豬脾轉(zhuǎn)移因子對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（CH-1R株）免疫抗體的影響

陳上永 福建省壽寧縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 福建 壽寧 355500

轉(zhuǎn)移因子（Transfer Factor，TF）是由T淋巴細(xì)胞釋放的可透析小分子物質(zhì)（分子量≤10 kD），是一種細(xì)胞因子，能夠轉(zhuǎn)移致敏信息，具有特異性和非特異性免疫功能，已用于人類醫(yī)學(xué)中對(duì)免疫抑制疾病和無法治療疾病的標(biāo)準(zhǔn)療法[1-2]，于1979年引入到動(dòng)物免疫和獸醫(yī)臨床治療中，可提高動(dòng)物的免疫功能，具有較大的應(yīng)用價(jià)值和研究意義[3-7]。

本研究旨在明確TF對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）活疫苗（CH-1R株）免疫抗體的影響，用具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的中國(guó)發(fā)明專利以豬脾臟為原料制備3批豬脾TF[8-11]，通過ELISA方法檢測(cè)PRRS活疫苗（CH-1R株）單獨(dú)免疫或與TF聯(lián)合免疫后豬PRRS免疫抗體水平的變化情況，以明確本發(fā)明專利所制備的TF對(duì)PRRS活疫苗免疫效果的影響，為TF的臨床應(yīng)用和PRRS防控提供參考。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物3～4周齡PRRS抗體陰性的健康杜長(zhǎng)大仔豬，由福建某豬場(chǎng)提供。

1.2 TF制備 由福建農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院動(dòng)物疫病研究室制備3批豬脾TF，具體如下：按照具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)發(fā)明專利方法[8-11]，選取經(jīng)外觀檢查、外源病毒檢驗(yàn)、原輔材料檢查等均合格的豬脾臟，通過搗碎凍融、滅活、切向流過濾、濾膜除菌后制成3批豬脾TF，分別為：TF-1、TF-2、TF-3。經(jīng)檢驗(yàn)，所制備3批TF的多肽含量（2.85 mg/mL、2.78 mg/mL和2.98 mg/mL）、脫E受體法效力（15.8%、16.1%和17.3%）、核 糖 含 量 （62.2 μg/mL、59.5 μg/mL和58.8 μg/mL）、細(xì)菌內(nèi)毒素含量（≤10 EU/mL）、pH值（6.91、6.95和6.94）、鑒別檢驗(yàn)、外源病毒檢驗(yàn)、支原體檢驗(yàn)、安全檢驗(yàn)等各項(xiàng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)均合格。

1.3 試劑PRRS抗體檢測(cè)ELISA試劑盒，購(gòu)自美國(guó)IDEXX公司；PRRS活疫苗（CH-1R株），購(gòu)自國(guó)內(nèi)某生物制品企業(yè)。

1.4 儀器 酶標(biāo)儀為美國(guó)Thermo公司產(chǎn)品，型號(hào)Multiskan MK3。

1.5 試驗(yàn)分組與設(shè)計(jì) 選取50頭PRRS抗體陰性的健康杜長(zhǎng)大仔豬，隨機(jī)分成5組，每組10頭，分別為聯(lián)合免疫組1、聯(lián)合免疫組2、聯(lián)合免疫組3、單獨(dú)免疫組和空白組。其中，聯(lián)合免疫組1、聯(lián)合免疫組2、聯(lián)合免疫組3分別采用TF-1、TF-2、TF-3稀釋PRRS活疫苗（CH-1R株），進(jìn)行頸部肌肉注射（聯(lián)合免疫）；單獨(dú)免疫組采用生理鹽水稀釋PRRS活疫苗（CH-1R株），進(jìn)行頸部肌肉注射（單獨(dú)免疫），設(shè)立空白組（僅注射生理鹽水），見表1。分別于免疫前3 d及免疫后第7 d、14 d、28 d、42 d和56 d采血，分離血清，采用ELISA方法測(cè)定PRRS免疫抗體水平。

表1 試驗(yàn)分組與設(shè)計(jì)

1.6 PRRS免疫抗體測(cè)定 按照ELISA方法進(jìn)行PRRS抗體測(cè)定，操作按PRRS抗體檢測(cè)ELISA試劑盒說明書進(jìn)行，記錄各組豬血清樣本和ELISA試驗(yàn)對(duì)照的OD650nm，計(jì)算樣本 （Sample）/陽性對(duì)照（Positive control）比率（S/P）。若S/P＜0.4，則PRRS抗體陰性；若S/P≥0.4，則PRRS抗體陽性。

2 結(jié) 果

結(jié)果顯示（見表2），免疫后第7 d的PRRS抗體陽性率，聯(lián)合免疫組1、聯(lián)合免疫組2及聯(lián)合免疫組3（50%、60%及50%）高于單獨(dú)免疫組（30%）。免疫后第14 d的PRRS抗體陽性率，聯(lián)合免疫組1、聯(lián)合免疫組2及聯(lián)合免疫組3（90%、70%及80%）高于單獨(dú)免疫組（50%）。免疫后第28 d的PRRS抗體陽性率，聯(lián)合免疫組1、聯(lián)合免疫組2及聯(lián)合免疫組3（100%、100%及100%）高于單獨(dú)免疫組（80%）。免疫后第42 d的PRRS抗體陽性率，聯(lián)合免疫組1、聯(lián)合免疫組2及聯(lián)合免疫組3（100%、100%及100%）高于單獨(dú)免疫組（70%）。免疫后第56 d的PRRS抗體陽性率，聯(lián)合免疫組1、聯(lián)合免疫組2及聯(lián)合免疫組3（100%、100%及100%）高于單獨(dú)免疫組（60%）。本試驗(yàn)中，空白組的PRRS抗體陽性率始終為0%。結(jié)果表明，聯(lián)合免疫組的PRRS抗體陽性率比單獨(dú)免疫組高20%～40%。

表2 免疫前后不同時(shí)間PRRS抗體水平

3 結(jié) 論

全球于1987年在美國(guó)首次發(fā)生PRRS。我國(guó)于1996年在北京地區(qū)首次暴發(fā)PRRS，并迅速傳播至我國(guó)各?。ㄗ灾螀^(qū)）豬群，導(dǎo)致我國(guó)畜牧業(yè)損失巨大，嚴(yán)重危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展[12]。PRRS疫苗佐劑的研發(fā)是PRRS防控研究的熱點(diǎn)，已有研究顯示[13-15]，短肽佐劑對(duì)PRRS活疫苗（CH-1R株）的免疫保護(hù)力具有較好的增強(qiáng)作用，可將106.0TCID50PRRS活疫苗（CH-1R株）對(duì)3×105.0TCID50高致病性PRRS TJ-F5株的攻毒保護(hù)率提高40%。TF就是一種重要的短肽佐劑，是主要由多肽和核糖組成的分子量小于10 kD的小分子多肽混合物，具有較好的免疫增強(qiáng)作用[15-26]。本研究結(jié)果顯示，TF可將PRRS活疫苗（CH-1R株）免疫豬的PRRS抗體陽性率提高20%～40%。表明TF可以提高PRRS活疫苗（CH-1R株）的免疫抗體水平。

致 謝感謝福建農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院與派生特（福州）生物科技有限公司共建福建省動(dòng)物保健與食品安全應(yīng)用技術(shù)協(xié)同創(chuàng)新中心的余勛信教授、徐磊博士、劉毅發(fā)獸醫(yī)師、鐘云欽獸醫(yī)師、蔣鈴獸醫(yī)師和謝杼絰獸醫(yī)師對(duì)試驗(yàn)的指導(dǎo)和幫助。