一例豬繁殖與呼吸綜合征的診斷

周昊然，張佳璐，李 靖，馮朝陽，孟凡亮，劉思當

（山東農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，山東 泰安 271018）

豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）是目前世界范圍內(nèi)危害生豬生產(chǎn)最重要的病原體之一，每年給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。目前，在我國雖然多種商品化疫苗已得到廣泛應用，絕大多數(shù)豬場用PRRSV減毒活疫苗或滅活苗高強度免疫，但感染率仍居高不下，肥育豬場普遍陽性帶毒，陰性種豬場極少[1]，豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）的危害仍然很嚴重。因PRRSV疫苗免疫效果的不確定性、類NADC30毒株的廣泛流行，多種毒株如類NADC30、34毒株、高致病性毒株、重組毒株的存在和PRRSV傳播途徑的多樣性，使得PRRS防控難度巨大。

1 材料與方法

1.1 發(fā)病背景

山東省肥城市某豬場存欄母豬60頭，保育豬310頭，2022年3月該豬場7頭懷孕后期（85～105 d）母豬出現(xiàn)流產(chǎn)，死胎數(shù)增加，約80頭55日齡左右的保育豬出現(xiàn)咳喘，呼吸急促困難，并呈犬坐式呼吸，病豬發(fā)燒40～41.5 ℃，精神沉郁，采食量下降，且有5頭保育豬死亡。此前該豬場從未進行過PRRS疫苗的免疫，發(fā)病后對豬群使用了包被恩諾沙星拌料治療，但是效果不佳，未能有效控制豬只的發(fā)病與死亡，遂前來就診。

1.2 主要儀器及試劑

Taq DNA聚合酶，DNA Marker DL 2 000，購自大連寶生物工程有限公司；DNA/RNA KIT，Easy Script One-Step RT-PCR Supe Mix，購自北京全式金生物技術有限公司。

1.3 送診病豬臨床癥狀

送檢病死豬生前呈犬坐姿式，精神沉郁，驅(qū)趕不動，呼吸急促且困難，鼻翼扇動，發(fā)燒，可視黏膜發(fā)紺，耳、嘴及頸部皮膚呈藍紫色（圖1）。

1.4 剖檢變化和樣品采集

病死豬剖檢發(fā)現(xiàn)整個肺臟呈暗紅色腫大（圖2），肺切面硬實，有少量漿液滲出；頸部淋巴結、肺門淋巴結呈紫色充血腫脹；腹股溝淋巴結充血腫大。采集豬扁桃體、肺臟、肺門淋巴結、脾臟、腹股溝淋巴結組織。一份放10%福爾馬林溶液固定，一份于-80 ℃冰箱凍存。

1.5 病料處理

取適量凍存的淋巴結、肺臟、脾臟組織病料放入研磨器中，加入1 mL滅菌PBS，將研磨后產(chǎn)物轉(zhuǎn)至1.5 mL滅菌離心管中。置于-80 ℃冰箱中反復凍融3次，再12 000 r/min離心7 min，將上清液吸入到滅菌離心管中并完成核酸的提取。

1.6 PCR/RT-PCR

根據(jù)NCBI上已發(fā)表的PRRSV、豬瘟病毒（CSFV）、豬偽狂犬病病毒（PRV）的保守基因序列設計特異性引物（表1），配置PCR/RT-PCR反應體系，進行3種病毒的檢測。

表1 PCR/RT-PCR引物序列

2 結果

2.1 病毒PCR/RT-PCR檢測結果

通過PCR/RT-PCR擴增特異性病毒基因片段后，將擴增產(chǎn)物在1%瓊脂糖凝膠中進行電泳，電泳結束后根據(jù)凝膠在紫外凝膠成像儀下條帶位置判斷豬只的病原感染情況（圖3），結果表明豬只感染了PRRSV，而未檢出其他病毒感染。

2.2 病理組織學診斷

10%福爾馬林溶液固定組織，制作常規(guī)石蠟切片，HE染色，鏡檢發(fā)現(xiàn)支氣管周圍及肺泡壁大量巨噬細胞、淋巴細胞浸潤增生，肺泡壁顯著增厚，輕度充血、出血，肺組織呈典型間質(zhì)性肺炎病變（圖4）。

3 防治與討論

根據(jù)豬場發(fā)病情況、臨床癥狀、剖檢病變、病毒檢測及病理組織學觀察結果綜合分析，該病例是PRRSV感染所致的PRRS。

PRRSV傳播迅速，豬場中普遍存在，病毒可通過精液傳播、空氣傳播、接觸傳播，并且母豬可垂直傳播給仔豬，感染豬只長時間帶毒、排毒?；趯RRSV傳播、致病機制、遺傳變異等特性以及免疫防控綜合分析，為豬場制定了綜合防控措施。發(fā)病豬群使用包被替米考星或泰萬菌素和抗病毒中藥（黃芪板青）進行治療；豬場執(zhí)行嚴格消毒措施；及時調(diào)整優(yōu)化了豬場的免疫程序：選擇經(jīng)典毒株致弱活疫苗進行緊急普免。并建議豬場選擇該疫苗按下列程序常態(tài)化免疫，后備母豬配種前2次免疫馴化，基礎母豬每年3次普免，仔豬2周左右初免，4周后二次免疫。

用藥5 d后豬群咳喘問題明顯減輕，半月后回訪豬場，豬群已經(jīng)基本無呼吸道問題。在采取經(jīng)典毒株致弱活疫苗免疫后，后續(xù)批次豬只只有零星存在咳喘癥狀，且較易治愈。

3.1 藍耳病的預防

藍耳病的預防策略要進行精細化、系統(tǒng)化的制定，首先要明確本豬場存在的疫病傳播風險環(huán)節(jié)，強化豬場生物安全，做好引種檢測隔離，加強人員入場流程與人員場中流動管理，嚴格進行車輛、入場物資的洗消工作，有條件的豬場可以采用空氣過濾系統(tǒng)來降低PRRSV進入豬場導致豬群感染發(fā)病的風險。

疫苗免疫是防控PRRSV的重要措施，但是一直以來飽受爭議，滅活疫苗效果不佳，活疫苗免疫有效，但卻是一把雙刃劍。提倡使用疫苗的觀點是疫苗雖無法有效阻斷PRRSV對豬只的感染，但是可以降低豬只感染后的病毒載量與排毒時間，減輕豬只發(fā)病的臨床癥狀與發(fā)病嚴重程度，降低發(fā)病豬群的死亡率，從而減少因該病造成的經(jīng)濟損失。建議謹慎使用或反對藍耳病疫苗免疫的觀點，主要是基于滅活疫苗效果不佳或無效，減毒活疫苗使用后給豬場造成巨大安全隱患[2]。

3.2 藍耳病的控制

3.2.1 細菌繼發(fā)感染的控制 藍耳病對豬的呼吸系統(tǒng)造成損傷，并且造成免疫抑制，打開了呼吸道病原菌入侵的門戶，從而使得豬只更容易繼發(fā)細菌感染導致更嚴重的呼吸道疾病，如豬群中存在藍耳病時，更容易發(fā)生豬支原體肺炎、豬肺疫、傳染性胸膜肺炎、副豬嗜血桿菌病。當豬群中已存在豬支原體肺炎、豬傳染性萎縮性鼻炎時，呼吸道黏膜屏障受損，此時豬群感染PRRSV后會導致更嚴重的傷亡與損失。藍耳病的控制較為困難，控制方案也較少，在豬場暴發(fā)藍耳病時，可適當使用抗生素（如替米考星、泰萬菌素、頭孢、氟苯尼考等）與解熱抗炎藥物（卡巴匹林鈣、氟尼辛葡甲胺）來控制豬繼發(fā)的細菌病，從而降低豬群的死亡率。

3.2.2 后備母豬血清馴化技術 后備母豬如果在引入經(jīng)產(chǎn)母豬群前PRRSV陰性或者對PRRSV免疫力弱，則在將后備母豬引入經(jīng)產(chǎn)母豬群中之前，可以進行對后備母豬的馴化，使后備母豬在配種之前感染與經(jīng)產(chǎn)母豬群相同的PRRSV毒株，且在引入經(jīng)產(chǎn)母豬群前完全康復，則會形成對豬場存在PRRSV毒株的堅強免疫力，使后備母豬在配種和妊娠期間不會轉(zhuǎn)為病毒血癥陽性，可減少對豬群及新生仔豬的傳染風險[3]。

3.2.3 閉群凈化 因為豬藍耳病疫苗效果的不確實與可能潛在的風險問題，目前閉群凈化技術已廣泛用于從母豬群清除 PRRSV。在感染PRRSV的母豬群中實行閉群飼養(yǎng)管理，最終使豬群PRRSV帶毒率下降或者消失。主要包括“閉群飼養(yǎng)、馴化、檢測與強化淘汰、增強生物安全”幾個重要環(huán)節(jié)。此技術可以對PRRS有很好的控制效果，但需豬場有高水平的生物安全體系、獸醫(yī)團隊、管理團隊，要保證不能有外來的新PRRSV毒株進入，在閉群過程中豬場空欄率上升，欄舍利用率下降，豬場會有較大經(jīng)濟壓力。

4 建議與展望

我國在非洲豬瘟疫情下豬場生物安全體系建設普遍提升的背景下，對于傳染性強的PRRSV仍防控較差，需要在生產(chǎn)實踐中總結出更加有效的防控對策，助力于我國PRRS的控制與根除。