨口瓶中加入600 mL的水、丙酮、無水乙醇、乙酸乙酯和石油醚，密閉，每日振搖3次，于25℃浸漬1周。過濾，將水浸液加熱濃縮為浸膏狀，丙酮、無水乙醇、乙酸乙酯和石油醚浸提液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)為浸膏狀，獲得5種溶劑的植物平行提取物浸膏，4℃存放于冰箱內(nèi)備用。

供試煙草根莖順序提取物：稱取100 g煙草根莖粉末，先用600 mL石油醚30～60℃冷浸1周，過濾，殘?jiān)鼈溆?，濾液濃縮揮發(fā)后獲得石油醚提取物浸膏，4℃存放于冰箱內(nèi)備用；過濾后的殘?jiān)僖?00 mL乙醇冷浸1周，過濾，將濾液濃縮定容獲得乙醇順序提取物浸膏；殘?jiān)侔葱蛴帽⒁掖己退貜?fù)上述操作，分別獲得丙酮、乙醇和水的順序提取物浸膏。

稱取上述平行提取物與順序提取物浸膏少量，加入3%的吐溫-80，以蒸餾水稀釋配制成5 mg/mL溶液，對(duì)供試對(duì)象進(jìn)行生物測(cè)定。

1.2 試驗(yàn)方法

①茶黃螨的生物測(cè)定 參照FAO推薦的測(cè)定螨類抗藥性的標(biāo)準(zhǔn)方法——玻片浸漬法[14]進(jìn)行并改進(jìn)。將載玻片一端貼上雙面膠帶，將供試螨背部粘于雙面膠帶上，每玻片40頭，于溫度（26±1）℃、RH 60%～80%的環(huán)境下放置4 h，用解剖鏡檢查，剔除死亡和不活潑的個(gè)體，記載活螨數(shù)。而后，將帶螨的玻片一端浸入相應(yīng)濃度的藥液中，浸漬5 s后取出，用濾紙吸除螨體及其周圍多余藥液，同飼養(yǎng)條件下放置3 d，每24 h檢查一次。用毛筆輕觸螨體5次，以螨足均不動(dòng)者為死亡，試驗(yàn)重復(fù)3次。以清水加相應(yīng)量吐溫-80的溶液為對(duì)照。進(jìn)行毒力測(cè)定時(shí)，每種藥液按預(yù)試梯度配制5個(gè)濃度，每個(gè)濃度重復(fù)3次，計(jì)算致死中濃度。

②數(shù)據(jù)處理 采用校正死亡率來評(píng)判各提取物對(duì)茶黃螨的生物活性，計(jì)算方法如下：校正死亡率（%）=[（處理組死亡率-對(duì)照組死亡率）/（1-對(duì)照組死亡率）]×100%。校正死亡率經(jīng)反正弦轉(zhuǎn)化后，進(jìn)行方差分析，比較各處理結(jié)果間的差異。由SPSS 14.0軟件完成One-Way ANOVA之Duncan's檢驗(yàn)和試驗(yàn)數(shù)據(jù)的方差分析[15]。

2 結(jié)果與分析

2.1 煙草根莖平行提取物對(duì)辣椒茶黃螨的室內(nèi)觸殺毒力

從表1看出，水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和石油醚粗提物對(duì)辣椒茶黃螨的48 h校正死亡率分別為57.35%、89.56%、76.03%、58.38%和40.87%。其中，乙醇平行提取物對(duì)辣椒茶黃螨的殺螨活性最強(qiáng)。

2.2 煙草根莖順序提取物對(duì)辣椒茶黃螨的室內(nèi)觸殺毒力

從表1、2看出，相同處理時(shí)間下，煙草根莖平行提取物對(duì)辣椒茶黃螨的致死活性高于順序提取物。在煙草根莖不同溶劑平行提取物中，乙醇和丙酮提取物對(duì)茶黃螨的致死活性較好，處理48 h校正死亡率分別為89.56%和76.03%；順序提取物中，乙醇和丙酮提取物對(duì)茶黃螨的致死活性較好，處理

48 h校正死亡率分別為81.77%和73.27%，與同組其他溶劑的提取物間存在顯著差異（P<0.05），且乙醇順序提取物對(duì)茶黃螨的致死活性顯著高于丙酮順序提取物。

2.3 煙草根莖乙醇平行、順序提取物與噠螨酮對(duì)辣椒茶黃螨的毒力回歸直線

處理48 h后的5 mg/mL乙醇平行提取物、順序提取物對(duì)茶黃螨具有明顯的致死作用。為了進(jìn)一步明確平行提取物與順序提取物間的毒力差異情況，需要做進(jìn)一步的毒力測(cè)定，以致死中濃度（LC50）來比較2種溶劑提取物的毒力差異，并以15%噠螨酮乳油3 000倍液為對(duì)照，結(jié)果如表3所示。

從表3看出，2種提取物中，對(duì)辣椒茶黃螨毒力較強(qiáng)的是乙醇平行提取物，其LC50 為0.935 7 mg/mL，其致死中濃度大于對(duì)照噠螨酮的0.133 6 mg/mL，故其對(duì)辣椒茶黃螨的毒殺效果低于噠螨酮。

3 討論與結(jié)論

煙草根莖化學(xué)成分豐富，主要為煙堿、酚類、有機(jī)酸類、醛酮類、萜烯類及酯醇類等重要物質(zhì)，其中，酚類物質(zhì)具有40余種，占有較大比例，主要包括苯酚、間甲苯酚、對(duì)甲苯酚、鄰甲苯酚、苯二酚、間苯二酚、兒茶酚等，而某些酚類物質(zhì)特有的化學(xué)結(jié)構(gòu)如消螨酚（Dinex）等多具有較強(qiáng)的殺螨活性。據(jù)相似相容原理，醇類對(duì)酚的溶解性相對(duì)較高，同時(shí)，乙醇極性大，對(duì)生物堿類也有較好的溶解性，其提取物中含有大量生物堿及酚類物質(zhì)，正好闡釋了乙醇提取物殺螨活性較的原因。

煙草、除蟲菊、毒魚藤合稱為“三大植物性農(nóng)藥”，將煙草根莖作為植物源殺螨藥物的開發(fā)，至今鮮有報(bào)導(dǎo)；而將煙草根莖作為植物源殺螨藥物，除了具有原料易得、浸提工藝簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)外，還具有低毒、高效、無殘留、不易產(chǎn)生抗性等優(yōu)點(diǎn)，加之煙草種植廣泛，將其根莖作為植物源農(nóng)藥進(jìn)行開發(fā)具有很大的潛力市場(chǎng)和資源。

對(duì)煙草根莖不同溶劑提取物的生物活性測(cè)定結(jié)果表明，煙草根莖殺螨活性物質(zhì)主要存在乙醇提取物中，以乙醇平行提取物的效果較為顯著；另從表1、2還可以看出，在乙醇之外的溶劑提取物仍然具有一定的殺螨活性，證實(shí)了煙草根莖中含對(duì)茶黃螨具有殺螨生物活性的物質(zhì)不止一種，且極性大小不同。

煙草根莖中成分較為復(fù)雜，對(duì)辣椒茶黃螨具殺螨活性的物質(zhì)含量相對(duì)過低，雖然乙醇平行提取物殺螨活性較好，但還是低于藥物噠螨酮活性。只有更深層次地將活性成分結(jié)構(gòu)化合物進(jìn)行分離、鑒定，才能充分證實(shí)殺螨活性物質(zhì)歸屬，更有利于在下一步對(duì)煙草根莖中有效成分作為植物源活性殺螨劑的開發(fā)中奠定基礎(chǔ)理論。

參考文獻(xiàn)

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[15] Finnery D J. Probit Analysis[M]. London： Cambridge University Press， 1987： 230-269.

2 結(jié)果與分析

2.1 煙草根莖平行提取物對(duì)辣椒茶黃螨的室內(nèi)觸殺毒力

從表1看出，水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和石油醚粗提物對(duì)辣椒茶黃螨的48 h校正死亡率分別為57.35%、89.56%、76.03%、58.38%和40.87%。其中，乙醇平行提取物對(duì)辣椒茶黃螨的殺螨活性最強(qiáng)。

2.2 煙草根莖順序提取物對(duì)辣椒茶黃螨的室內(nèi)觸殺毒力

從表1、2看出，相同處理時(shí)間下，煙草根莖平行提取物對(duì)辣椒茶黃螨的致死活性高于順序提取物。在煙草根莖不同溶劑平行提取物中，乙醇和丙酮提取物對(duì)茶黃螨的致死活性較好，處理48 h校正死亡率分別為89.56%和76.03%；順序提取物中，乙醇和丙酮提取物對(duì)茶黃螨的致死活性較好，處理

48 h校正死亡率分別為81.77%和73.27%，與同組其他溶劑的提取物間存在顯著差異（P<0.05），且乙醇順序提取物對(duì)茶黃螨的致死活性顯著高于丙酮順序提取物。

2.3 煙草根莖乙醇平行、順序提取物與噠螨酮對(duì)辣椒茶黃螨的毒力回歸直線

處理48 h后的5 mg/mL乙醇平行提取物、順序提取物對(duì)茶黃螨具有明顯的致死作用。為了進(jìn)一步明確平行提取物與順序提取物間的毒力差異情況，需要做進(jìn)一步的毒力測(cè)定，以致死中濃度（LC50）來比較2種溶劑提取物的毒力差異，并以15%噠螨酮乳油3 000倍液為對(duì)照，結(jié)果如表3所示。

從表3看出，2種提取物中，對(duì)辣椒茶黃螨毒力較強(qiáng)的是乙醇平行提取物，其LC50 為0.935 7 mg/mL，其致死中濃度大于對(duì)照噠螨酮的0.133 6 mg/mL，故其對(duì)辣椒茶黃螨的毒殺效果低于噠螨酮。

3 討論與結(jié)論

煙草根莖化學(xué)成分豐富，主要為煙堿、酚類、有機(jī)酸類、醛酮類、萜烯類及酯醇類等重要物質(zhì)，其中，酚類物質(zhì)具有40余種，占有較大比例，主要包括苯酚、間甲苯酚、對(duì)甲苯酚、鄰甲苯酚、苯二酚、間苯二酚、兒茶酚等，而某些酚類物質(zhì)特有的化學(xué)結(jié)構(gòu)如消螨酚（Dinex）等多具有較強(qiáng)的殺螨活性。據(jù)相似相容原理，醇類對(duì)酚的溶解性相對(duì)較高，同時(shí)，乙醇極性大，對(duì)生物堿類也有較好的溶解性，其提取物中含有大量生物堿及酚類物質(zhì)，正好闡釋了乙醇提取物殺螨活性較的原因。

煙草、除蟲菊、毒魚藤合稱為“三大植物性農(nóng)藥”，將煙草根莖作為植物源殺螨藥物的開發(fā)，至今鮮有報(bào)導(dǎo)；而將煙草根莖作為植物源殺螨藥物，除了具有原料易得、浸提工藝簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)外，還具有低毒、高效、無殘留、不易產(chǎn)生抗性等優(yōu)點(diǎn)，加之煙草種植廣泛，將其根莖作為植物源農(nóng)藥進(jìn)行開發(fā)具有很大的潛力市場(chǎng)和資源。

對(duì)煙草根莖不同溶劑提取物的生物活性測(cè)定結(jié)果表明，煙草根莖殺螨活性物質(zhì)主要存在乙醇提取物中，以乙醇平行提取物的效果較為顯著；另從表1、2還可以看出，在乙醇之外的溶劑提取物仍然具有一定的殺螨活性，證實(shí)了煙草根莖中含對(duì)茶黃螨具有殺螨生物活性的物質(zhì)不止一種，且極性大小不同。

煙草根莖中成分較為復(fù)雜，對(duì)辣椒茶黃螨具殺螨活性的物質(zhì)含量相對(duì)過低，雖然乙醇平行提取物殺螨活性較好，但還是低于藥物噠螨酮活性。只有更深層次地將活性成分結(jié)構(gòu)化合物進(jìn)行分離、鑒定，才能充分證實(shí)殺螨活性物質(zhì)歸屬，更有利于在下一步對(duì)煙草根莖中有效成分作為植物源活性殺螨劑的開發(fā)中奠定基礎(chǔ)理論。

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[9] 張永強(qiáng)，丁偉，田麗，等.黃花蒿提取物對(duì)柑橘全爪螨的生物活性[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，42（6）：44-47.

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[15] Finnery D J. Probit Analysis[M]. London： Cambridge University Press， 1987： 230-269.

2 結(jié)果與分析

2.1 煙草根莖平行提取物對(duì)辣椒茶黃螨的室內(nèi)觸殺毒力

從表1看出，水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和石油醚粗提物對(duì)辣椒茶黃螨的48 h校正死亡率分別為57.35%、89.56%、76.03%、58.38%和40.87%。其中，乙醇平行提取物對(duì)辣椒茶黃螨的殺螨活性最強(qiáng)。

2.2 煙草根莖順序提取物對(duì)辣椒茶黃螨的室內(nèi)觸殺毒力

從表1、2看出，相同處理時(shí)間下，煙草根莖平行提取物對(duì)辣椒茶黃螨的致死活性高于順序提取物。在煙草根莖不同溶劑平行提取物中，乙醇和丙酮提取物對(duì)茶黃螨的致死活性較好，處理48 h校正死亡率分別為89.56%和76.03%；順序提取物中，乙醇和丙酮提取物對(duì)茶黃螨的致死活性較好，處理

48 h校正死亡率分別為81.77%和73.27%，與同組其他溶劑的提取物間存在顯著差異（P<0.05），且乙醇順序提取物對(duì)茶黃螨的致死活性顯著高于丙酮順序提取物。

2.3 煙草根莖乙醇平行、順序提取物與噠螨酮對(duì)辣椒茶黃螨的毒力回歸直線

處理48 h后的5 mg/mL乙醇平行提取物、順序提取物對(duì)茶黃螨具有明顯的致死作用。為了進(jìn)一步明確平行提取物與順序提取物間的毒力差異情況，需要做進(jìn)一步的毒力測(cè)定，以致死中濃度（LC50）來比較2種溶劑提取物的毒力差異，并以15%噠螨酮乳油3 000倍液為對(duì)照，結(jié)果如表3所示。

從表3看出，2種提取物中，對(duì)辣椒茶黃螨毒力較強(qiáng)的是乙醇平行提取物，其LC50 為0.935 7 mg/mL，其致死中濃度大于對(duì)照噠螨酮的0.133 6 mg/mL，故其對(duì)辣椒茶黃螨的毒殺效果低于噠螨酮。

3 討論與結(jié)論

煙草根莖化學(xué)成分豐富，主要為煙堿、酚類、有機(jī)酸類、醛酮類、萜烯類及酯醇類等重要物質(zhì)，其中，酚類物質(zhì)具有40余種，占有較大比例，主要包括苯酚、間甲苯酚、對(duì)甲苯酚、鄰甲苯酚、苯二酚、間苯二酚、兒茶酚等，而某些酚類物質(zhì)特有的化學(xué)結(jié)構(gòu)如消螨酚（Dinex）等多具有較強(qiáng)的殺螨活性。據(jù)相似相容原理，醇類對(duì)酚的溶解性相對(duì)較高，同時(shí)，乙醇極性大，對(duì)生物堿類也有較好的溶解性，其提取物中含有大量生物堿及酚類物質(zhì)，正好闡釋了乙醇提取物殺螨活性較的原因。

煙草、除蟲菊、毒魚藤合稱為“三大植物性農(nóng)藥”，將煙草根莖作為植物源殺螨藥物的開發(fā)，至今鮮有報(bào)導(dǎo)；而將煙草根莖作為植物源殺螨藥物，除了具有原料易得、浸提工藝簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)外，還具有低毒、高效、無殘留、不易產(chǎn)生抗性等優(yōu)點(diǎn)，加之煙草種植廣泛，將其根莖作為植物源農(nóng)藥進(jìn)行開發(fā)具有很大的潛力市場(chǎng)和資源。

對(duì)煙草根莖不同溶劑提取物的生物活性測(cè)定結(jié)果表明，煙草根莖殺螨活性物質(zhì)主要存在乙醇提取物中，以乙醇平行提取物的效果較為顯著；另從表1、2還可以看出，在乙醇之外的溶劑提取物仍然具有一定的殺螨活性，證實(shí)了煙草根莖中含對(duì)茶黃螨具有殺螨生物活性的物質(zhì)不止一種，且極性大小不同。

煙草根莖中成分較為復(fù)雜，對(duì)辣椒茶黃螨具殺螨活性的物質(zhì)含量相對(duì)過低，雖然乙醇平行提取物殺螨活性較好，但還是低于藥物噠螨酮活性。只有更深層次地將活性成分結(jié)構(gòu)化合物進(jìn)行分離、鑒定，才能充分證實(shí)殺螨活性物質(zhì)歸屬，更有利于在下一步對(duì)煙草根莖中有效成分作為植物源活性殺螨劑的開發(fā)中奠定基礎(chǔ)理論。

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