RSV肺炎患兒T淋巴細(xì)胞亞群檢測分析

伍洪華 張藝寧 王亭

呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV），屬于一種單鏈RNA 病毒，一般兒童感染此病毒后，會導(dǎo)致其患有肺炎、病毒性細(xì)支氣管炎等疾病[1]。70% 以上兒童在嬰兒期都感染過此病毒，且導(dǎo)致嬰幼兒住院的主要原因之一便是RSV 感染，一旦患病，將會使患兒機(jī)體健康受到嚴(yán)重威脅[2]。一般來講，患兒患病后的主要癥狀表現(xiàn)包括喘息、氣促、咳嗽等?，F(xiàn)有研究認(rèn)為，RSV 感染的過程較為復(fù)雜，主要是受多種因素綜合影響而產(chǎn)生，如環(huán)境因素、遺傳體質(zhì)、免疫系統(tǒng)反應(yīng)、肺上皮細(xì)胞相關(guān)因子反應(yīng)等[3]。由于該病毒能夠具備避免正常機(jī)體產(chǎn)生免疫記憶作用的能力，所以很多患兒即便在治愈后，同樣也會出現(xiàn)再次感染同一菌株的問題。另外，兒童哮喘同RSV 感染存在著一定的聯(lián)系，獲得性免疫、固有免疫均起到了重要作用，尤其是對于嬰幼兒來講，其年齡尚小，各項(xiàng)臟器、免疫系統(tǒng)發(fā)育并不完善，因此更加容易遭受RSV 感染而患病[4]。一方面，其固有免疫并不健全，機(jī)體中幼稚樹突狀細(xì)胞在對抗原遞呈方面缺乏較強(qiáng)的能力，不能與TLR 配體之間產(chǎn)生良好的應(yīng)答關(guān)系，再加上NK 細(xì)胞對病毒細(xì)胞因子分泌方面存在不足，進(jìn)而會造成病毒清除效果受到影響[5]。另一方面，其獲得性免疫并不成熟，機(jī)體具有較弱的細(xì)胞免疫，T 淋巴細(xì)胞中的CD4+、CD8+功能均不夠完善，因此在清理病毒方面的能力依然不夠理想。可見在RSV 感染中，體液免疫反應(yīng)起到了很重要的保護(hù)性作用，并以T 細(xì)胞免疫反應(yīng)介導(dǎo)為主。根據(jù)免疫環(huán)境、刺激信號等方面的差異，原始T 細(xì)胞會分化成特性不同的T 細(xì)胞亞群，不同亞群之間的平衡對后續(xù)免疫反應(yīng)帶來基礎(chǔ)保障[6]。最開始主要是通過Th2 細(xì)胞誘導(dǎo)實(shí)現(xiàn)，進(jìn)而導(dǎo)致Thl/Th2 細(xì)胞平衡降低，因而有學(xué)者便提出對RSV 感染嚴(yán)重程度預(yù)測的一種理論結(jié)石。隨著醫(yī)學(xué)研究的逐步推進(jìn)，人們發(fā)現(xiàn)另外2 種細(xì)胞亞群對RSV 感染嚴(yán)重程度的影響更大，其為Treg（即：調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞）、Th17 細(xì)胞（即：輔助性T 細(xì)胞17）。前者主要能夠產(chǎn)生轉(zhuǎn)化生長因子、白細(xì)胞介素-40，后者主要產(chǎn)生白細(xì)胞介素-17。在RSV 感染的發(fā)病過程中，二者之間的平衡關(guān)系十分重要。本文為深入探討其使用價值，專門對2021年3 月—2022 年3 月收治的60 例RSV 肺炎患兒展開對比分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2021 年3 月—2022 年3 月RSV 肺炎患兒60 例。分組依照入院后24 h 內(nèi)最差狀態(tài)的小兒危重病例評分[7]結(jié)果，患兒被分入兩組，其中分值≥80 分患兒為重度組，分值＜80 分患兒為輕度組，兩各研究對象例數(shù)相同，即為30例。重度組男17 例，女13 例，年齡2～11 個月，平均（5.99±1.02）個月；輕度組男18 例，女12 例，年齡3～10個月，平均（5.85±1.11）個月。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究已經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核通過。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)痰液病毒診斷或鼻咽部分泌物檢驗(yàn)判定RSV 為（+）的患兒；（2）有完整病歷資料的患兒；（3）患兒家長知曉研究內(nèi)容，在告知書上簽字；（4）依從性良好，能夠配合醫(yī)學(xué)研究開展的患兒；（5）年齡在1 歲以內(nèi)的患兒。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并先天性疾病的患兒；（2）中途放棄研究的患兒；（3）病原檢測不單一，存在其他病毒核算感染的患兒；（4）存在家族哮喘史、過敏史的患兒；（5）存在免疫缺陷的患兒；（6）存在肺部發(fā)育不良或支氣管發(fā)育不良的患兒。

1.2 方法

兩組患兒均以相同方法展開T 淋巴細(xì)胞亞群檢測工作，方法如下：在空腹?fàn)顟B(tài)下采集患兒外周靜脈血（2～3 mL），放置在5 mL 肝素鈉抗凝負(fù)壓真空采血管中，按照1 500 r/min 的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行10 min 的離心操作，獲取血清樣本后，放置在恒溫零下20℃冰箱內(nèi)保存。使用流式細(xì)胞儀（美國Beckman coulter 公司生產(chǎn)，型號為Epics XL）對外周血單個核細(xì)胞濃度進(jìn)行檢測，主要包括以下幾個步驟：（1）外周血單個核細(xì)胞的分離；（2）單個核細(xì)胞體外刺激培養(yǎng)；（3）按照說明書中具體內(nèi)容展開對Treg、Th17 比例的監(jiān)測。另外，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法對血清細(xì)胞因子含量進(jìn)行測定，其內(nèi)容主要包括IL-17、IL-10、IL-8、TNF-α、IL-13、IL-2、IL-4、IFN-γ、IL-5。

1.3 觀察指標(biāo)

對比兩組外周血單個核細(xì)胞Treg、Th17 百分?jǐn)?shù)及Th17/Treg。同時比較兩組血清中細(xì)胞因子含量。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS21.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計量資料以（）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計數(shù)資料以n（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組外周血單個核細(xì)胞Treg、Th17 百分?jǐn)?shù)及Th17/Treg 比較

重度組Treg 百分?jǐn)?shù)、Treg 與Th17 的比值低于輕度組，其Th17 百分?jǐn)?shù)高于輕度組（P＜0.05）。

2.2 兩組血清中細(xì)胞因子含量比較

重度組IL-17、IL-8、TNF-α、IL-4、IL-5 均高于輕度組；其IL-10、IL-13、IL-2、IFN-γ 均低于輕度組（P＜0.05）。見表2。

表1 兩組外周血單個核細(xì)胞Treg、Th17 百分?jǐn)?shù)及Treg 與Th17 的比值比較（）

表1 兩組外周血單個核細(xì)胞Treg、Th17 百分?jǐn)?shù)及Treg 與Th17 的比值比較（）

表2 兩組血清中細(xì)胞因子含量比較（pg/mL，）

表2 兩組血清中細(xì)胞因子含量比較（pg/mL，）

表2（續(xù)）

3 討論

RSV 是導(dǎo)致老年人、嬰幼兒發(fā)生諸如肺炎、支氣管炎等下呼吸道感染產(chǎn)生的常見病原體，一般患病后會有咳嗽、喘息等臨床表現(xiàn)，對患兒機(jī)體健康帶來很多不利影響。特別是RSV 感染同哮喘的產(chǎn)生關(guān)系密切，屬于氣道炎癥性疾病的一種[8]。相關(guān)報道顯示，有50%～70% 的嬰幼兒即便完成了治療，仍然容易出現(xiàn)復(fù)發(fā)問題，特別是部分患兒還會在后續(xù)生活中發(fā)展為支氣管哮喘。由于一些患兒年齡尚小，在對其實(shí)施輔助檢查、肺通氣功能檢查的過程中并不能夠很好完成，再加上患病初期的癥狀并不顯著，因此常常會有誤診、漏診問題，對患兒身心健康帶來嚴(yán)重影響[9]?；诖?，如何對患兒開展有效的臨床診斷，也成為了醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域重點(diǎn)關(guān)注的話題。

既往研究工作報道認(rèn)為，導(dǎo)致RSV 肺炎患兒產(chǎn)生的經(jīng)典免疫學(xué)機(jī)制為Th1/Th2 失衡，然而隨著醫(yī)學(xué)研究的逐步深入，人們發(fā)現(xiàn)在RSV 肺炎發(fā)病過程中，Th17、Treg 細(xì)胞發(fā)揮了重要作用，其為新型的輔助性T 細(xì)胞[10]。前者屬于CD4+效應(yīng)T 細(xì)胞，在機(jī)體中主要分泌的細(xì)胞因子包括IL-21、IL-17 等。相關(guān)報道顯示，自身免疫病、在促炎性反應(yīng)中，該細(xì)胞與其分泌的IL-17 均能夠得到重要作用，該指標(biāo)含量越高，其氣道高反應(yīng)程度也更加顯著[11]。后者屬于一種T 細(xì)胞亞群，具有獨(dú)特的功能性，其主要分泌的細(xì)胞因子包括TGF-β 和（或）IL-10，可對抗原特異性免疫應(yīng)答產(chǎn)生一定的抑制作用，進(jìn)而增強(qiáng)機(jī)體免疫耐受程度。同時，該細(xì)胞還能夠?qū)h 的活化和增殖產(chǎn)生抑制作用，從而降低IgE 水平、減少促炎癥因子的合成，確保呼吸道高反應(yīng)性、呼吸道炎癥能夠得到良好緩解[12]。在此次研究中，對比兩組外周血單個核細(xì)胞Treg、Th17 百分?jǐn)?shù)及Treg 與Th17 的比值，顯示重度組Treg 百分?jǐn)?shù)、Treg 與Th17 的比值相較于輕度組均顯著更低（P＜0.05）；其Th17 百分?jǐn)?shù)相較于輕度組顯著更高（P＜0.05）另外對比兩組血清中細(xì)胞因子含量，結(jié)果顯示：重度組IL-17、IL-8、TNF-α、IL-4、IL-5 水平相較于輕度組均顯著更高（P＜0.05）；同時其IL-10、IL-13、IL-2、IFN-γ 水平相較于輕度組均顯著更低（P＜0.05）。由此可看出，對于重度患兒來講，其Th17 細(xì)胞誘導(dǎo)分化能力更強(qiáng)，因此血漿中IL-17分泌量也會有效提升。同時該細(xì)胞也是在IL-17 的介導(dǎo)下產(chǎn)生效應(yīng)，并與RSV 肺炎患兒發(fā)病初期的整個過程關(guān)系密切，其作用主要為正性調(diào)控。同時，該結(jié)果也能夠看出，無論是重度RSV 肺炎患兒，還是輕度RSV 肺炎患兒，其機(jī)體中都會出現(xiàn)免疫功能平衡失調(diào)的問題，且隨著病情的逐步加重，患兒免疫功能平衡失調(diào)問題也會隨之不斷加重[13]。Th17 細(xì)胞的功能主要為介導(dǎo)炎癥反應(yīng)；Treg 細(xì)胞的主要功能為介導(dǎo)免疫耐受，二者之間無論是從分化上，還是從功能上，都能夠起到相互制約、相互拮抗的作用，使機(jī)體免疫平衡得到良好維持。對Th17、Treg 細(xì)胞的特點(diǎn)做出進(jìn)一步分析，可發(fā)現(xiàn)：首先，對于Th17 細(xì)胞來講，其為一種新型CD4+T 細(xì)胞，在該細(xì)胞表面上能夠?qū)D161、白細(xì)胞介素-23R、細(xì)胞趨化因子受體6（CCR6）進(jìn)行表達(dá)，并將轉(zhuǎn)錄因子RORγt 特異性表達(dá)[14]。該細(xì)胞的主要作用為對炎性反應(yīng)產(chǎn)生刺激作用，進(jìn)而提升病毒、真菌、胞外細(xì)菌的獲得性免疫影響。該細(xì)胞能夠分泌出IL-17，且該物質(zhì)在RSV 感染中可以發(fā)揮出很多積極影響，一般主要會從四個方面造成嚴(yán)重感染問題的產(chǎn)生。（1）IL-17 能夠提升黏液分泌量。（2）IL-17 在機(jī)體中能夠促進(jìn)產(chǎn)生Th2 型細(xì)胞因子，進(jìn)而出現(xiàn)諸如IL-13 等系列細(xì)胞因子的釋放，而不是直接對氣道高反應(yīng)產(chǎn)生影響。IL-13 同樣為促炎細(xì)胞因子的一種，主要經(jīng)由Th2 細(xì)胞分泌，會對氣道上皮黏液的增加、人氣道高反應(yīng)性的調(diào)節(jié)、嗜酸粒細(xì)胞遷移等帶來關(guān)鍵性影響。（3）IL-17 在機(jī)體中往往同肺部中性粒細(xì)胞浸潤關(guān)系密切，其主要原因在于，通過基質(zhì)細(xì)胞促進(jìn)趨化因子而出現(xiàn)的[15]。（4）IL-17 可能會利用Eomes、T-bet 轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)的方式降低機(jī)體中CD8+T 細(xì)胞反應(yīng)，使病毒清除減少。其次，對于Treg 細(xì)胞來講，其能夠?qū)D8+T 細(xì)胞、CD4+T 細(xì)胞數(shù)量明顯增加。有研究顯示，嗜酸粒細(xì)胞在缺乏Treg 細(xì)胞的小鼠氣道中出現(xiàn)大量聚集的情況，這將會誘發(fā)過度的RSV 特異性T 細(xì)胞反應(yīng)以及全身炎癥反應(yīng)[16]。在此背景下，CD8+T 細(xì)胞的過量產(chǎn)生不但不會起到有效清除病毒的作用，反而會導(dǎo)致患兒病情的進(jìn)一步加重，甚至還會導(dǎo)致其組織病變問題的不斷加重。Treg 細(xì)胞在機(jī)體中，能夠利用NK 細(xì)胞、中性粒細(xì)胞對過度的炎性反應(yīng)產(chǎn)生抑制作用，進(jìn)而將低效的Th2 型免疫反應(yīng)作出限制，并對非特異性免疫反應(yīng)加以控制。在患兒機(jī)體中，若存在Treg細(xì)胞缺乏的情況，則會自發(fā)形成Th2 型反應(yīng)。該細(xì)胞不但會將過度炎性T 細(xì)胞反應(yīng)有效規(guī)避，同時也能夠?qū)Φ托У腡h2 型免疫反應(yīng)產(chǎn)生一定的限制作用。

綜上所述，通過應(yīng)用T 淋巴細(xì)胞亞群檢測分析的方式可對RSV 肺炎患兒不同病情程度進(jìn)行評價，對后續(xù)標(biāo)準(zhǔn)制定提供了借鑒作用。