2018—2020年新疆地區(qū)哺乳仔豬主要病毒性傳染病的抗體檢測與分析

常軍帥，段付霜，劉若彤，屈勇剛，梁 晏，李 娜，王紫陽，趙 玉，邱國斌

（1.石河子大學(xué)動物科技學(xué)院，新疆 石河子 832003；2.動物疾病防控兵團(tuán)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 石河子 832003；3.第四師畜牧獸醫(yī)站，新疆 可克達(dá)拉 831304）

哺乳仔豬指出生至斷奶前以母乳為主要營養(yǎng)來源的仔豬，在我國仔豬斷奶日齡通常為21～28日齡[1]。該階段的豬群具有怕冷、缺乏先天免疫力、消化功能不全等缺點(diǎn)，在飼養(yǎng)管理過程中，死亡率可高達(dá)20%，哺乳仔豬的存活率及生長速度，直接影響著豬場的經(jīng)濟(jì)效益[2]。疫病是導(dǎo)致哺乳仔豬死亡的主要原因。經(jīng)調(diào)查得出，由疾病導(dǎo)致的死亡數(shù)占哺乳仔豬死亡數(shù)的25%，嚴(yán)重阻礙了我國養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展[2]。病毒性傳染病對哺乳仔豬群健康存在巨大威脅：豬瘟是由豬瘟病毒（classical swine fever virus, CSFV）引起的一種既可水平傳播、又可垂直傳播的高度接觸性和致死性病毒傳染病，剖檢可見實(shí)質(zhì)性器官有出血點(diǎn)，回盲瓣處淋巴結(jié)呈“紐扣狀”壞死，哺乳仔豬患病后死亡率達(dá)50%，未死亡的豬生長緩慢，變?yōu)榻┴i，在以后的生長過程中不定期向外排毒[3]；偽狂犬病是由皰疹病毒科、皰疹病毒屬的偽狂犬病病毒（PRV）引起的，患病豬出現(xiàn)明顯的神經(jīng)癥狀，伴隨腹瀉發(fā)生，該病可導(dǎo)致15日齡以內(nèi)的仔豬出現(xiàn)100%的死亡率，剖檢可見腦出血、心肌炎等典型癥狀[4]；豬圓環(huán)病毒病是由圓環(huán)病毒2型（PCV2）引起的免疫抑制性疾病，該病會導(dǎo)致豬群免疫力低下、疫苗免疫效果下降，嚴(yán)重威脅著哺乳仔豬的健康；豬藍(lán)耳病在我國被列為二類動物疫病，哺乳仔豬患病后呼吸困難、腹瀉、體溫升高，死亡率達(dá)25%[5]。針對這些病毒性傳染病，生產(chǎn)中主要采用母豬產(chǎn)前加強(qiáng)免疫，通過提高母源抗體及超前免疫兩種方法來增強(qiáng)哺乳仔豬的抗體水平，但對于抗體水平的高低，需及時評價，以便更好地指導(dǎo)生產(chǎn)。

本試驗(yàn)采用ELISA抗體檢測方法，對采集到的哺乳仔豬血清進(jìn)行了CSFV、PRRSV、PRV-gB、PRV-gE、PCV2的抗體檢測，以期為新疆地區(qū)哺乳仔豬的健康養(yǎng)殖提供幫助。

1 材料

1.1 樣品

2018年1月至2020年12月期間從新疆石河子市、巴音郭楞蒙古自治州、伊犁、塔城地區(qū)、奎屯市、阿克蘇市，隨機(jī)采集270份血清樣品，送至石河子大學(xué)動物科技學(xué)院傳染病實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測。

1.2 材料和儀器

豬瘟病毒（CSFV）ELISA抗體檢測試劑盒、豬偽狂犬病病毒gB（PRV-gB）ELISA抗體檢測試劑盒、藍(lán)耳病病毒（PRRSV）ELISA抗體檢測試劑盒、豬偽狂犬病病毒gE（PRV-gE）ELISA檢測試劑盒均購自北京愛德士元亨生物科技有限公司；豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）ELISA抗體酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，購自哈爾濱元亨生物藥業(yè)有限公司；獸用一次性采血器5 mL為美康實(shí)業(yè)有限公司產(chǎn)品；自動酶標(biāo)儀、微量移液器購自賽默飛世爾科技公司。

2 方法

2.1 樣品處理

將哺乳仔豬固定好后，使用酒精棉球?qū)η扒混o脈窩消毒，用無菌采血器45°進(jìn)針，采集5 mL血液，室溫下斜置30 min，收集血清，放于4 ℃保存（8 d以內(nèi)）。

2.2 ELISA檢測方法

根據(jù)不同檢測項(xiàng)目的說明書，進(jìn)行CSFV、PRV-gB、PRV-gE、PRRSV、PCV2的抗體檢測。注意各個檢測過程中的溫度及避光要求。

2.3 結(jié)果判定

CSFV：試驗(yàn)判定成立后，計算阻斷率。阻斷率（%）=（陰性O(shè)D450平均值-樣品OD450平均值）/陰性O(shè)D450均值。當(dāng)阻斷率≤30%時，為陰性；當(dāng)30%＜阻斷率＜40%時，為可疑；當(dāng)阻斷率≥40%時，為陽性。

PRV-gB、PRV-gE：當(dāng)陰性O(shè)D650平均值-陽性O(shè)D650平均值≥0.3時，試驗(yàn)成立。通過計算S/N=樣品OD650/陰性O(shè)D650，進(jìn)行結(jié)果判定。當(dāng)S/N＞0.70時，為陰性；當(dāng)0.60＜S/N≤0.70時，為可疑；當(dāng)S/N≤0.60時，為陽性。

PCV2：試驗(yàn)成立的條件是陰性對照的OD450均值≤0.15，陽性對照OD450均值≥0.60。若不符合，需再次進(jìn)行試驗(yàn)。臨界值=陽性對照OD450均值×1/4。被檢樣品OD450值＜臨界值，判定為抗體陰性；被檢樣品OD450值≥臨界值，則判定為抗體陽性。

PRRSV：試驗(yàn)成立后，計算S/P值。其中S=樣品OD650平均值-陰性對照OD650平均值，P=陽性對照OD650平均值-陰性對照OD650平均值。S/P≥0.40為陽性，S/P＜0.40判為陰性。

當(dāng)出現(xiàn)可疑時，需再次進(jìn)行檢測。再次檢測時不符合陽性標(biāo)準(zhǔn)，統(tǒng)一安排陰性處理（PRV-gE相反）。

2.4 數(shù)據(jù)分析

使用SPSS 20.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計算總體平均數(shù)。

3 結(jié)果

3.1 CSFV抗體檢測結(jié)果

在2018—2020年中，新疆地區(qū)哺乳仔豬整體CSFV抗體陽性率為77.35%（140/181），其中2018年、2019年、2020年的CSFV抗體陽性率分別是92.00%（23/25）、75.31%（61/81）、74.67%（56/75）。結(jié)果見表1。

表1 不同年份的哺乳仔豬CSFV抗體檢測結(jié)果

3.2 PRV-gB抗體檢測結(jié)果

在2018—2020年中，新疆地區(qū)哺乳仔豬整體PRV-gB抗體陽性率為90.29%（158/175），其中2018年、2019年、2020年的PRV-gB抗體陽性率分別是97.50%（39/40）、87.50%（70/80）、89.09%（49/55）。結(jié)果見表2。

表2 不同年份的哺乳仔豬PRV-gB抗體檢測結(jié)果

3.3 PRV-gE抗體檢測結(jié)果

在2018—2020年中，新疆地區(qū)哺乳仔豬整體PRV-gE抗體陽性率為26.26%（52/198），其中2018年、2019年、2020年的PRV-gE抗體陽性率分別是30.00%（12/40）、31.25%（25/80）、19.23%（15/78）。結(jié)果見表3。

表3 不同年份的哺乳仔豬PRV-gE抗體檢測結(jié)果

3.4 PCV2抗體檢測結(jié)果

由表4可知，在2018—2020年中，新疆地區(qū)哺乳仔豬整體PCV2抗體陽性率為57.30%（106/185），其中2018年、2019年、2020年的PCV2抗體陽性率分別是54.55%（30/55）、44.00%（22/50）、67.50%（54/80）。在平均OD450值中，2019年的最低，為0.46；2020年最高，為0.91。

表4 不同年份的哺乳仔豬PCV2抗體檢測結(jié)果

3.5 PRRSV抗體檢測結(jié)果

由表5可知，在2018—2020年中，新疆地區(qū)哺乳仔豬整體PRRSV抗體陽性率為76.30%（206/270），其中2018年、2019年、2020年的PRRSV抗體陽性率分別是86.67%（26/30）、80.00%（60/75）、72.73%（120/165）。在平均S/P值中，2020年的最低，為1.01；2019年最高，為1.73。

表5 不同年份的哺乳仔豬PRRSV抗體檢測結(jié)果

4 討論與分析

斷奶仔豬的健康狀況直接影響著后續(xù)保育階段和肥育階段的飼養(yǎng)管理，而多數(shù)情況下由于不知道仔豬體內(nèi)母源抗體的水平，哺乳仔豬免疫過程中就會出現(xiàn)母源抗體干擾疫苗免疫效果或疫苗免疫不及時造成的抗體水平太低不足以保護(hù)哺乳仔豬，所以采用ELISA方法對哺乳仔豬進(jìn)行了主要病毒性傳染病的抗體檢測。2018—2020年，新疆地區(qū)哺乳仔豬整體CSFV和PRRSV抗體陽性率分別為77.35%（140/181）和76.30%（206/270），高于國家規(guī)定的70%，說明該地區(qū)哺乳仔豬CSFV和PRRSV免疫工作合格[6]。范慶紅[6]曾對山東省萊州市6個規(guī)模豬場的119份哺乳仔豬血清樣品通過ELISA方法進(jìn)行CSFV和PRRSV免疫抗體水平檢測，陽性率分別為86.55%（103/119）和89.92%（107/119）；史洪巖等[7]得出北京密云地區(qū)規(guī)?；i場的哺乳仔豬CSFV和PRRSV抗體水平陽性率分別為88.57%（31/35）和91.43%（32/35），新疆地區(qū)哺乳仔豬的CSFV和PRRSV抗體水平明顯低于這兩地，導(dǎo)致這種現(xiàn)象的原因可能是由豬群的飼養(yǎng)環(huán)境、免疫情況及疫苗有效性等因素引起的，可對妊娠母豬做好疫病的免疫工作，保證新生仔豬有較高的母源抗體水平。

2018—2020年，新疆地區(qū)哺乳仔豬整體PRV-gB和PRV-gE抗體陽性率分別為90.29%（158/175）和26.26%（52/198）。PRV-gB抗體陽性率超過了90%，在生產(chǎn)中常采用仔豬出生后3日齡滴鼻免疫偽狂犬病疫苗，由于滴鼻免疫不受母源抗體干擾，能刺激機(jī)體的黏膜免疫系統(tǒng)產(chǎn)生保護(hù)力[8]。PRV-gE抗體陽性率的出現(xiàn)，說明該地區(qū)存在PRV野毒感染情況。PRV可通過妊娠母豬垂直侵入胎兒體內(nèi)，推測這是導(dǎo)致哺乳仔豬群出現(xiàn)PRV-gE抗體陽性率的主要原因[9]。

2018—2020年，新疆地區(qū)哺乳仔豬整體PCV2抗體陽性率為57.30%（106/185），低于國家規(guī)定的70%，可針對產(chǎn)前母豬加強(qiáng)免疫，提高哺乳仔豬整體的免疫效果?？傊?，針對哺乳仔豬，不僅要做好免疫接種工作，還要從飼養(yǎng)管理方面入手，減少去勢等應(yīng)激，才能使仔豬更快更健康的成長。