單一和復(fù)合乳酸菌添加對(duì)高丹草青貯效果的影響

付薇，陳偉，王小利，周麗，覃濤英，韓永芬*，孟軍江

（1貴州省草業(yè)研究所，貴州貴陽 550006；2貴州金農(nóng)富平生態(tài)農(nóng)牧科技有限公司，貴州銅仁 554100）

0 引言

【研究意義】高丹草（×）是由飼用高粱［（L.）Moench］和蘇丹草［（Piper）.Stapf］雜交產(chǎn)生的禾本科高光效C4植物，其鮮草產(chǎn)量高，再生能力強(qiáng)、抗倒伏、粗蛋白質(zhì)含量高，飼喂家畜消化率高、適口性好（白春生等，2020）。6—9月是高丹草的生長(zhǎng)旺季，集中生長(zhǎng)通常造成鮮草過剩，利用乳酸菌發(fā)酵迅速降低體系pH，最大程度減緩植物呼吸，抑制好氧微生物生長(zhǎng)，是目前長(zhǎng)效保存高丹草的常用辦法。【前人研究進(jìn)展】國(guó)內(nèi)學(xué)者從營(yíng)養(yǎng)供給、留茬高度、混合青貯等方面對(duì)高丹草發(fā)酵效果開展了一定研究。白春生等（2020）通過不同施氮量和留茬高度開展高丹草發(fā)酵品質(zhì)比較研究，結(jié)果表明施氮量300 kg/ha時(shí)，高丹草青貯發(fā)酵品質(zhì)良好，留茬高度從15 cm增至60 cm，可明顯改善高丹草青貯飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值；張歡等（2020）、郭暉（2021）開展高丹草與紫花苜?；熨A比例研究，結(jié)果表明混合高丹草能顯著降低青貯pH，各混貯比例間發(fā)酵品質(zhì)差異顯著；尤思涵等（2021）研究高丹草與黑麥草混貯效果，結(jié)果表明高丹草與黑麥草以3∶7比例混貯，可獲得最高乳酸值和乳酸菌數(shù)量。有研究發(fā)現(xiàn)，添加適宜乳酸菌可快速主導(dǎo)發(fā)酵，有效增加環(huán)境乳酸含量、加速青貯進(jìn)程，對(duì)改善底物營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)有著積極的促進(jìn)作用（許冬梅等，2017；周俊華等，2020）；但不同類型乳酸菌具有不同的發(fā)酵功能，底物種類、乳酸菌類別、菌系間協(xié)同作用等多種因素均會(huì)對(duì)青貯的終期發(fā)酵效果產(chǎn)生不同程度的影響（Liu et al.，2016；Oliveira et al.，2017）。植物乳桿菌（）和戊糖片球菌（）是青貯常見的同型發(fā)酵乳酸菌，在快速增加乳酸含量、降低pH和減緩營(yíng)養(yǎng)損失方面效果顯著（關(guān)皓等，2017）；李小鈴等（2019）利用植物乳桿菌、戊糖片球菌和食竇魏斯氏菌（）復(fù)合添加發(fā)酵扁穗牛鞭草，其微生物菌群和感官品質(zhì)最優(yōu)，乳酸含量最高。短乳桿菌（）為異型發(fā)酵乳酸菌，青貯時(shí)能產(chǎn)生大量抑制酵母菌、霉菌等好氧微生物生長(zhǎng)的乙酸（黃峰等，2019）。徐生陽等（2019）研究指出，短乳桿菌對(duì)防止全株玉米青貯有氧腐敗變質(zhì)有顯著作用?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】不同乳酸菌復(fù)合添加對(duì)不同作物青貯效果的影響有所差異（苗芳等，2017；王旭哲等，2018），但其對(duì)高丹草青貯品質(zhì)及微生物變化的影響研究鮮見報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】以前期從禾本科牧草中篩選出的植物乳桿菌、戊糖片球菌和短乳桿菌為試驗(yàn)材料，通過單一和復(fù)合乳酸菌添加，探索不同菌劑組配對(duì)高丹草青貯效果的影響，為高丹草優(yōu)良青貯菌劑的研發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

青貯原料為蜀草1號(hào)高丹草，于2018年4月12日播種于貴州省草業(yè)研究所松桃縣高產(chǎn)飼草基地，種植面積0.67 ha，種植行距50 m×50 m，2018年7月31日蠟熟初期收割。供試菌種是貴州省草業(yè)研究所前期從禾本科牧草中分離獲得的植物乳桿菌（保存編號(hào)LP06）、戊糖片球菌（保存編號(hào)PP02）和短乳桿菌（保存編號(hào)LBR02）。

1.2 試驗(yàn)方法

將高丹草晾曬至水分含量約65%，切碎至3～5 cm長(zhǎng)度，裝入聚乙烯袋（塑料袋規(guī)格為600 mm×500 mm），每袋1500 g。設(shè)8個(gè)菌劑添加處理：（1）CK（無乳 酸 菌）；（2）LP06；（3）PP02；（4）LBR02；（5）F-1（LP06∶PP02=1∶1）；（6）F-2（LP06∶LBR02=1∶1）；（7）F-3（PP02∶LBR02=1∶1）；（8）F-4（LP06∶PP02∶LBR02=1∶1∶1），每處理3次重復(fù)，乳酸菌添加量5×10CFU/g。按10 mL/kg的總劑量混合各乳酸菌組合，10倍無菌蒸餾水稀釋后均勻噴灑至高丹草原料上，真空密封機(jī)抽氣密封，常溫貯藏60 d。

1.3 測(cè)定指標(biāo)及方法

青貯60 d后開窖，對(duì)各處理進(jìn)行感官品質(zhì)評(píng)定，測(cè)定微生物數(shù)量、發(fā)酵品質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)成分。

1.3.1 感官品質(zhì)評(píng)定采用德國(guó)農(nóng)業(yè)協(xié)會(huì)（Deutche Landwirtschaftes Gesellschaft，DLG）評(píng)分方法，根據(jù)氣味、結(jié)構(gòu)和色澤3項(xiàng)指標(biāo)對(duì)各處理青貯品質(zhì)感官進(jìn)行評(píng)定，總分20分，其中氣味14分，結(jié)構(gòu)4分，色澤2分，得分16～20分為優(yōu)等，10～15分為良等，5～9分為中等，0～4分為下等。

1.3.2 微生物數(shù)量測(cè)定包括乳酸菌、酵母菌和霉菌，稱取20 g樣品于180 mL無菌生理鹽水（0.85%NaCl）中，4℃下振蕩1 h后制備系列梯度稀釋液（10～10）（李小鈴等，2019）。各微生物均采用菌落計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)，將稀釋液涂布于MRS固體培養(yǎng)基，37℃下厭氧培養(yǎng)72 h，統(tǒng)計(jì)乳酸菌菌落數(shù)；在馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基上涂布稀釋液，25℃下有氧培養(yǎng)72 h后統(tǒng)計(jì)酵母菌菌落數(shù)；于馬丁培養(yǎng)基上涂布稀釋液，25℃下有氧培養(yǎng)72 h，統(tǒng)計(jì)霉菌菌落數(shù)。

1.3.3 發(fā)酵品質(zhì)測(cè)定包括pH、氨態(tài)氮（Ammonium nitrogen，NH-N）、乳酸、乙酸、丙酸和丁酸。pH采用酸度計(jì)（PHS-25）測(cè)定；NH-N含量采用苯酚—次氯酸鈉比色法分析，乳酸及有機(jī)酸采用高效液相色譜法分析（Broderick and Kang，1980）。

1.3.4 營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定包括干物質(zhì)（Dry matter，DM）、粗蛋白質(zhì)（Crude protein，CP）、可溶性碳水化合物（Water-soluble carbohydrates，WSC）、酸性洗滌纖維（Acid detergent fiber，ADF）和中性洗滌纖維（Neutral detergent fiber，NDF）。DM和CP含量參照AOAC（2005）的方法測(cè)定，其中DM采用烘干重量法，CP采用凱氏定氮法；WSC含量采用蒽酮—硫酸比色法（Dubois et al.，1956）測(cè)定，ADF和NDF含量采用范氏洗滌纖維法（van Soest et al.，1991）測(cè)定。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

使用Excel 2007對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理。采用SPSS v18.0進(jìn)行單因子方差分析，并用鄧肯氏法進(jìn)行組間差異顯著性分析。根據(jù)試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析結(jié)果，用模糊數(shù)學(xué)隸屬函數(shù)法對(duì)青貯60 d的感官品質(zhì)、發(fā)酵品質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)成分和微生物數(shù)量指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)（苗芳等，2017），計(jì)算公式如下：

式中，為各指標(biāo)正相關(guān)隸屬函數(shù)值，為各指標(biāo)負(fù)相關(guān)隸屬函數(shù)值，為某指標(biāo)測(cè)定值，和分別為某指標(biāo)所有測(cè)定值中的最小值和最大值。以全部指標(biāo)隸屬函數(shù)值平均值大小進(jìn)行排名。

2 結(jié)果與分析

2.1 單一和復(fù)合乳酸菌添加對(duì)高丹草青貯感官品質(zhì)的影響

由表1可知，高丹草青貯發(fā)酵后，各處理均無酸臭味，莖葉結(jié)構(gòu)保持較好，無腐敗變質(zhì)現(xiàn)象，LP06和F-1處理具有明顯芳香果味，質(zhì)地結(jié)構(gòu)柔軟松散，感官評(píng)分17分，感官品質(zhì)優(yōu)于其他處理。CK和LBR02處理葉片柔軟但稍粘手，感官評(píng)分14分，青貯品質(zhì)等級(jí)為良。

2.2 單一和復(fù)合乳酸菌添加對(duì)高丹草青貯主要微生物數(shù)量的影響

單一和復(fù)合乳酸菌添加對(duì)高丹草青貯主要微生物數(shù)量的影響效果見表2。高丹草乳酸菌初始數(shù)量較少，為3.61×10CFU/g，青貯后，全部處理附著的乳酸菌數(shù)量均顯著高于青貯前乳酸菌數(shù)量（＜0.05，下同）；7個(gè)乳酸菌添加處理的乳酸菌數(shù)量也顯著高于CK，其中LP06、F-1和F-4處理乳酸菌增殖效果最佳，數(shù)量均在7.00×10CFU/g以上，顯著高于CK、LBR02和F-3處理。青貯60 d后，各處理酵母菌數(shù)量顯著下降，其中LBR02、F-2和F-3處理未檢測(cè)到酵母菌，酵母菌生長(zhǎng)得到有效抑制。各處理霉菌數(shù)量顯著下降，LP06、LBR02、F-2和F-3處理未檢測(cè)到霉菌。綜上，F(xiàn)-2處理有效增加高丹草青貯乳酸菌數(shù)量的同時(shí)，能顯著抑制酵母菌和霉菌生長(zhǎng)繁殖，微生物菌群整體表現(xiàn)最佳。

表1 不同菌劑添加對(duì)高丹草青貯感官評(píng)分的影響Table 1 Effects of adding different bacteria agents on sensory score of S.bicolor×S.sudanense silage

表2 不同菌劑添加對(duì)高丹草青貯60 d后主要微生物數(shù)量的影響（×105CFU/g）Table 2 Effects of adding different bacteria agents on major microbial quantity of S.bicolor×S.sudanense after 60 d silage（×105CFU/g）

2.3 單一和復(fù)合乳酸菌添加對(duì)高丹草營(yíng)養(yǎng)成分的影響

由表3可知，高丹草青貯60 d后，8個(gè)處理的DM含量均有所下降，但青貯前后差異不顯著（＞0.05，下同）。各處理CP營(yíng)養(yǎng)有不同程度損失，7個(gè)乳酸菌添加處理CP含量顯著高于CK，其中F-2處理CP含量較CK高10.2%。各處理WSC含量較青貯前大幅下降，降幅為52.34%～68.54%，其中CK的WSC營(yíng)養(yǎng)損失最少，WSC含量為5.09%，顯著高于7個(gè)乳酸菌添加處理，LP06、F-1、F-2和F-4處理營(yíng)養(yǎng)損失最大，顯著低于其他處理。青貯前后，各處理ADF和NDF含量變化不顯著。

2.4 單一和復(fù)合乳酸菌添加對(duì)高丹草發(fā)酵品質(zhì)的影響

單一和復(fù)合乳酸菌添加對(duì)高丹草青貯發(fā)酵品質(zhì)的影響效果見表4。青貯60 d后，F(xiàn)-2處理pH表現(xiàn)最優(yōu)，為3.88。CK的NH-N含量顯著高于7個(gè)乳酸菌添加處理，含量最低的為F-2處理（0.086%），各乳酸菌添加處理之間NH-N含量差異不顯著。青貯發(fā)酵顯著提高高丹草乳酸含量，各乳酸菌添加處理乳酸含量顯著高于CK，其中LP06和PP02處理的乳酸含量最高，分別為4.21%和4.03%，顯著高于其他處理。全部處理乙酸含量相對(duì)發(fā)酵前顯著增加，其中LBR02、F-2、F-3和F-4處理乙酸含量顯著高于CK和其他3個(gè)同型發(fā)酵乳酸菌處理，以LBR02處理乙酸含量最高，為2.20%。高丹草青貯發(fā)酵前后均未檢測(cè)到丙酸和丁酸。從發(fā)酵品質(zhì)上看，F(xiàn)-2處理顯著降低pH和NH-N含量的同時(shí)，有效提高青貯飼料乳酸和乙酸含量，發(fā)酵品質(zhì)最佳。

2.5 單一和復(fù)合乳酸菌添加對(duì)高丹草青貯效果的綜合評(píng)價(jià)

為全面評(píng)價(jià)各菌劑添加處理對(duì)高丹草青貯感官品質(zhì)、發(fā)酵品質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)成分和微生物數(shù)量影響的綜合效果，利用隸屬函數(shù)法對(duì)8個(gè)處理進(jìn)行綜合評(píng)定，其中感官品質(zhì)、乳酸、乙酸、DM、CP、WSC含量和乳酸菌數(shù)量與發(fā)酵效果呈正相關(guān)，為正向指標(biāo)，pH、NH-N、NDF、ADF含量及酵母菌、霉菌數(shù)量與發(fā)酵效果呈負(fù)相關(guān)，為負(fù)向指標(biāo)，各處理均未檢測(cè)出丙酸和丁酸，不納入評(píng)價(jià)指標(biāo)。以7個(gè)正向指標(biāo)和6個(gè)負(fù)向指標(biāo)的隸屬函數(shù)值進(jìn)行綜合價(jià)值評(píng)定，隸屬函數(shù)平均值越高表明該處理青貯效果綜合表現(xiàn)越好，8個(gè)處理得分從高至低依次為：F-2處理（0.69）＞LP06處理（0.65）＞F-1處理（0.56）＞PP02處理（0.55）＞F-3和F-4處理（0.52）＞LBR02處理（0.51）＞CK（0.23）（表5）。

表3 不同菌劑添加對(duì)高丹草青貯60 d后營(yíng)養(yǎng)成分含量的影響（%）Table 3 Effects of adding different bacteria agents on nutritional component of S.bicolor×S.sudanense after 60 d silage（%）

表4 不同菌劑添加對(duì)高丹草青貯60 d后發(fā)酵品質(zhì)的影響Table 4 Effects of adding different bacteria agents on fermentation quality of S.bicolor×S.sudanense after 60 d silage

表5 不同菌劑添加對(duì)高丹草青貯發(fā)酵效果的綜合評(píng)價(jià)Table 5 Effects of adding different bacteria agents on comprehensive evaluation of fermentation of S.bicolor×S.sudanense silage

3 討論

3.1 不同類型乳酸菌添加對(duì)高丹草主要微生物數(shù)量和感官品質(zhì)的影響

劉晗璐（2008）研究指出，因新鮮牧草中附著大量酵母菌、霉菌等好氧微生物，乳酸菌數(shù)量一般需達(dá)5×10CFU/g以上才易保障青貯發(fā)酵質(zhì)量。本研究中高丹草初始乳酸菌數(shù)量?jī)H為3.61×10CFU/g，含量低于酵母菌和霉菌總量7.46×10CFU/g。當(dāng)牧草表面附著的乳酸菌數(shù)量過低時(shí)，可額外添加乳酸菌主導(dǎo)發(fā)酵以增加優(yōu)勢(shì)菌群，加速青貯發(fā)酵進(jìn)程，抑制有害菌繁殖，降低營(yíng)養(yǎng)損耗，從而獲得優(yōu)質(zhì)的牧草青貯（李小鈴等，2019）。本研究中，青貯60 d后的高丹草乳酸菌數(shù)量較青貯前大幅增加，以植物乳桿菌LP06單獨(dú)添加和LP06與戊糖片球菌PP02復(fù)合添加增殖效果表現(xiàn)最優(yōu)。李小鈴等（2019）在單一和復(fù)合乳酸菌添加對(duì)扁穗牛鞭草青貯品質(zhì)的影響中指出，植物乳桿菌單一添加乳酸菌增殖效果最佳，數(shù)量最多。

Filya（2003）在玉米和高粱的乳酸菌配比添加試驗(yàn)中指出，不同乳酸菌添加比例對(duì)乳酸菌的增殖速度有不同影響，一般同型發(fā)酵乳酸菌生長(zhǎng)速度快于異型發(fā)酵乳酸菌，本研究結(jié)果也進(jìn)一步證明了同型發(fā)酵乳酸菌在主導(dǎo)青貯發(fā)酵方面的優(yōu)勢(shì)。高丹草青貯60 d后，短乳桿菌單獨(dú)添加、短乳桿菌+植物乳桿菌、短乳桿菌+戊糖片球菌3個(gè)處理均未檢測(cè)出酵母菌和霉菌，對(duì)有害微生物的生長(zhǎng)抑制效果顯著。短乳桿菌LBR02是異型發(fā)酵乳酸菌，異型發(fā)酵乳酸菌在青貯過程中能產(chǎn)生大量乙酸，對(duì)提高青貯有氧穩(wěn)定性、抑制有害菌生長(zhǎng)有促進(jìn)作用（塔娜等，2017；賈婷婷等，2018）。

青貯飼料的氣味、色澤和結(jié)構(gòu)等感官品質(zhì)在一定程度上能反映青貯發(fā)酵優(yōu)劣。LP06和F-1處理感官評(píng)定最優(yōu)，與這2個(gè)處理乳酸含量和乳酸菌數(shù)量檢測(cè)結(jié)果相吻合，表明以植物乳桿菌主導(dǎo)青貯發(fā)酵，能在發(fā)酵前期快速形成優(yōu)勢(shì)菌種，從而更易保障發(fā)酵的感官品質(zhì)。短乳桿菌LBR02單一添加或與戊糖片球菌PP02以1∶1比例復(fù)合添加，在氣味評(píng)分上得分較低，可能與短乳桿菌代謝有關(guān)，其合成自身氨基酸時(shí)分解蛋白質(zhì)產(chǎn)生部分具有不良?xì)馕兜陌焙桶奉愇镔|(zhì)（Juracek et al.，2018）。

3.2 不同類型乳酸菌添加對(duì)高丹草營(yíng)養(yǎng)成分的影響

營(yíng)養(yǎng)成分是評(píng)定青貯質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)，一般認(rèn)為青貯飼料DM、WSC和CP含量與青貯質(zhì)量呈正相關(guān)，含量越高，青貯質(zhì)量越好。李小鈴等（2019）研究表明，異型發(fā)酵乳酸菌食竇魏斯氏菌添加組青貯發(fā)酵的DM含量最高。張凡凡等（2021）利用纖維素分解菌與布氏乳桿菌聯(lián)合接種，發(fā)現(xiàn)布氏乳桿菌可顯著提高青貯玉米DM含量。本研究各處理間DM含量差異不顯著，4個(gè)異型發(fā)酵短乳桿菌添加處理均未在DM含量上表現(xiàn)出明顯優(yōu)勢(shì)，與李小鈴等（2019）、張凡凡等（2021）的研究結(jié)果不一致，可能是因?yàn)椴煌l(fā)酵類型乳酸菌的不同比例、種類組合或受發(fā)酵底物影響，均會(huì)表現(xiàn)出不同的協(xié)同作用所致，但菌株之間、菌株與底物代謝間如何協(xié)同作用還需深入研究。

高丹草發(fā)酵60 d后，8個(gè)處理的CP含量同青貯前相比均出現(xiàn)不同程度降低，推測(cè)可能是發(fā)酵初期，體系內(nèi)酸性環(huán)境尚未形成，蛋白質(zhì)分解酶和部分微生物代謝活躍導(dǎo)致蛋白質(zhì)快速分解所致（韓立英等，2013）。高丹草青貯60 d后，各處理CP含量較青貯前顯著下降，可能與高丹草青貯后的呼吸作用、蛋白質(zhì)分解酶和相關(guān)微生物代謝活動(dòng)有關(guān)（韓立英等，2013），7個(gè)乳酸菌添加處理的CP含量均顯著高于CK，也進(jìn)一步證實(shí)了添加乳酸菌在抑制高丹草蛋白質(zhì)降解方面的優(yōu)勢(shì)。青貯發(fā)酵時(shí)微生物需要能量來源以保證自身生長(zhǎng)，WSC作為乳酸菌生長(zhǎng)碳源攝取的主要底物，在青貯過程中被乳酸菌代謝消化，其含量可間接反映乳酸菌生長(zhǎng)情況。本研究中，高丹草青貯60 d后，CK、戊糖片球菌和短乳桿菌單獨(dú)添加或這2種菌復(fù)合添加的WSC含量顯著高于其他處理，可能與這4個(gè)處理乳酸菌代謝活動(dòng)相對(duì)較弱、WSC分解消耗較慢有關(guān)。NDF作為飼料纖維質(zhì)量判定的有效標(biāo)準(zhǔn)，其含量高低可初步估測(cè)日糧精粗比例是否合理；ADF是飼料能值的重要評(píng)判指標(biāo)，其含量與青貯飼料的飼用價(jià)值成反比。尤思涵等（2021）在高丹草與黑麥草混貯研究中指出，不同混貯比例的NDF和ADF含量存在明顯差異，本研究中8個(gè)處理的ADF和NDF含量變化不顯著，與尤思涵等（2021）的研究結(jié)果不一致，推測(cè)原因可能與發(fā)酵底物有關(guān)，本研究發(fā)酵底物為高丹草單貯，尤思涵等（2021）報(bào)道為高丹草與黑麥草混合青貯，混合青貯在一定程度上改變了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的比例。

3.3 不同類型乳酸菌添加對(duì)高丹草發(fā)酵品質(zhì)的影響

pH、NH-N、乳酸和乙酸含量是評(píng)判青貯發(fā)酵效果的關(guān)鍵指標(biāo)。pH大小直接反映青貯飼料是否處于良好的酸性環(huán)境，對(duì)底物發(fā)酵至關(guān)重要，一般認(rèn)為優(yōu)良的青貯飼料pH為3.8～4.2。本研究中，全部同型發(fā)酵乳酸菌添加處理的pH均低于短乳桿菌LBR02單獨(dú)添加處理，進(jìn)一步體現(xiàn)了同型發(fā)酵乳酸菌在提升發(fā)酵進(jìn)程方面的優(yōu)勢(shì)作用。研究表明，隨著發(fā)酵進(jìn)行，蛋白質(zhì)被多種好氧微生物代謝繁殖所消耗，亦或通過不同途徑被分解轉(zhuǎn)化成NH-N和胺類物質(zhì)，NH-N含量越高，間接反映底物蛋白質(zhì)消耗越多（蔣蘇蘇等，2017）。一般認(rèn)為NH-N含量≤5%，青貯發(fā)酵品質(zhì)優(yōu)良。本研究中，所有處理的NH-N含量極低，推測(cè)原因，一方面蜀草1號(hào)高丹草屬高光效C4植物，WSC含量較高，豐富的WSC含量為青貯發(fā)酵提供了充足的碳源，各處理體系內(nèi)乳酸菌群快速增殖形成酸性環(huán)境，pH均≤4.10，達(dá)優(yōu)良飼草發(fā)酵pH，良好的酸性環(huán)境有效抑制了有害微生物對(duì)蛋白質(zhì)的分解消耗；另一方面，可能與蛋白分解酶活性有關(guān)，隨著pH降低，蛋白酶活性極大降低，很大程度上減少NH-N含量。

前人研究結(jié)果（王旭哲等，2018；徐生陽等，2019）表明，同型、異型乳酸菌單獨(dú)添加或復(fù)合添加，均可獲得較高的乳酸含量，且顯著高于CK。同型、異型發(fā)酵乳酸菌生長(zhǎng)代謝均可產(chǎn)生大量乳酸。本研究所用發(fā)酵底物高丹草的乳酸菌初始數(shù)量較低，自然發(fā)酵乳酸濃度增加較慢，乳酸菌添加后快速生長(zhǎng)代謝，進(jìn)而顯著提高乳酸含量，與pH試驗(yàn)結(jié)果相吻合。除F-4處理外，其余3個(gè)異型發(fā)酵乳酸菌添加處理乙酸含量顯著高于其他處理，其中短乳桿菌單獨(dú)添加含量最高。黃峰等（2019）、李菲菲等（2019）研究指出，短乳桿菌、布氏乳桿菌和希氏乳桿菌等眾多異型發(fā)酵乳酸菌不僅能產(chǎn)生乳酸，還會(huì)產(chǎn)生乙酸等抑制有害微生物生長(zhǎng)的有機(jī)酸，LBR02、F-2和F-3 3個(gè)短乳桿菌添加處理的乙酸測(cè)定結(jié)果與酵母菌、霉菌抑制效果相一致，而F-4乙酸含量顯著低于這3個(gè)處理，可能與短乳桿菌添加比例較低，生長(zhǎng)代謝受影響有關(guān)。

4 結(jié)論

青貯60 d時(shí)，同型發(fā)酵乳酸菌LP06添加在提高高丹草青貯感官品質(zhì)、降低NH-N含量、減少CP損失、增加乳酸含量和乳酸菌數(shù)量上表現(xiàn)更具優(yōu)勢(shì)，異型發(fā)酵乳酸菌LBR02在抑制有害微生物生長(zhǎng)方面作用更顯著。綜上分析，植物乳桿菌LP06與短乳桿菌LBR02按1∶1比例復(fù)合添加，高丹草青貯效果綜合表現(xiàn)最優(yōu)。