含有席夫堿配體的釕配合物的合成、表征及抗腫瘤活性

賈士芳 郝秀麗 溫艷珍 張 燕

(太原科技大學(xué)化學(xué)與生物工程學(xué)院，太原030021)

隨著順鉑類配合物作為抗腫瘤藥物的發(fā)現(xiàn)及臨床應(yīng)用[1]，金屬配合物作為抗腫瘤藥物的研究成為了一個(gè)熱門課題。金屬釕配合物是繼鉑類配合物后被認(rèn)為最具有潛力的低毒高效的抗腫瘤藥物[2-7]。目前部分金屬釕配合物已被證實(shí)對(duì)某一種腫瘤細(xì)胞有效甚至進(jìn)入臨床研究階段。1987年，Keppler等合成了對(duì)結(jié)腸癌有明顯效果的[HL][trans-RuバL2Cl4](其中L為含氮雜環(huán)配體)配合物[8]。1998年，第一個(gè)進(jìn)入臨床研究的對(duì)轉(zhuǎn)移瘤有明顯抑制作用的NAMI型釕配合物由Alessio[9]合成并已進(jìn)入臨床二期研究。2008年，德國(guó)的Schatzschneider[10]報(bào)道合成的金屬釕配合物[Ru(bpy)2(dppn)]2+通過(guò)插入模式與DNA結(jié)合后，具有與傳統(tǒng)順鉑類藥物對(duì)人乳腺癌及結(jié)腸癌細(xì)胞相近的半抑制率。2009年，Keppler等發(fā)現(xiàn)已經(jīng)進(jìn)入臨床一期的釕配合物KP1019[11]對(duì)Lewis肺癌和原發(fā)性直腸癌有明顯作用。

隨著合成技術(shù)的發(fā)展，不斷涌現(xiàn)出各種新型席夫堿類化合物。席夫堿類化合物可以應(yīng)用到生物分析技術(shù)、金屬有機(jī)配體、熒光探針[12-13]、抗腫瘤[14-19]等方面。我們以4，4′-二(4-氨基苯氧基)聯(lián)苯、2，2′-二(4-氨基苯氧基)苯基丙烷、4，4′-二(4-氨基苯氧基)二苯砜為原料，分別與2-吡啶甲醛反應(yīng)生成對(duì)應(yīng)的席夫堿配體。原料都具有對(duì)稱結(jié)構(gòu)，生成的配體都是對(duì)稱的雙齒配體，配體與二氯二聯(lián)吡啶釕以1∶2反應(yīng)，生成了對(duì)應(yīng)的雙核金屬釕配合物。

圖1 含有不同橋基團(tuán)的席夫堿的三種雙核金屬釕配合物結(jié)構(gòu)圖Fig.1 Structure of three dinuclear metal ruthenium complexes of Schiff bases with different bridging groups

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

三水合三氯化釕、2，2′-聯(lián)吡啶(bpy)、4，4′-二(4-氨基苯氧基)聯(lián)苯、2，2′-二(4-氨基苯氧基)苯基丙烷、4，4′-二(4-氨基苯氧基)二苯砜、2-吡啶甲醛、氘代三氯甲烷、氘代二甲基亞砜等均為市售分析純?cè)噭?gòu)于武漢申試化工有限公司。所有試劑都未經(jīng)純化直接使用，使用的水為蒸餾水。胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Gibco公司。

主要儀器有AL204分析天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)、DF-101B恒溫磁力攪拌器(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)、SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)、PE20005型元素分析譜儀(美國(guó)PE公司)、Varian Mercury VX-300型核磁 共振儀(瑞士Bruker公司)、Nicolet38型傅里葉紅外光譜儀(Thermo Electron Corporation)、TU-1901型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)、Trace MS 2000GC/MS ESI質(zhì)譜儀(德國(guó)NETZSCH公司)、Shimadzu RF-5301 PC熒光分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)、CHI630E電化學(xué)工作站(上海辰華儀器有限公司)、EPICS XL-MCL型酶標(biāo)儀(美國(guó)Beckman Coulter公司)、Varioskan Flash型多功能酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo Scientific公司)。

1.2 目標(biāo)配合物的合成

1.2.1 合成路線圖

配體及對(duì)應(yīng)配合物的具體合成路線如圖2所示。

圖2 席夫堿配體BL1～BL3及對(duì)應(yīng)的配合物Ru1～Ru3的合成路線Fig.2 Synthesis of Schiff base ligands BL1-BL3 and complexes Ru1-Ru3

1.2.2 配體及配合物的合成

配體BL1的合成：稱取0.37 g(1 mmol)4，4′-二(4-氨基苯氧基)聯(lián)苯和0.54 g(5 mmol)2-吡啶甲醛放入100 mL的圓底燒瓶中，加入35 mL甲醇，加熱攪拌回流8 h，有黃色固體產(chǎn)生，過(guò)濾得到黃色固體，用甲醇和蒸餾水各洗3次，真空干燥，得到0.48 g配體BL1，產(chǎn)率為88%。元素分析(C36H26N4O2)計(jì)算值(%)：C，79.1；H，4.8；N，10.3。實(shí)驗(yàn)值(%)：C，79.2；H，4.8；N，10.4。1H NMR(CDCl3)：δ8.80(2H，d，J=3.0 Hz，Py)，8.64(2H，s，CH)，8.19(2H，d，J=6.0 Hz，Py)，7.81(2H，t，J=9.0 Hz，Py)，7.54(4H，d，J=6.0 Hz，Ph)，7.37(2H，t，J=3.0 Hz，Py)，7.36(4H，d，J=6.0 Hz，Ph)，7.12(8H，d，J=3.0 Hz,Ph)。IR(cm-1)：3 060(νC—H),1 625,1 578，1 476，1 463，1 279(νC=C，νC=N，νC—N)，1 243，1 279(νPh—O)，833，777，739(δC—H)。

配體BL2的合成：稱取0.41 g(1 mmol)2，2′-二(4-氨基苯氧基)苯基丙烷和0.54 g(5 mmol)2-吡啶甲醛，加入35 mL甲醇，加熱回流4.5 h。反應(yīng)結(jié)束后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶液蒸至5 mL，然后加入15 mL石油醚，待溫度冷卻到0℃，有黃色固體析出。過(guò)濾，真空干燥得到BL2固體0.42 g，產(chǎn)率為72%。元素分析(C39H32N4O2)計(jì)算值(%)：C，79.6；H，5.5；N，9.5。實(shí)驗(yàn)值：C，79.6；H，5.4；N，9.6。1H NMR(CDCl3)：δ8.80(2H，s，Py)，8.64(2H，s，CH)，8.19(2H，d，J=6.0 Hz，Py)，7.81(2H，t，J=9.0 Hz，Py)，7.54(4H，d，J=6.0 Hz，Ph)，7.37(2H，t，J=3.0 Hz，Py)，7.36(4H，d，J=6.0 Hz，Ph)，7.12(8H，d，J=3.0 Hz，Ph)，1.70(6H，s，CH3)。IR(cm-1)：3 060(νC—H)，1 625，1 578，1 476，1 463，1 279(νC=C，νC=N，νC—N)，1 243，1 279(νPh—O)，833，777，739(δC—H)。

配體BL3的合成：稱取0.44 g(1 mmol)4，4′-二(4-氨基苯氧基)二苯砜和0.54 g(5 mmol)2-吡啶甲醛，加入35 mL甲醇，加熱回流4.5 h，反應(yīng)結(jié)束后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶液蒸至5 mL，有黃色固體析出。過(guò)濾，真空干燥得到0.51 g固體BL3，產(chǎn)率為83%。元素分析(C36H26N4O4S)計(jì)算值(%)：C，70.8；H，4.3；N，9.2。實(shí)驗(yàn)值(%)：C，70.7；H，4.3；N，9.3。1H NMR(CDCl3)：

δ8.64(2H，d，J=3.0 Hz，Py)，8.23(2H，s，CH)，7.98(2H，d，J=6.0 Hz，Py)，7.86(4H，d，J=6.0 Hz，Ph)，7.83(2H，t，J=9.0 Hz，Py)，7.41(4H，d，J=6.0 Hz，Ph)，7.36(8H，d，J=3.0 Hz，Ph)。IR(cm-1)：1 629，1 585，1 488，1 296(νC=C，νC=N，νC—N)，1 243(νPh—O)，833，777，742(δC—H)。

配合物Ru1的合成：稱取0.52 g(1 mmol)Ru(bpy)2Cl2·2H2O和0.34 g(2 mmol)AgNO3，放入250 mL圓底燒瓶中，加入100 mL乙醇，磁力攪拌加熱回流2 h，趁熱過(guò)濾，除去AgCl沉淀，得到棕紅色濾液A。稱取0.27 g(0.5 mmol)配體BL1于250 mL三頸燒瓶中，將濾液A加入燒瓶中，反應(yīng)液在N2保護(hù)下回流攪拌12h。停止反應(yīng)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至有固體出現(xiàn)，以CH3CN/飽和KNO3水溶液(1∶1，V/V)的混合溶劑作為洗脫劑，在硅膠柱上分離，得到的黃色溶液通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去大部分溶劑，然后加入過(guò)量的NaClO4的飽和乙醇溶液，沉淀出黃色固體，過(guò)濾，用熱的甲醇和水(10 mL)各洗3次，真空干燥，得到黃色固體0.63 g，產(chǎn)率72%。，元素分析(C76H58N12O18Cl4)計(jì)算值(%)：C，51.5；H，3.3；N，9.5。實(shí)驗(yàn)值(%)：C，51.6；H，3.4；N，9.7。1H NMR(DMSO-d6)：δ8.89(2H，t，J=3.0 Hz，Py)，8.69(2H，d，J=6.0 Hz，Py)，8.64～8.67(2H，m，Py)，8.51(2H，t，J=6.0 Hz，bipy)，8.21～8.24(6H，m，bipy)，8.01(4H，t，J=9.0 Hz，Py)，7.86(2H，d，J=3.0 Hz，Py)，7.79(2H，s，CH)，7.72(12H，m，bipy)，7.50(4H，d，J=6.0 Hz，Ph)，7.38(4H，d，J=9.0 Hz，Ph)，6.80～7.00(4H，m，bipy)，6.69(4H，d，J=3.0 Hz，bipy)，6.64(4H，d，J=3.0 Hz，bipy)。IR(cm-1)：1 603，1 489(νC=C，νC=N)，1 240(νPh—O，νC—N)，768，625(δC—H)，1 106(νCl—O)。

配 合 物Ru2的 合 成：0.29 g(0.5 mmol)BL2和0.52 g(1 mmol)Ru(bpy)2Cl2·2H2O在乙醇溶液里回流12 h，硅膠柱分離，以乙腈/硝酸鉀的飽和溶液(1∶1，V/V)為洗脫劑，得到黃色產(chǎn)品0.65g，產(chǎn)率74%。元素分析(C79H64N12O18Cl4)計(jì)算值：C，52.3；H，3.5；N，9.3。實(shí)驗(yàn)值(%)：C，52.4；H，3.9；N，9.1。1H NMR(DMSOd6)：δ8.89(2H，t，J=3.0 Hz，Py)，8.66(2H，d，J=6.0 Hz，Py)，8.62(2H，d，J=6.0 Hz，Py)，8.49(2H，d，J=6.0 Hz，bipy)，8.24～8.28(8H，m，bipy)，7.96～8.00(4H，m，Ph)，7.86(2H，s，CH)，7.79(2H，d，J=9.0 Hz，Py)，7.69(6H，m，bipy)，7.64(4H，m，bipy)，7.54(4H，d，J=6.0 Hz，Ph)，7.35(4H，d，J=3.0 Hz，Ph)，7.27(4H，d，J=9.0 Hz，Ph)，6.76(6H，d，J=3.0 Hz，bipy)，6.67～6.70(6H，m，bipy)，1.65(6H，s，CH3)。IR(cm-1)：1 625,1 578,1 476，1 463，1 279(νC=C，νC=N，νC—N)，1 243，1 279(νPh—O)，833，777，739(δC—H)，1 118(νCl—O)。

配 合 物Ru3的 合 成：0.30 g(0.5 mmol)BL3和0.52 g(1 mmol)Ru(bpy)2Cl2·2H2O在乙醇溶液里回流12 h，硅膠柱分離，以乙腈/硝酸鉀的飽和溶液(1∶1，V/V)為洗脫劑，用NaClO4的飽和乙醇溶液沉降，得到黃 色 產(chǎn) 品0.75 g，產(chǎn) 率82%。元 素 分 析(C76H58N12SO20Cl4)計(jì)算值(%)：C，49.7；H，3.2；N，9.2。實(shí)驗(yàn)值(%)：C，49.7；H，3.2；N，9.2。1H NMR(DMSOd6)：δ8.87(2H，t，J=3.0 Hz，Py)，8.67(2H，d，J=6.0 Hz，Py)，8.62(2H，d，J=6.0 Hz，Py)，8.50(4H，t，J=9.0 Hz，bipy)，8.22～8.29(8H，m，bipy)，8.01(4H，d，J=6.0 Hz，Ph)，7.96～7.99(4H，m，bipy)，7.86(2H，d，J=9.0 Hz，Py)，7.79(2H，d，J=3.0 Hz，CH)，7.72(4H，d，J=9.0 Hz，bipy)，7.68(4H，d，J=6.0 Hz，Ph),7.64(4H，d，J=6.0 Hz，Ph)，7.53(4H，d，J=3.0 Hz，Ph)，7.35(2H，t，J=9.0 Hz，bipy)，6.90(2H,d，J=6.0 Hz,bipy),6.84(4H,d，J=9.0 Hz，bipy)，6.69(4H，d，J=3.0 Hz，bipy)。IR(cm-1)：1 603，1 583，1 487，1 465，1 294(νC=C，νC=N，νC—N)，1 244(νPh—O)，1 108(νCl—O)，768，626，558(δC—H)。

1.3 生物活性檢測(cè)

按照標(biāo)準(zhǔn)的MTT測(cè)試方法進(jìn)行活性檢測(cè)[20-21]，分為4步：(1)種入細(xì)胞。在96孔板的第3～11列用排槍分別加入懸有細(xì)胞的200 μL培養(yǎng)基，第2列作為溶劑空白，96孔板周圍加培養(yǎng)基防止揮發(fā)，使每孔細(xì)胞數(shù)大約為1×104個(gè)，將96孔板放入37℃、CO2體積分?jǐn)?shù)5%的培養(yǎng)箱中過(guò)夜，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，待80%細(xì)胞貼壁后，進(jìn)行下一步。(2)加藥。在24孔板的10個(gè)孔中各加入3 mL培養(yǎng)基，將所加藥物稀釋到不同濃度梯度，用排槍將孔中原有的培養(yǎng)液吸掉，每一列加入相同濃度的藥物，加完后，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h。(3)加MTT。在藥物與細(xì)胞相互作用結(jié)束前4 h，吸去培養(yǎng)液，用磷酸緩沖鹽溶液(PBS)洗滌2次，然后每孔加入180 μL PBS，再加入20 μL 5 mg·mL-1的MTT，放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)4 h。(4)加DMSO。4 h后拿出96孔板，吸掉上清液，每孔加入150 μL DMSO，放入搖床內(nèi)搖10 min，將紫色結(jié)晶物充分溶解，放入酶標(biāo)儀卡槽內(nèi)，在490 nm波長(zhǎng)處掃描，得到光密度(OD)，OD可以間接地反映活細(xì)胞的數(shù)量(式1)，以此來(lái)求出半數(shù)抑制濃度IC50。

R=ODexp/ODcontrol×100% (1)

其中，R表示細(xì)胞存活率(即細(xì)胞活力)，ODexp表示實(shí)驗(yàn)組OD，ODcontrol表示對(duì)照組OD。

2 結(jié)果與討論

2.1 配體的合成

通過(guò)2-吡啶甲醛和對(duì)應(yīng)的二元胺以2∶1的物質(zhì)的量之比在甲醇中加熱回流，可以得到黃色固體，用熱的甲醇洗滌3次，得到黃色產(chǎn)品。元素分析得到的測(cè)試值與計(jì)算值基本符合，3個(gè)配體的紅外光譜圖中在1 625 cm-1處均有吸收帶，說(shuō)明配體中有C=N鍵 存 在，以CDCl3為 溶 劑，對(duì)BL1～BL3進(jìn) 行了1H NMR表征。BL1的1H NMR譜圖中有8組峰(圖S1，Supporting information)，苯 環(huán) 上Ha和Hb的δ=7.12，是雙重峰；另一個(gè)苯環(huán)上Hc和Hd的δ為7.36和7.54，是2組雙重峰；—CH=N氫的δ=8.64，是一個(gè)單峰；吡啶 環(huán) 上氫的δ分別為7.37、7.81、8.19和8.80，Hg和Hh是三重峰，Hf和Hi是雙重峰。由于py-CH=N是一個(gè)吸電子基團(tuán)，Hc和Hd離py-CH=N近，所以Hc和Hd的化學(xué)位移與Ha和Hb相比向低場(chǎng)移動(dòng)。BL2和BL3的1H NMR譜圖與BL1相似。

2.2 配合物的合成

配合物Ru1～Ru3分別通過(guò)Ru(bpy)2Cl2·2H2O和相應(yīng)的配體BL1、BL2和BL3以2∶1的物質(zhì)的量之比反應(yīng)，用NaClO4飽和溶液沉降出產(chǎn)物，元素分析結(jié)果表明，所生成的配合物是雙核配合物。配合物Ru1～Ru3的1H NMR在DMSO-d6中測(cè) 定，配 合 物Ru3的1H NMR譜圖如圖3所示。金屬配合物的圖譜相比配體較復(fù)雜，一是因?yàn)榉枷悱h(huán)上氫的電子云密度相近，以至于它們的化學(xué)位移接近，芳香環(huán)區(qū)域光譜比較復(fù)雜，很難指認(rèn)是哪個(gè)氫的化學(xué)位移；另一方面，因?yàn)榻饘匐x子與配體反應(yīng)時(shí)生成一對(duì)對(duì)映體，所以配合物的核磁圖譜比較復(fù)雜。但是，3個(gè)配合物在δ=9.0處都有一個(gè)明顯的單峰，這個(gè)峰對(duì)應(yīng)CH=N上氫的化學(xué)位移。

圖3 配合物Ru3在DMSO-d6中的1H NMR譜圖Fig.3 1H NMR spectrum of complex Ru3 in DMSO-d6

為了進(jìn)一步確認(rèn)配合物的結(jié)構(gòu)，以CH3CNCH3OH為溶劑，測(cè)定了配合物的電噴霧質(zhì)譜。電噴霧質(zhì)譜對(duì)于證明分子量比較大的過(guò)渡金屬配合物的分子量是非?？煽康?。3個(gè)配合物的MS譜圖中都只有一個(gè)強(qiáng)的離子峰，它們的m/z值分別為343.6([Ru(BL2)(bpy)2]24+)、354.2([Ru(BL1)(bpy)2]24+)和359.3([Ru(BL3)(bpy)2]24+),與計(jì)算值相符(圖S2)。這一結(jié)果表明雙核釕配合物在溶液中是穩(wěn)定的。

2.3 配合物的電化學(xué)性質(zhì)

采用微分脈沖伏安法(differential pulse voltammetry，DPV)來(lái)測(cè)定配合物的氧化還原電位，將配合物溶解在乙腈里，進(jìn)行DPV測(cè)試，數(shù)據(jù)列于表1中。3個(gè)配合物在0～1.5 V范圍內(nèi)均有2個(gè)氧化還原峰，而在外界條件相同的情況下測(cè)定配體的氧化還原電位，發(fā)現(xiàn)配體在0～1.5 V內(nèi)沒(méi)有明顯的峰，所以這些峰為金屬中心的氧化-還原峰。從圖4可以看出，Ru3的2個(gè)氧化還原峰分別在0.90和1.28 V，分別對(duì)應(yīng)于[Ru(BL3)(bpy)2]25+/[Ru(BL3)(bpy)2]24+和[Ru(BL3)(bpy)2]26+/[Ru(BL3)(bpy)2]25+電對(duì)，2個(gè)半波電位的差值為380 mV。

表1 Ru1～Ru3的光譜學(xué)、電化學(xué)數(shù)據(jù)及脂水分配系數(shù)(lg P)Table 1 Spectroscopic,electrochemistry data and fat-water partition coefficient(lg P)of Ru1-Ru3

圖4 配合物Ru3在CH3CN中的DPV圖Fig.4 DPV diagram of complex Ru3 in CH3CN

2.4 配合物的光譜性質(zhì)

將3個(gè)配合物分別配制成10 μmol·L-1的乙腈溶液，測(cè)定其UV-Vis光譜，所得譜圖如圖5a所示。表1列出了3個(gè)配合物Ru1、Ru2和Ru3的最大吸收波長(zhǎng)。3個(gè)配合物的UV-Vis光譜相似，均有3個(gè)吸收峰，各個(gè)配合物對(duì)應(yīng)的最大吸收峰波長(zhǎng)值非常接近，分別在290、360和490 nm附近。每個(gè)吸收峰都可以找到相應(yīng)歸屬：290 nm對(duì)應(yīng)為一個(gè)又窄又強(qiáng)的吸收帶，歸屬為未帶任何取代基的聯(lián)吡啶的π-π*電子躍遷產(chǎn)生的吸收；360 nm對(duì)應(yīng)于電子從金屬躍遷到配體的單重態(tài)吸收，即為1MLCT吸收；490 nm對(duì)應(yīng)的較寬譜帶歸屬為電子從金屬躍遷到配體的三重態(tài)吸收，即為3MLCT吸收。

圖5 配合物Ru1～Ru3在CH3CN中的(a)UV-Vis和(b)熒光光譜圖Fig.5(a)UV-Vis and(b)fluorescence spectra of complexes Ru1-Ru3 in CH3CN

將配合物溶解在乙腈中，配成濃度為10 μmol·L-1的溶液，對(duì)配合物進(jìn)行熒光光譜測(cè)試，以450 nm作為激發(fā)波長(zhǎng)，掃描發(fā)射光譜，結(jié)果如圖5b所示。3個(gè)配合物的發(fā)射波長(zhǎng)均在600 nm左右，配體沒(méi)有熒光，說(shuō)明該系列配合物的熒光是金屬釕發(fā)射出來(lái)的。

2.5 生物活性檢測(cè)

以人宮頸癌細(xì)胞Hela、胃癌細(xì)胞BGC823、胃癌細(xì)胞SGC-7901和人正常胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5為對(duì)象，通過(guò)MTT法檢測(cè)了3個(gè)配合物對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性。配合物對(duì)各細(xì)胞作用48 h后能夠看到較明顯的腫瘤細(xì)胞死亡變化。圖6顯示了配合物Ru1～Ru3對(duì)Hela、BGC823、SGC-7901和MRC-5的細(xì)胞毒性結(jié)果。

圖6 配合物Ru1～Ru3對(duì)Hela、BGC823、SGC-7901和MRC-5的細(xì)胞毒性Fig.6 Cytotoxicity of complexes Ru1-Ru3 on Hela,BGC823,SGC-7901,and MRC-5

從表2可以看出，3個(gè)配合物對(duì)3種腫瘤細(xì)胞的毒性大小排序均為Ru3＞Ru1＞Ru2，可能的原因是配合物Ru3含有亞砜結(jié)構(gòu)，配合物疏水性強(qiáng)，親脂性大，溶解度低，使得配合物容易累積到線粒體內(nèi)[22]。還可以看到，該系列配合物對(duì)BGC823的毒性均為最強(qiáng)。而3個(gè)配合物對(duì)MRC-5的IC50都大于100 μmol·L-1，說(shuō)明 配合 物對(duì) 正常 細(xì)胞 沒(méi)有 細(xì)胞毒性。

2.6 配合物的脂水分配系數(shù)

抗癌藥物的活性通常與它們的親脂性有關(guān)，由此產(chǎn)生的疏水性可能有助于增加細(xì)胞對(duì)藥物的攝取，從而增強(qiáng)其抗癌活性[23-27]。我們測(cè)試了Ru1～Ru3的標(biāo)準(zhǔn)辛醇-水分配系數(shù)(lgP)，結(jié)果見(jiàn)表2。lgP的大小順序與上面得到的配合物的細(xì)胞毒性強(qiáng)弱呈一致關(guān)系，也間接地證明了我們的推測(cè)有一定的道理。這一結(jié)果初步表明釕配合物的抗癌活性與lgP有直接關(guān)系，其抗癌活性隨配合物親脂性的增加而增強(qiáng)。

2.7 活性氧檢測(cè)

通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)得出的結(jié)論是配合物對(duì)腫瘤細(xì)胞有毒性而對(duì)正常細(xì)胞沒(méi)有毒性，為了證實(shí)這一點(diǎn)我們做了活性氧(ROS)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。ROS是生物體代謝過(guò)程中產(chǎn)生的含氧自由基或者容易形成自由基的過(guò)氧化物的總稱。腫瘤細(xì)胞內(nèi)ROS水平要高于正常細(xì)胞，這使得抗氧化酶對(duì)ROS的耐受性達(dá)到了極限，如果ROS再升高則會(huì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的凋亡[28]，即使ROS水平下降也對(duì)腫瘤細(xì)胞的增值造成負(fù)面影響。

將 配 合 物Ru1～Ru3分 別 作 用 于BGC823和MRC-5，每個(gè)配合物設(shè)置2個(gè)濃度(6.25和12.5 μmol·L-1)。培養(yǎng)24 h后用DCFH-DA作為熒光探針檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS的變化(圖7)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)配合物Ru1～Ru3能增加腫瘤細(xì)胞內(nèi)ROS的水平，并且配合物濃度越高，增強(qiáng)作用越明顯。配合物的作用強(qiáng)度為Ru3＞Ru1＞Ru2，與MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。但是，配合物Ru1～Ru3對(duì)正常細(xì)胞內(nèi)ROS的水平并沒(méi)有明顯的影響。

圖7 配合物Ru1～Ru3對(duì)BGC823(a)和MRC-5(b)內(nèi)ROS水平的影響Fig.7 Effect of complexes Ru1-Ru3 on ROS level in(a)BGC823 and(b)MRC-5

3 結(jié)論

以4，4′-二(4-氨基苯氧基)聯(lián)苯、2，2′-二(4-氨基苯氧基)苯基丙烷、4，4′-二(4-氨基苯氧基)二苯砜和2-吡啶甲醛為原料，合成了3個(gè)雙齒配體，并在此基礎(chǔ)上合成了3個(gè)雙核釕配合物Ru1～Ru3。通過(guò)元素分析、核磁共振氫譜、紅外光譜、電噴霧質(zhì)譜對(duì)配體及配合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征，證實(shí)了配合物結(jié)構(gòu)的正確性。此外，通過(guò)MTT法測(cè)試了Ru1～Ru3對(duì)Hela、BGC823、SGC-7901和MRC-5四種細(xì)胞的毒性，結(jié)果顯示Ru3的抗腫瘤活性強(qiáng)于Ru1和Ru2，而在所測(cè)的3種腫瘤細(xì)胞中，Ru1～Ru3均表現(xiàn)出對(duì)BGC823有很好的選擇性(Ru3毒性最強(qiáng))，說(shuō)明Ru3可能成為治療癌癥的潛在藥物。

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