2017-2021年順昌縣牛羊O型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)與分析

張玉巧 順昌縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 福建 順昌 353200

口蹄疫（Foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD）是一種由 口 蹄 疫 病 毒 （Foot-and-mouth disease virus，F(xiàn)MDV）引起的可感染偶蹄類(lèi)動(dòng)物如豬、牛、羊等的高度傳染水泡性疫病[1]。不同年齡的動(dòng)物感染口蹄疫后，出現(xiàn)的癥狀也不一樣。一般成年動(dòng)物感染時(shí)體溫不斷上升，口腔黏膜、蹄部和胸部皮下等許多部位都產(chǎn)生水泡，最嚴(yán)重時(shí)可致死；幼齡動(dòng)物感染口蹄疫后，則會(huì)在出現(xiàn)水泡前，發(fā)生一系列疾病如急性心肌炎、心肌梗死等導(dǎo)致提前死亡，所以，幼齡動(dòng)物感染后的病死率會(huì)比成年動(dòng)物高，病死率接近100%[2]。成年動(dòng)物感染口蹄疫后雖然病死率低，但是發(fā)病率極高，如果一個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)有病例出現(xiàn)，基本會(huì)導(dǎo)致全場(chǎng)豬100%發(fā)病。它不但會(huì)嚴(yán)重影響感染動(dòng)物的正常生長(zhǎng)發(fā)育，而且還會(huì)造成生產(chǎn)能力大幅減少，從而嚴(yán)重抑制畜牧業(yè)發(fā)展，給畜牧業(yè)生產(chǎn)和對(duì)外貿(mào)易帶來(lái)巨大損失。所以，我國(guó)把口蹄疫定為一類(lèi)動(dòng)物疫病[3-5]。

本研究對(duì)2017-2021年南平市順昌縣抽檢的1 670份血清樣品進(jìn)行O型口蹄疫（FMD）抗體檢測(cè)并加以統(tǒng)計(jì)分析，以期為順昌縣當(dāng)?shù)貏?dòng)物疫病防控管理部門(mén)提供科學(xué)精準(zhǔn)的疫病防控技術(shù)支撐和決策參考。同時(shí)為“春防秋控”建立標(biāo)準(zhǔn)化采樣體系，對(duì)各地區(qū)、各養(yǎng)殖場(chǎng)臨床生產(chǎn)的疾病預(yù)防、疾病控制與免疫程序調(diào)整提出科學(xué)的建議，推動(dòng)當(dāng)?shù)匦竽翗I(yè)健康快速發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 樣品來(lái)源及處理 本中心于2017-2021年采集南平市順昌縣牛羊血液樣本共1 670份，每年采樣情況見(jiàn)表1。樣品采集后將采血管傾斜45°放置，室溫靜置2～4 h，待血液完全凝固后血清自然析出，3 000 r/min離心5 min，將上清轉(zhuǎn)移至無(wú)菌離心管中，做好標(biāo)記，置-20℃保存、備用。

表1 2017-2021年順昌縣牛羊血液樣本采集情況

1.2 試劑 本研究所使用的O型FMD抗體ELISA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自韓國(guó)金諾。試劑盒中含有標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清、標(biāo)準(zhǔn)陰性血清、樣品稀釋液、辣根過(guò)氧化物酶（HRPO）、已包被好抗原的96孔酶聯(lián)反應(yīng)板、洗滌液、TMB底物溶液和終止液等。

1.3 方法與結(jié)果判定 將O型FMD抗體ELISA檢測(cè)試劑盒從4℃冰箱中提前取出，恢復(fù)至室溫（25℃左右）。檢測(cè)操作步驟及結(jié)果判定均按照抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析 用Excel軟件對(duì)2017-2021年南平市順昌縣牛羊血清樣品中O型口蹄疫抗體檢測(cè)結(jié)果按不同年份、不同季節(jié)和不同養(yǎng)殖場(chǎng)類(lèi)型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。使用IBM SPSS Statistics 21統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)不同年份、不同季節(jié)和不同養(yǎng)殖場(chǎng)類(lèi)型的抗體陽(yáng)性率進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)分析其差異性，P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。

2 結(jié) 果

2.1 不同年份O型口蹄疫抗體檢測(cè)結(jié)果 由表2可知，2017-2021年南平市順昌縣牛羊O型FMD抗體每年的陽(yáng)性率分別為69.7%、80.0%、78.1%、95.4%和97.2%，除2019年外，其余年份的合格率呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，2017年與2018年相比，存在極顯著差異（P＜0.01）；2018年與2019年相比，不存在顯著差異（P＞0.05）；2019年與2020年相比，存在極顯著差異（P＜0.01）；2020年與2021年相比，不存在顯著差異（P＞0.05）。

表2 2017-2021年O型口蹄疫抗體年度檢測(cè)結(jié)果

表3 2017-2021年O型口蹄疫抗體春秋季檢測(cè)結(jié)果

2.2 不同季節(jié)O型口蹄疫抗體檢測(cè)結(jié)果 根據(jù)表3的統(tǒng)計(jì)結(jié)果，繪制不同季節(jié)抗體合格率柱狀圖，圖1A和圖1B分別為2017-2021年春季和秋季的抗體檢測(cè)結(jié)果。2017-2021年春季的平均合格率為85.5%，秋季的平均合格率為84.0%，經(jīng)卡方檢驗(yàn)，春季和秋季的合格率不存在顯著性差異（P＞0.05）。

圖1 2017-2021年春秋季抗體合格率柱狀圖

2.3 不同養(yǎng)殖場(chǎng)類(lèi)型O型口蹄疫抗體檢測(cè)結(jié)果根據(jù)表4進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示2017-2021年散養(yǎng)戶(hù)的平均合格率為81.3%，規(guī)模場(chǎng)的平均合格率為90.5%，經(jīng)卡方檢驗(yàn)，散養(yǎng)戶(hù)和規(guī)模場(chǎng)的合格率存在極顯著性差異（P＜0.01）。

表4 2017-2021年不同養(yǎng)殖場(chǎng)類(lèi)型抗體檢測(cè)結(jié)果

3 分析與討論

3.1 影響血清學(xué)檢測(cè)的因素 牛羊血清學(xué)抗體檢測(cè)結(jié)果的可信度受到個(gè)體差異、不同抗原的特性、母源抗體、感染或免疫后的時(shí)間、免疫次數(shù)或再次感染等多種因素的影響，因此，在血清學(xué)標(biāo)準(zhǔn)采樣中應(yīng)該對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)的存欄情況、生產(chǎn)情況、免疫情況、歷史抗體檢測(cè)情況、養(yǎng)殖場(chǎng)常見(jiàn)問(wèn)題等進(jìn)行全面了解并登記，采樣比例需根據(jù)各方面情況綜合評(píng)定后才能制定針對(duì)各階段、各類(lèi)型牛羊的科學(xué)采樣方案。例如口蹄疫疫苗免疫后，一般是在21 d左右抗體效價(jià)達(dá)到高峰期，在檢測(cè)牛羊口蹄疫抗體時(shí)，如果采樣過(guò)早或過(guò)晚，可能會(huì)導(dǎo)致抗體檢測(cè)結(jié)果偏低，因此，建議在免疫后21 d左右進(jìn)行采樣檢測(cè)，效果最佳。

3.2 FMD抗體檢測(cè)在牛羊生產(chǎn)中的重要性 目前，多半的發(fā)達(dá)國(guó)家已經(jīng)根除了口蹄疫，口蹄疫的發(fā)病國(guó)家主要集中在發(fā)展中國(guó)家[6]。國(guó)際上，對(duì)口蹄疫的防控，主要包括通過(guò)免疫、撲殺和監(jiān)測(cè)等各種措施來(lái)防范和遏制口蹄疫的傳入[7]。血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)是各個(gè)養(yǎng)殖生產(chǎn)領(lǐng)域中疾病診斷和防控的關(guān)鍵技術(shù)手段，定期有計(jì)劃地對(duì)牛羊開(kāi)展FMD抗體檢測(cè)，對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，既能夠掌握牛羊口蹄疫抗體的消長(zhǎng)變化規(guī)律，為制定最佳的免疫規(guī)劃，及時(shí)加強(qiáng)免疫，從而提升牛羊的抗體水平，也可以評(píng)估牛羊的免疫效果，改善和優(yōu)化現(xiàn)有的免疫程序，同時(shí)對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行建檔，了解牛羊群體健康情況，可作為疫病防控的重要依據(jù)。根據(jù)抗體檢測(cè)結(jié)果，可以分析養(yǎng)殖場(chǎng)當(dāng)前的實(shí)際生產(chǎn)問(wèn)題以及可能由哪些因素所引起，進(jìn)而提出具體的優(yōu)化方法，最后目的就是實(shí)現(xiàn)對(duì)相關(guān)疾病的凈化，從而緩解養(yǎng)殖場(chǎng)的實(shí)際生產(chǎn)問(wèn)題，并提高養(yǎng)殖場(chǎng)生產(chǎn)業(yè)績(jī)。通過(guò)對(duì)FMD抗體進(jìn)行監(jiān)測(cè)，可以避免牛羊出現(xiàn)免疫空白期，提高群體免疫保護(hù)力，即使養(yǎng)殖場(chǎng)出現(xiàn)零星病例，也能夠有效防止大規(guī)模疫情暴發(fā)。另外，通過(guò)對(duì)未免疫的牛羊進(jìn)行FMD抗體水平檢測(cè)，能夠及時(shí)發(fā)現(xiàn)隱形感染病例，進(jìn)而精確地掌握養(yǎng)殖場(chǎng)的污染情況，進(jìn)一步制定疫情防控措施。

3.3 抗體低下情況下的補(bǔ)免及預(yù)防保健建議 血清學(xué)ELISA檢測(cè)法具有性?xún)r(jià)比高、高效安全、特異靈敏度好等優(yōu)勢(shì)，養(yǎng)殖場(chǎng)平常應(yīng)定期進(jìn)行各種疾病抗體的檢測(cè)，防重于治，要巧用檢測(cè)來(lái)降低或消除風(fēng)險(xiǎn)。平常的抗體檢測(cè)是最重要的，不要等發(fā)病了才去采血檢測(cè)。特別是當(dāng)養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)展到一定規(guī)模，要做好可持續(xù)經(jīng)營(yíng)發(fā)展，必須重視抗體檢測(cè)。不管養(yǎng)殖場(chǎng)大小，科學(xué)的做法就是每季度給牛羊群做一次健康體檢。同時(shí)要注意抗體監(jiān)測(cè)樣品要有相當(dāng)?shù)臄?shù)量才具有統(tǒng)計(jì)意義，數(shù)量太少時(shí)不能代表整個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)的抗體水平，數(shù)量過(guò)多時(shí)不經(jīng)濟(jì)，小型及散養(yǎng)戶(hù)各階段建議按10%～30%比例進(jìn)行采樣。

通過(guò)科學(xué)的方式分析牛羊免疫狀況，為養(yǎng)殖場(chǎng)管理人員提供數(shù)字化的免疫學(xué)信息，并指導(dǎo)養(yǎng)殖場(chǎng)科學(xué)規(guī)劃整體生產(chǎn)流程。2017-2021年，順昌縣抽檢的1 670份血清樣品，除2017年的O型口蹄疫抗體合格率較低外，其他年份均達(dá)到78%以上，免疫效果達(dá)到我國(guó)最低標(biāo)準(zhǔn)（抗體陽(yáng)性率≥70%）。通過(guò)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，春秋兩個(gè)季節(jié)的抗體合格率不存在顯著性差異，春季的合格率略高于秋季。但是散養(yǎng)戶(hù)的合格率與規(guī)模場(chǎng)存在極顯著性差異，而且2017年的散養(yǎng)戶(hù)合格率為67.3%，明顯低于國(guó)家最低標(biāo)準(zhǔn)，表明可能出現(xiàn)漏免或免疫不合格的狀況，所以，應(yīng)該強(qiáng)化管理，并適時(shí)進(jìn)行免疫。按照我國(guó)最低標(biāo)準(zhǔn)，建議進(jìn)一步完善免疫程序，以提高牛羊的免疫合格率，以減少口蹄疫發(fā)生的可能性。

在我國(guó)，針對(duì)口蹄疫的防治措施主要是通過(guò)免疫技術(shù)來(lái)加以控制，同時(shí)采取一系列其他防控措施。如制定多種偶蹄獸動(dòng)物的衛(wèi)生防疫制度，定期對(duì)進(jìn)出養(yǎng)殖場(chǎng)的車(chē)輛、養(yǎng)殖場(chǎng)環(huán)境、料槽和棚舍等進(jìn)行多重消毒，阻止病原的傳播，消毒劑可以選用過(guò)氧乙酸、石灰乳和燒堿等。為動(dòng)物提供較好的生長(zhǎng)環(huán)境，平時(shí)注重圈舍的衛(wèi)生和消毒；普及和提高養(yǎng)殖戶(hù)的疫病防控意識(shí)，促進(jìn)防控工作的實(shí)施；養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)盡量做到自繁自養(yǎng)，非必要不引種；免疫工作認(rèn)真進(jìn)行，合理規(guī)范使用疫苗[8-10]。雖然我國(guó)對(duì)口蹄疫的防控措施到位，但是目前仍有部分地區(qū)出現(xiàn)散發(fā)性病例，主要原因是從國(guó)外引種，導(dǎo)致國(guó)外毒株不斷傳入，因此，針對(duì)口蹄疫進(jìn)行快速診斷必不可少。

結(jié)果分析表明順昌縣牛羊O型口蹄疫免疫情況與免疫效果總體上較為理想，雖然2017年的免疫效果較差，但隨后幾年合格率顯著提高，都能達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。由于各個(gè)年份、季節(jié)以及不同養(yǎng)殖場(chǎng)的免疫水平都有一定差異，所以，各地各場(chǎng)要針對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)自身情況，對(duì)口蹄疫的流行狀況建立科學(xué)合理的免疫程序，并運(yùn)用ELISA方法定期對(duì)牛羊進(jìn)行常見(jiàn)疾病的普查，以有效消除隱性感染動(dòng)物，定期對(duì)進(jìn) 出養(yǎng)殖場(chǎng)的車(chē)輛和其他相關(guān)用品進(jìn)行消毒，預(yù)防疾病于未然，最大限度減少因動(dòng)物疾病所造成的經(jīng)濟(jì)損失。