米槁根際細菌對果實藥用活性成分的影響及其PICRUST功能預測分析

田 秀，童炳麗，謝元貴，3，*，廖小鋒，吳婷婷，劉濟明

(1.貴州大學 林學院，貴州，貴陽 550025； 2.貴州師范大學 生命科學學院，貴州 貴陽550025； 3.貴州科學院，貴州 貴陽 550001； 4.貴州省山地資源研究所，貴州 貴陽550001)

米槁(H.W.Li)為樟科常綠喬木，主要分布在南北盤江與紅水河谷區(qū)域，貴州、廣西、云南等省交界處，是我國西南地區(qū)的特有種，其成熟干燥的果實常用作民族藥材、香料和調味品。作為藥用植物，米槁果實提取的化合物在抗炎、抗心律失常、抗腫瘤等方面有重要作用，以米槁果實提取化合物為主要成分的心腦寧膠囊、心胃止痛膠囊等在治療腸胃和腦血管疾病中具有良好的效果。米槁藥用市場大，但常處于野生狀態(tài)，加上民間的日益采伐，其野外儲藏量急劇減少；加上其天然分布區(qū)狹窄，結果有大小年之分、種子發(fā)芽率低等問題，米槁已被列入近危植物名單中。

微生物是土壤生態(tài)系統(tǒng)中的重要組成部分，以植物根系分泌物為能量來源，能感知根系分泌的信號并釋放，提高植物耐受性、抗逆性，促進植物的生長發(fā)育。細菌占土壤微生物中的絕大部分，參與植物的生長、繁殖和代謝，有益的細菌群落有利于植物增產。由于技術手段的局限，以往對土壤根際細菌的研究主要集中于結構、多樣性等方面，而對功能方面的研究少有報道?；诟咄繙y序的PICRUST功能預測分析具有高效率、成本低、結果可靠等特點，能實現(xiàn)對細菌生態(tài)功能的預測，有利于進一步揭示細菌在土壤生態(tài)系統(tǒng)中的作用，已應用于多個領域。1，8-桉葉素、香檜烯、α-香油醇、檸檬烯是米槁果實中主要的藥用活性成分，研究米槁根際細菌群落組成、功能及其與活性成分間的潛在關聯(lián)性，有利于闡明米槁生長發(fā)育的內在機制，提高米槁藥用成分產量。本研究通過采集黔、滇、桂3省交界處的米槁根際土壤與果實，分析不同采樣點米槁根際細菌群落組成與功能、土壤理化特性與果實藥用活性成分的含量變化，闡明米槁根際土壤-細菌-果實藥用活性成分間的影響與相互作用，為提高米槁果實活性成分產量提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 米槁根際土壤與果實采集

選取貴州羅甸(LD)、望謨(WM)、冊亨(CH)、貞豐(ZF)、荔波(LB)，廣西天峨(TE)、樂業(yè)(LY)，以及云南富寧(FN)、那坡(NP)共9個采樣點。于2018年10月，在各采樣點隨機選擇5棵長勢相同(胸徑為32～38 cm)的健康野生米槁，利用抖落法在米槁四周根際采集土壤樣品。土壤樣品采集時，先去除土壤表層腐殖質后，挖取距根系2 mm內的土壤為根際土壤。將5棵樹采集的土壤等量混合后裝入滅菌袋，保存于冰盒迅速帶回實驗室。將樣品分為2份，一份自然晾干過篩用于土壤理化性質測定，一份提取土壤細菌基因組DNA后用于高通量測序。果實與土樣采集同時進行、保持一致，用于測定其中的藥用活性成分含量。在果實選取上，選擇顏色為黑綠色或棕黑色的成熟果實作為樣品。

1.2 根際土壤理化性質測定

測定自然風干過篩后的土壤pH值和有機質、全氮、堿解氮、全磷、速效磷、全鉀、速效鉀含量。其中，采用點位法測定pH值，采用重鉻酸鉀容量法測定有機質含量，采用堿解擴散法測定全氮、堿解氮含量，采用鉬銻抗比色法測定全磷、速效磷含量，采用火焰光度法測定全鉀、速效鉀含量，具體測定方法參照《土壤農化分析》。

1.3 果實藥用活性成分含量測定

利用氣相色譜(GC)法測定1，8-桉葉素、香檜烯、檸檬烯和α-松油醇含量。標準品(純度為98%)購買于成都德斯特生物技術有限公司。其中，氣相色譜條件為HP-5毛細管柱(30 m×320 mm，0.25 μm)，采用程序升溫，初始柱溫為50 ℃，保持3 min；后升溫至85 ℃(升溫速率為5 min·℃，下同)，保持2 min；升溫至90 ℃，保持2 min，后升溫至160 ℃和220 ℃，保持時間為0 min；進樣口溫度為200 ℃，接口溫度為235 ℃，載氣為高純氮氣，進樣量為1 μL，流速為1 mL·min，分流比為10：1。

1.4 根際土壤細菌高通量測序

按DNA提取試劑盒FastDNASPINKit for Soil說明書提取、純化米槁根際土壤細菌DNA，用引物338F(ACTCCTAGGGAGGCAGCAG)和806R(GGACTACHVGGGTWTCTAAT)進行PCR擴增(V4-V5區(qū))，擴增體系(20 μL)：模板DNA 10 ng，5× Buffer 4 μL，2.5 mmol·LdNTPs 2 μL，F(xiàn)astpfu多聚酶0.4 μL，BSA 0.2 μL，補ddHO至20 μL。擴增條件：95 ℃ 5 min；95 ℃ 3 min，55 ℃ 30 s，72 ℃ 42 s，29個循環(huán)；72 ℃ 10 min。

根據(jù)PCR產物濃度進行等量混樣后用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測，使用上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司提供的膠回收試劑盒回收PCR產物，進行16S rDNA高通量測序。

1.5 數(shù)據(jù)分析

利用Excel 2019軟件對土壤理化性質、藥用活性成分含量等進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，用SPSS 19.0軟件的單因素方差分析和多重比較對其進行差異性檢驗；用Mothur1.30.2軟件計算各樣點土壤細菌的辛普森指數(shù)、香農指數(shù)與覆蓋度；用PICRUST1.1.0進行16S序列的GOC、KEGG的功能預測；用Bray-Curtis距離算法計算各樣本間距離，然后利用FastUniFrac分析得到樣本間距離矩陣；用R 語言3.3.1 vegan包進行冗余分析和作圖。

2 結果與分析

2.1 根際土壤理化性質

如表1所示，幾個采樣地的pH值變化范圍為4.19～6.82，為酸性土壤，各樣點差異顯著(<0.05)；同樣地，各樣點有機質含量明顯不同，羅甸的有機質含量顯著高于其他樣點。全效養(yǎng)分與速效養(yǎng)分在各樣點的變化趨勢也存在差異。其中，全氮在各樣點間無顯著差異(>0.05)，荔波的堿解氮含量顯著高于其他樣點；全磷含量在羅甸最高，各樣點間差異顯著，速效磷在樂業(yè)、羅甸、望謨、天峨、富寧、荔波樣點則無顯著差異；樂業(yè)的全鉀含量略高于荔波，且明顯高于其他樣點，有效鉀則表現(xiàn)為在望謨最高，與其他樣點間差異顯著。

表1 米槁根際土壤理化特性

2.2 果實藥用活性成分含量分析

對米槁果實中藥用活性成分進行測定，結果見圖1，樂業(yè)采摘的果實中，活性成分1，8-桉葉素、α-松油醇、檸檬烯等成分含量最高，與其他采樣點間差異顯著(<0.05)。其中，望謨與天蛾、冊亨與貞豐在1，8-桉葉素含量上無顯著差異，羅甸、冊亨采摘的果實中α-松油醇含量無顯著差異；與天峨采摘的果實相比，望謨采摘的果實中香檜烯含量略高，盡管兩者間香檜烯含量無顯著差異，但皆明顯高于其他采樣點(<0.05)。在所有采樣點中，富寧采摘的果實中1，8-桉葉素、α-松油醇、檸檬烯、香檜烯含量均最低。

LD，羅甸；WM，望謨；CH，冊亨；ZF，貞豐；TE，天峨；LY，樂業(yè)；FN，富寧；NP，那坡；LB，荔波。柱上無相同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下同。LD， Luodian； WM， Wangmo； CH， Ceheng； ZF， Zhenfeng； TE， Tian’e； LY， Leye； FN， Funing； NP， Napo； LB， Libo. Data on the bars marked without the same lowercase letter indicated significant differences at P<0.05. The same as below.圖1 米槁果實藥用活性成分的含量Fig.1 Content of medicinal active ingredients in C. migao fruits

2.3 根際土壤細菌Alpha多樣性分析

利用高通量測序方法對9個采樣點的根際土壤樣品細菌進行測序，共得到615 066條有效序列，2 112個OTUs，平均長度為434.4 bp。各樣點的覆蓋率均大于99%，測序結果能夠真實地代表米槁根際土壤細菌群落的情況。望謨的香農指數(shù)最大，其次是冊亨，荔波最小，辛普森指數(shù)有相反的變化趨勢(表2)。表明望謨根際土壤細菌多樣性較豐富，荔波根際土壤細菌多樣性較低。

表2 米槁根際土壤的細菌Alpha多樣性

2.4 細菌群落結構組成

9個土壤樣品細菌菌群鑒定的OTUs歸屬于29個門，對豐度小于0.01%的菌門聚類為others，米槁根際土壤細菌菌群在柱形圖上共有11個門(圖2)，分別是變形菌門(Proteobacteria，34.81%)、酸桿菌門(Acidobacteria，21.85%)、放線菌門(Actinobacteria，16.71%)、綠彎菌門(Chloroflexi，10.61%)、疣微菌門(Verrucomicrobia，3.48%)、浮霉菌門(Planctomycetes，2.34%)、硝化螺菌門(Nitrospirae，2.86%)、厚壁菌門(Firmicutes，2.38%)、芽單胞菌門(Gemmatimonadetes，1.68%)、擬桿菌門(Bacteroidetes，1.64%)，及一未識別類(unclassified_k_norank，0.59%)。綜合比較，變形菌門、酸桿菌門、放線菌門、綠彎菌門是米槁根際土壤的優(yōu)勢菌門，相對豐度皆在10%以上。米槁根際土壤細菌菌群在不同采樣點均有分布，但各菌門在不同采樣點的豐度有所不同，變形菌門、酸桿菌門、放線菌門、綠彎菌門豐度在不同采樣點的變化范圍分別為27.57%～43.78%、7.08%～30.05%、11.08%～23.66%、5.01%～12.76%。其中，變形菌門在荔波豐度(43.78%)最高，望謨豐度(27.57%)最低；酸桿菌門在天峨豐度(30.05%)最高；冊亨的放線菌門豐度(23.66%)較高，在荔波豐度(11.08%)較低；綠彎菌門在望謨豐度(12.76%)最高，在荔波豐度(5.01%)最低。

圖2 門水平上的物種相對豐度分布圖Fig.2 Distribution of relative abundance of species on phylum level

9個土壤樣品細菌類群分布在63個綱，其中，21個綱為幾個采樣點共有(圖3)。物種豐富度前4的菌群中，α-變形桿菌綱(Alphaproteobacteria)、酸桿菌綱(Acidobacteria)為各采樣點共有的優(yōu)勢菌綱。除此之外，冊亨、羅甸、那坡、貞豐的優(yōu)勢菌綱為放線菌綱(Actinobacteria)、纖線桿菌綱(Ktedonobacteria)，天峨、望謨的優(yōu)勢菌綱為丙型變形菌綱(Gammaproteobacteria)、放線菌綱(Actinobacteria)，樂業(yè)的優(yōu)勢菌綱為α-變形菌綱(Deltaproteobacteria)、放線菌綱(Actinobacteria)，荔波的優(yōu)勢菌綱為丙型變形菌綱(Gammaproteobacteria)、硝化螺菌綱(Nitrospia)。綜合比較，α-變形桿菌綱(25.47%)、酸桿菌綱(21.84%)、放線菌綱(16.73%)、纖線桿菌綱(4.94%)為米槁根際土壤中的優(yōu)勢菌綱，相對豐度之和為68.98%，占整個菌綱的一半以上。

圖3 綱水平上的物種相對豐度分布Fig.3 Distribution of relative abundance of species on class level

9個土壤樣品細菌類群分布在387屬(圖4)。將相對豐度位于前30的細菌分別按照樣品和分類進行聚類后繪制熱圖，可分為3個大支，主要集中在疣微菌門、酸桿菌門、變形菌門、放線菌門、厚壁菌門、綠灣菌、浮霉菌門、硝化螺菌門、芽單胞菌門共9個門中。其中，最為優(yōu)勢的OUT單元為變形菌門。各采樣點間優(yōu)勢菌屬存在一定差異，冊亨的酸桿菌綱一未定屬(，8.08%)、酸桿菌科一未定屬(Acidobacteriaceae_surbgroup_1，7.59%)豐度較高，富寧(FN)的酸桿菌綱一未定屬(，10.25%)、黃色桿菌科一未定屬(，5.72%)豐度較高，荔波的硝化螺菌屬(，12.77%)、黃色桿菌科一未定屬(，9.02%)豐度較高，羅甸豐度較高的屬為酸桿菌綱一未定屬(，9.34%)、DA111一未定屬(DA111，7.14%)，樂業(yè)的酸桿菌綱一未定屬(，5.57%)、變異桿菌(，5.49%)豐度較高，那坡的酸桿菌科一未定屬(Acidobacteriaceae_surbgroup_1，7.22%)、熱酸菌屬(，8.70%)豐度較高，天峨的酸桿菌綱一未定屬(，8.63%)、酸桿菌科一未定屬(Acidobacteriaceae_surbgroup_1，8.46%)豐度較高，望謨的酸桿菌綱一未定屬(，15.39%)、變異桿菌(，3.45%)豐度較高，貞豐豐度較高的為酸桿菌科一未定屬(Acidobacteriaceae_surbgroup_1，8.33%)、熱酸菌屬(，11.86%)。綜合比較，冊亨與天峨、那坡與貞豐、富寧與樂業(yè)優(yōu)勢菌屬有更高的相似性。

圖4 屬水平上的物種分布熱圖Fig.4 Species distribution heatmap on genus level

2.5 細菌群落與土壤理化特性的相關性

在屬水平上，對米槁根際土壤中豐度前10的細菌群落與土壤理化特性間作冗余分析和相關性熱圖，結果見圖5。RDA1和RDA2可分別解釋59.41%、15.48%的變異率，累計解釋率為74.89%，能較好地反映根系土壤細菌群落與土壤理化特性間的相互關系。其中，黃桿菌科一未定屬與全氮呈極顯著(<0.01)正相關，與堿解氮呈顯著(<0.05)正相關；硝化螺菌屬與全氮、堿解氮呈顯著正相關；酸桿菌門中一未定屬與全氮呈極顯著負相關，與堿解氮呈顯著負相關；除酸桿菌門中一未定屬、硝化螺菌屬外，pH值與其他菌屬表現(xiàn)為顯著負相關或極顯著負相關；速效磷與慢生根瘤菌屬()呈極顯著負相關，與為顯著負相關；有機質與暫定種呈顯著負相關。綜合比較，pH值、全氮、堿解氮對細菌群落多樣性的影響較大。

TN為全氮，AN為堿解氮；TK為全鉀，AK為有效鉀；TP為全磷，AP為速效磷；OM為有機質。TN means total nitrogen， AN means alkaline hydrolysis nitrogen； TK means total potassium， AK means available potassium； TP means total phosphorus， AP means available phosphorus； OM means organic matter.圖5 根際土壤特性與屬水平上細菌的RDA分析和heatmap圖Fig.5 RDA analysis and correlation heatmap between rhizosphere soil characteristics and bacteria on genus level

2.6 細菌群落與果實藥用活性成分的相關性

RDA分析中，箭頭越長，夾角越小，相關性越大。在屬水平上，對米槁根際土壤中豐度前10的細菌群落與果實藥用活性成分作冗余分析和相關性熱圖，結果見圖6。各活性成分含量與、DA111、、酸桿菌門中一未定屬、酸桿菌綱一未定屬、暫定屬等呈正相關，與、、黃桿菌綱一未定屬、DA101呈負相關。其中，檸檬烯、香檜烯含量受DA101影響較大，相關系數(shù)分別為-0.500、-0.482；α-松油醇受硝化螺菌屬影響較大，相關系數(shù)為-0.456；1，8-桉葉素受黃桿菌綱一未定屬影響較大，相關系數(shù)為-0.413，各菌屬對活性成分的含量具有一定的影響。

圖6 藥用活性成分與屬水平上細菌的RDA分析和熱圖Fig.6 RDA analysis and correlation heatmap between medicinal active ingredients and bacteria on genus level

2.7 功能預測分析

利用PICRUST軟件對9個采樣點根際土壤進行菌群功能預測，比較幾個采樣點代謝功能通路的差異。KEGG pathway豐度統(tǒng)計分析表明，除未分類信息(unclassified)外，幾個采樣點共獲得6種一級生物代謝功能通路功能基因(圖7)，包括細胞過程(cellular processes)、環(huán)境信息處理(environmental information processing)、遺傳信息處理(genetic information processing)、人類疾病(human diseases)、代謝(metabolism)、有機系統(tǒng)(organismal systems)。主要以代謝、遺傳信息處理、未分類信息、環(huán)境信息處理為主，相對豐度皆為10%以上，且在各采樣點無明顯差異。

圖7 基于KEGG pathway的功能基因相對豐度分布圖Fig.7 Relative abundance distribution of functional genes based on KEGG pathway

利用GOC數(shù)據(jù)庫進行對比，各采樣點共包括25個功能基因群(圖8)，占優(yōu)勢的主要有信號傳導機制(signal transduction mechanisms)、一般功能預測(general function prediction only)、細胞壁/膜/包膜的生物發(fā)生(cell wall/membrane/envelope biogenesis)、能量生產與轉換(energy production and conversion)、未知功能(function unknown)、氨基酸的運輸和代謝(amino acid transport and metabolism)、轉錄(transcription)和碳水化合物的運輸與代謝(carbohydrate transport and metabolism)等，可歸納為細胞的生物發(fā)生、能量與物質的運輸代謝兩方面。

J，翻譯、核糖體結構和生物發(fā)生；Z，細胞骨架；N，細胞運動；L，復制、修復和重組；F，核苷酸的運輸和代謝；G，碳水化合物運輸與代謝；K，轉錄；D，細胞周期控制、細胞分裂、染色體分配；E，氨基酸的轉運和代謝；S，功能未知；C，能量生產和轉化；B，染色質結構和動力學；A，RNA加工和修飾；M，細胞壁/膜/包膜生物發(fā)生；W，細胞外結構；Q，次生代謝物的生物合成、運輸和分解代謝；U，細胞內運輸、分泌和囊泡運輸；V，防御機制；O，翻譯后修飾、蛋白質周轉、調控；H，輔酶運輸和代謝；P，無機離子轉運與代謝；Y，核結構；I，脂質運輸與代謝；R，一般功能預測；T，信號傳導機制。下同。J， Translation， ribosome structure and biogenesis； Z， Cytoskeleton； N， cell motility； L， Replication， repair and recombination； F， Nucleotide transport and metabolism； G， Carbohydrate transport and metabolism； K， Transcription ； D， Cell cycle control， cell division， chromosome partitioning； E， Amino acid transport and metabolism； S， Function unknown； C， Energy production and conversion； B， Chromatin structure and dynamics； A， RNA processing and modification； M ， Cell wall/membrane/envelope biogenesis； W， Extracellular structures； Q， Secondary metabolites biosynthesis， transport， and catabolism； U， Intracellular transport， secretion， and vesicular trafficking； V， Defense mechanisms； O， Posttranslational modification， protein turnover， chaperones； H， Coenzyme transport and metabolism； P， Inorganic ion transport and metabolism； Y， Nuclear structure； I， Lipid transport and metabolism； R， General functional prediction only； T， Signal transduction mechanisms. The same as below.圖8 基于GOC的功能基因相對豐度分布圖Fig.8 Relative abundance distribution of functional genes based on GOC

基于以上結果與果實活性成分含量作冗余分析，結果見圖9。RDA1和RDA2的累積解釋率為84.08%，能較好地反映細菌功能與活性成分間的關系。檸檬烯、香檜烯、1，8-桉葉素、α-松油醇等與核苷酸轉運和代謝(nucleotide transport and metabolism)、轉錄(transcription)、氨基酸轉運和代謝(amino acid transport and metabolism)皆分布在第4象限，說明活性成分含量的積累主要受核苷酸、氨基酸的轉運與運輸、轉錄的影響，并與碳水化合物的轉運與代謝(carbohydrate transport and metabolism)、防御機制(defense mechanisms)等呈正相關，與其他細菌功能呈一定負相關。

圖9 根際土壤細菌的功能與果實活性成分積累的RDA分析Fig.9 RDA analysis of soil bacteria function in the rhizosphere and accumulation of active ingredients in the fruit

3 討論

高通量測序是目前研究微生物多樣性最多的的方法之一，廣泛用于農、林、畜牧業(yè)中。香農指數(shù)和辛普森指數(shù)是反映微生物多樣性的常用指標，香農指數(shù)的值越大，辛普森指數(shù)的值越小，微生物多樣性越豐富。本研究中，天峨的OTU最多，望謨、樂業(yè)等地的香農指數(shù)較大，有較豐富的細菌多樣性，4種活性成分含量明顯高于其他產地。豐富的細菌多樣性有利于促進米槁的生長，提高米槁果實藥用活性成分含量。

細菌是土壤中數(shù)量最多的微生物群，能利用多種不同來源的碳作為能量，將復雜的有機化合物轉化成簡單化合物的同時為其他微生物提供基質，是土壤生態(tài)系統(tǒng)中養(yǎng)分的重要來源和庫。在門水平上，米槁根際土壤的優(yōu)勢細菌門為變形菌門、酸桿菌門、放線菌門和綠彎菌門，均是土壤中常見的優(yōu)勢菌門。王甜甜等在不同生育期抗蟲棉根際細菌群落研究中得出了相同的結果。米槁是道地性藥材，根際細菌群落較復雜。在屬的水平上，各采樣點根際土壤細菌的優(yōu)勢屬存在差異?；钚猿煞州^高的3個樣點中，除酸桿菌綱一未定屬(norank_c_Acidobacteria)外，為樂業(yè)、望謨的另一優(yōu)勢屬。另外，在天峨的相對豐度為7.62%，僅低于酸桿菌科一未定屬(Acidobacteriaceae_surbgroup_1，8.46%)。根際土壤特性與細菌間的關聯(lián)性分析表明，黃桿菌科一未定屬(norank_f_Xanthobacteraceae)、硝化螺菌屬與各土壤特性呈正相關，與全氮、堿解氮含量呈顯著正相關或極顯著正相關，是土壤中常見的促生菌屬；全氮、堿解氮與酸桿菌綱一未定屬呈顯著負相關和極顯著負相關，pH值與、DA111、熱酸桿菌屬、慢生根瘤菌屬、變異菌屬等呈顯著或極顯著負相關，說明酸性土壤更有利于米槁根際細菌的生存，這與呂東英等對多枝怪柳的研究結果基本一致，與李明等對土壤鹽堿地的研究結果相反。米槁是典型的陽生植物，高含量的磷有利于增加米槁對光的適應程度。本研究中，各產地米槁根際土壤的有效磷含量均較高，與各菌屬呈負相關或顯著負相關，反而抑制了各菌屬的生存。同時，有機質、速效鉀含量與各菌屬呈不同程度的負相關。土壤理化因子是決定米槁根際土壤細菌群落結構與多樣性的關鍵因子。

已有的研究中，氮輸入通過固氮、硝化等對細菌的代謝潛力產生一定程度的影響。同時，根際微生物的代謝過程是保證土壤健康、植物產量的重要前提。基于高通量測序的PICRUST功能預測具有速度快、效率高等特點，已廣泛用于各領域。孫峰等對丹江口庫區(qū)濱帶不同植被土壤細菌多樣性的研究中發(fā)現(xiàn)，隨植被類型的不同，土壤細菌間代謝能力也不同。米槁根際細菌與活性成分積累的關聯(lián)性分析表明，4種活性成分與慢生根瘤菌屬、DA101、硝化螺菌屬呈負相關，與、DA111等呈正相關但不顯著?；诖?，對米槁根際細菌進行功能預測，探究細菌功能基因對活性成分積累的影響。結果表明，各活性成分與25個功能群呈不同程度的相關性，α-松油醇對各功能基因的響應最大，其次是1，8-桉葉素。說明細菌多樣性主要通過不同功能基因對活性成分的積累造成不同的影響。

4 結論

米槁根際土壤細菌隸屬于29門63綱387屬，多樣性豐富。各樣點在門、綱水平上的優(yōu)勢菌一致，但在屬水平上存在差異，主要以酸桿菌綱一未定屬、酸桿菌科一未定屬、黃桿菌科一未定屬、熱酸菌屬、、硝化螺菌屬等為主。其中，酸桿菌綱一未定屬、在樂業(yè)、天峨、望謨均有較高的相對豐度，與4種藥用活性成分的積累呈正相關。比較各采樣點，樂業(yè)根際土壤肥力最好，活性成分產量最多。

米槁根際土壤細菌一級功能通路有6種，二級功能通路為25種，促進果實活性成分積累的主要為氨基酸、核苷酸與碳水化合物等能量物質的轉運與代謝。土壤根際細菌多樣性受pH值、氮含量的顯著影響，而氮又廣泛參與細胞的生物發(fā)生過程，是能量與物質的重要組成部分，且4種藥用活性成分與25個細菌功能群呈不同程度的相關性。推測土壤因子可通過影響根際細菌多樣性，改變土壤細菌功能，從而在一定程度上影響米槁果實活性成分的含量。