氟啶胺在三七中的降解行為及安全性評(píng)價(jià)

李文希，代雪芳，張雪燕，浦恩堂

(云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)環(huán)境資源研究所，昆明 650205)

【研究意義】三七[Panaxnotoginseng(Burk.) F. h. Chen]為五加科人參屬多年生宿根草本植物，是馳名中外的名貴中藥材，也是預(yù)防和治療心血管疾病的首選藥材[1-2]。云南文山是三七的道地產(chǎn)區(qū)，常年種植面積及產(chǎn)量均占全國(guó)的60%以上[3]。三七屬多年生植物，生長(zhǎng)環(huán)境溫暖陰濕，導(dǎo)致病蟲害問題十分嚴(yán)重。目前生產(chǎn)上三七病蟲害防治大多依賴化學(xué)農(nóng)藥，但三七上的登記用藥與實(shí)際生產(chǎn)用藥嚴(yán)重失衡，大部分農(nóng)藥的使用均無(wú)科學(xué)的用藥依據(jù)，導(dǎo)致三七中農(nóng)藥殘留失控，給食品安全及生態(tài)環(huán)境安全帶來(lái)巨大風(fēng)險(xiǎn)[4-5]。另一方面，歐盟、美國(guó)、日本、韓國(guó)等發(fā)達(dá)國(guó)家對(duì)進(jìn)口中藥材及保健品提出了嚴(yán)苛的農(nóng)殘限量指標(biāo)，并以此作為貿(mào)易技術(shù)壁壘限制藥材進(jìn)口，三七產(chǎn)品出口面臨著嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。因此開展農(nóng)藥田間規(guī)范殘留試驗(yàn)，研究其在三七中的降解行為及殘留水平，并進(jìn)行膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，對(duì)制定三七中的農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)及指導(dǎo)三七生產(chǎn)安全合理用藥具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】通常情況下，通過莖葉施用的農(nóng)藥會(huì)附著于作物表面或被作物吸收，通過自然滴落、雨水沖刷等方式進(jìn)入環(huán)境中，并發(fā)生遷移、代謝、富集等一系列生化過程[6]。目前，關(guān)于農(nóng)藥在三七及環(huán)境中的降解行為及殘留特征的研究報(bào)道較少，僅涉及苯醚甲環(huán)唑[7]、多菌靈[8]及百菌清[9]等使用較普遍的農(nóng)藥?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】氟啶胺(Fluazinam，圖1)是一種新型取代苯胺類保護(hù)性殺菌劑，通過阻斷病菌能量(ATP)的形成而使病原物死亡，被用于多種作物的病害防治，且同市面上的大多數(shù)殺菌劑無(wú)交互抗性[10-11]。但氟啶胺被報(bào)道對(duì)人體有潛在威脅，可引發(fā)哮喘病、皮炎等免疫系統(tǒng)疾病[12]。根據(jù)農(nóng)業(yè)部小作物農(nóng)藥登記專項(xiàng)和國(guó)家農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)小作物補(bǔ)點(diǎn)專項(xiàng)項(xiàng)目組調(diào)查，氟啶胺對(duì)三七圓斑病、黑斑病等病害均有良好的防治效果。目前，關(guān)于氟啶胺的殘留行為研究主要集中在菊花[12]、黃瓜[13]、馬鈴薯[14]、辣椒[15]、蔥[16]等作物中，其在三七及環(huán)境中的殘留行為及安全性尚不明確。【擬解決的關(guān)鍵問題】本文在前人建立的方法基礎(chǔ)上[11-17]，采用超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)建立了氟啶胺在三七和土壤基質(zhì)中的殘留定量分析方法，通過開展田間試驗(yàn)，跟蹤監(jiān)測(cè)了氟啶胺在三七莖葉、根部及土壤中的轉(zhuǎn)移、降解和富集過程，并建立相應(yīng)降解模型；研究了不同施藥影響因子條件下氟啶胺在三七主要藥用部位塊根、須根及花中的殘留特征，開展膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，以期為三七上的合理用藥奠定科學(xué)基礎(chǔ)。

圖1 氟啶胺結(jié)構(gòu)式Fig.1 Structural formula of fluazinam

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Waters I-Class ACQUITY 超高效液相色譜儀和Xevo TQD 三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀(美國(guó)Waters公司)；TARGIN VXIII多管渦旋振蕩儀(北京踏錦科技有限公司)；LXJ-IIB 低速大容量多管離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；SIGMA 1-14 離心機(jī)(德國(guó)Sigma公司)；BUCHI R-200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士Buchi公司)；TM-767III攪拌機(jī)(中山海盤公司)。

氟啶胺標(biāo)準(zhǔn)品(Fluazinam，CAS號(hào)：79622-59-6,德國(guó)Dr. Ehrenstorfer GmbH公司)：純度99.5%；50%氟啶胺懸浮劑(50% fluazinam suspension，深圳諾普信農(nóng)化股份有限公司)；乙腈、甲醇(色譜純，德國(guó)Merck公司)；甲酸(色譜純，上海麥克林生化科技有限公司)；氯化鈉(分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；N-丙基乙二胺(PSA)、石墨化碳(GCB,上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司)；純水(屈臣氏蒸餾水)；0.22 μm微孔濾膜(天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。1000 mg/L氟啶胺標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：準(zhǔn)確稱取氟啶胺標(biāo)準(zhǔn)品0.01 g(精確至0.0001 g)于10 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，轉(zhuǎn)入棕色儲(chǔ)液瓶中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 分析檢測(cè)

1.2.1 樣品制備 干燥的塊根、須根和三七花樣品用植物粉碎機(jī)粉碎，過40目篩 (孔徑425 μm)，混合均勻；冷凍的鮮植株和根系樣品加入適量干冰用植物粉碎機(jī)打成粉狀，混合均勻，開口放置于冷凍條件下待干冰完全揮發(fā)；土壤樣品去除雜物后混合均勻。

1.2.2 提取 稱取5.0 g(精確到0.1 g)樣品于50 mL離心管中，加入純水(干樣10 mL、鮮樣5 mL)，再加入乙腈25 mL，渦旋提取10 min；加入NaCl 8 g，渦旋1 min后以3000 r/min離心5 min，待凈化。

1.2.3 凈化 移取1.0 mL上層清液于裝有PSA 50 mg和GCB 15 mg的2 mL離心管中(土壤樣品為50 mg PSA)，渦旋1 min后以10 000 r/min的速率離心3 min，用1 mL針管移取上清液經(jīng)0.22 μm有機(jī)系濾膜過濾后轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣瓶中，用UPLC-MS/MS測(cè)定。

1.2.4 UPLC-MS/MS檢測(cè)條件 超高效液相系統(tǒng)(UPLC)條件：Acquity UPLC BEH C18柱 (2.1 mm × 50 mm, 1.7 μm)，柱溫35 ℃，進(jìn)樣體積1.0 μL，流動(dòng)相為甲醇(A)和水(B)，流速為0.4 mL/min，流動(dòng)相梯度為：0～2.00 min，10%～90%A；2.00～4.00 min，90%A；4.00～4.10 min，90%～10%A；4.10～7.00 min，10%A。

串聯(lián)質(zhì)譜(MS/MS)條件：電噴霧離子源(ESI)，負(fù)離子掃描，毛細(xì)管電壓3.0 kV，錐孔電壓30 V，離子源溫度150 ℃，脫溶劑溫度400 ℃；脫溶劑氣和錐孔氣均為高純氮?dú)?，脫溶劑氣流?00 L/h，錐孔氣流量50 L/h；碰撞氣為高純氬氣；采用多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(MRM)，以定量離子對(duì)、定性離子對(duì)和保留時(shí)間定性，以無(wú)干擾、響應(yīng)高的定量離子對(duì)定量，質(zhì)譜參數(shù)見表1。

1.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線 取空白樣品，按照上述前處理方法提取、凈化得到空白基質(zhì)溶液，將氟啶胺標(biāo)準(zhǔn)溶液分別用乙腈和空白基質(zhì)溶液逐級(jí)稀釋配制為質(zhì)量濃度為0.005、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上述儀器條件檢測(cè)，以氟啶胺的質(zhì)量濃度和對(duì)應(yīng)峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.6 檢測(cè)方法確證 檢測(cè)方法的確證包括對(duì)方法的線性范圍、基質(zhì)效應(yīng)、特異性、準(zhǔn)確性、重復(fù)性及靈敏度(定量限)的考察和確證，其中方法特異性通過對(duì)比空白樣品色譜圖與標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖，確認(rèn)在目標(biāo)物出峰處無(wú)雜質(zhì)干擾；準(zhǔn)確性及重復(fù)性通過添加回收試驗(yàn)確證，在空白樣本(三七塊根、須根、植株、根系、花及土壤)中分別添加3檔水平的氟啶胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，每檔添加水平重復(fù)5次，按上述前處理及檢測(cè)方法檢測(cè)樣品，以平均回收率評(píng)估方法準(zhǔn)確性及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)評(píng)估方法重復(fù)性；方法的定量限為采用添加方法能準(zhǔn)確檢測(cè)的目標(biāo)物最低濃度；基質(zhì)效應(yīng)(ME)為基質(zhì)與溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率比，當(dāng)ME在0.9～1.1時(shí)，表示基質(zhì)效應(yīng)不明顯，低于或超過該范圍則表示基質(zhì)減弱/增強(qiáng)效應(yīng)。

1.3 田間試驗(yàn)

田間試驗(yàn)按照NY/T 788—2004《農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》[18]和《農(nóng)藥登記殘留田間試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》[19]進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)，于2018年8—10月在云南省曲靖市沾益區(qū)、昆明市石林縣、紅河州彌勒市、文山州丘北縣進(jìn)行，包括殘留消解試驗(yàn)及最終殘留試驗(yàn)，試驗(yàn)信息見表2。選擇地勢(shì)平整，作物長(zhǎng)勢(shì)良好的三七地塊進(jìn)行田間試驗(yàn)，供試作物為三年生三七，采用標(biāo)準(zhǔn)遮蔭棚設(shè)施栽培，試驗(yàn)安排在三七第3年生育期，試驗(yàn)期間進(jìn)行正常的田間管理，不施用目標(biāo)農(nóng)藥。將試驗(yàn)區(qū)劃分為面積為15 m2的小區(qū)，每種處理重復(fù)3次，另設(shè)空白對(duì)照區(qū)。

1.3.1 消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn) 將50%氟啶胺懸浮劑按375 g a.i./hm2莖葉噴霧施藥1次，分別于施藥后當(dāng)天(2 h)、1、3、5、7、14、21、30、45和60 d采集三七植株、鮮三七根、0～10 cm深根際土壤樣品。每次每小區(qū)采用棋盤法采挖三七10～15株，分為植株和根系，再采集三七根系附近0～10 cm深土壤樣品約1 kg，同時(shí)將根系上附著的泥土刮下，合并裝入聚乙烯封口袋中，植株部分切成約1 cm小段，根系部分用清水洗凈后切片，分別放入聚乙烯封口袋中。在附近選擇一塊墑情適中的地塊，將三七拔除，單獨(dú)進(jìn)行土壤消解試驗(yàn)，按相同的施藥劑量施藥，并在相同間隔期采集0～10 cm深土壤樣品約1 kg，放入聚乙烯封口袋中。所有樣品均置于<-18 ℃條件下冷凍保存。

1.3.2 最終殘留試驗(yàn) 將50%氟啶胺懸浮劑按不同施藥劑量、施藥次數(shù)噴施于三七植株，并在不同采收間隔期采集樣品。分別設(shè)低劑量(最高推薦劑量，有效成分250 g/hm2)及高劑量處理區(qū)(1.5倍最高推薦劑量，有效成分375 g/hm2)，施藥3次和4次，施藥間隔期7 d，末次施藥后5、7、14 d采集三七花樣本，7、14、21 d采集三七根樣本。每小區(qū)每次采用棋盤法采集三七新鮮蓓蕾約200 g，攤開，用遠(yuǎn)紅外燈照射(表面溫度40～50 ℃)至含水量≤13%(約1～2 d，期間不定時(shí)翻動(dòng))，裝袋密封；采挖10～15株生長(zhǎng)正常、無(wú)病害、成熟的三七全株，清理根部泥土，剪棄地上部分植株，根系洗凈后分為塊根和須根，塊根切片后與須根分別用遠(yuǎn)紅外燈照射(表面溫度40～50 ℃)至含水量≤13%(約2～3 d，期間不定時(shí)翻動(dòng))，裝袋密封；所有樣品均置于<-18 ℃條件下冷凍保存。

1.4 數(shù)據(jù)分析

為保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線—外標(biāo)法對(duì)試驗(yàn)樣品進(jìn)行定量，按下式計(jì)算樣品中氟啶胺的殘留量。

(1)

式中，C為殘留量(mg/kg)；A為樣品峰面積；V為提

表1 氟啶胺串聯(lián)質(zhì)譜參數(shù)

表2 試驗(yàn)點(diǎn)信息

取溶液的體積(mL)，m為樣品質(zhì)量(g)，b為標(biāo)準(zhǔn)曲線截距，a為標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率。

氟啶胺的降解趨勢(shì)采用一級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)方程計(jì)算。

Ct=C0e-kt

(2)

式中,Ct為農(nóng)藥殘留量(mg/kg)；C0為農(nóng)藥原始?xì)埩袅?mg/kg)；k為降解系數(shù)；t表示施藥后時(shí)間(d)。

半衰期t1/2表示農(nóng)藥殘留量消解一半所需要的時(shí)間。

(3)

式中,k表示消解系數(shù)。

氟啶胺的膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)以風(fēng)險(xiǎn)概率RQ(%)表示[20-21]。

NEDI=∑(STMRi×Fi)

(4)

(5)

式中,NEDI為農(nóng)藥的國(guó)家估算每日攝入量(mg)；STMRi為農(nóng)藥在特定食品中的殘留中值(mg/kg)，如果沒有殘留中值則用相應(yīng)的MRL值代替；Fi為該食品的一般人群消費(fèi)量(kg)；式(5)中b.w.為人體重(kg)；ADI為每日允許攝入量(mg/kg bw)。RQ為一般人群攝入該農(nóng)藥的風(fēng)險(xiǎn)概率，當(dāng)RQ≤100%時(shí)，認(rèn)為對(duì)一般人群無(wú)健康風(fēng)險(xiǎn)，比值越小風(fēng)險(xiǎn)越低。

2 結(jié)果與分析

2.1 前處理方法優(yōu)化

在前人建立的前處理方法基礎(chǔ)上[12,17]，重點(diǎn)考察了不同凈化方法—分散固相萃取法(d-SPE)、固相萃取法(SPE)及不同凈化劑的凈化效果，并以方法的回收率及基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行對(duì)比評(píng)價(jià)。以三七塊根為例，在空白樣品中添加氟啶胺標(biāo)準(zhǔn)溶液使添加濃度為0.2 mg/kg，靜置30 min后，采用1.2.2的方法提取，取上清液用不同的方法凈化。結(jié)果如圖2所示，柱形圖表示方法的回收率，灰色方框內(nèi)為可接受回收率70%～110%，而三角符號(hào)表示方法的基質(zhì)效應(yīng)(ME)，紅線位置表示ME為1即無(wú)基質(zhì)效應(yīng)，回收率符合要求的前提下基質(zhì)效應(yīng)越低表示干擾越少，凈化效果越好。從圖2可看出，未凈化的樣品溶液呈基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)(ME>1.1)，樣品凈化后基質(zhì)效應(yīng)有不同程度的降低，其中以采用PSA/C1850 mg+GCB 15 mg、PSA/C1850 mg+GCB 15 mg+無(wú)水MgSO4150 mg為凈化劑的d-SPE法和采用氨基柱(NH2)的SPE法的基質(zhì)效應(yīng)最低，凈化效果最好；但SPE法操作復(fù)雜，需要使用較多的有機(jī)溶劑，且氨基柱會(huì)吸附目標(biāo)物，無(wú)法洗脫(回收率接近0)。綜合幾種基質(zhì)的凈化對(duì)比結(jié)果后，最終決定采用以PSA 50 mg + GCB 15 mg(土壤樣品用PSA 50 mg)作為凈化劑的分散固相萃取法對(duì)樣品提取液進(jìn)行凈化，該方法操作簡(jiǎn)便，方法技術(shù)指標(biāo)均滿足殘留分析的要求。

圖2 不同凈化條件下添加氟啶胺0.2 mg/kg于三七塊根的凈化效果對(duì)比(n=3)Fig.2 Comparison of purification efficiency of adding 0.2 mg/kg fluazinam in P. notoginsengroot tuber under different clean-upconditions (n=3)

2.2 分析方法的確證

如圖3所示，以三七塊根為例，通過對(duì)比基質(zhì)空白樣品與標(biāo)準(zhǔn)溶液及添加樣品色譜圖可確定在空白樣品中目標(biāo)物出峰處的干擾峰的響應(yīng)值低于最低添加濃度響應(yīng)值的30%，因此對(duì)樣品檢測(cè)無(wú)影響。方法的關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)列于表3中，在0.002～0.200 mg/L(植株為0.002～1.000 mg/L)濃度內(nèi)，氟啶胺在三七塊根、須根、植株、根系、花及土壤基質(zhì)中均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)大于0.99；基質(zhì)效應(yīng)均不顯著，在0.9～1.1內(nèi)；定量限為0.01～0.02 mg/kg。添加回收結(jié)果表明，氟啶胺在所有基質(zhì)中的回收率在82%～103%，RSD為1%～13%，準(zhǔn)確度及精密度均符合農(nóng)藥殘留分析的要求。

A：三七塊根基質(zhì)氟啶胺標(biāo)準(zhǔn)溶液0.002 mg/L；B：三七塊根空白對(duì)照；C：三七塊根添加氟啶胺0.01 mg/kgA: The 0.002 mg/L fluazinam matrix-matched standard solution of P. notoginseng root tuber; B: The blank control of P. notoginseng root tuber; C: The 0.01 mg/kg sample of fluazinam in P. notoginseng root tuber圖3 氟啶胺在三七塊根中的添加回收色譜圖Fig.3 Chromatograms of fortified samples of fluazinam in P. notoginseng root tuber

2.3 消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)

2.3.1 氟啶胺在三七體系中的消解動(dòng)態(tài) 2個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)氟啶胺在三七體系中的消解動(dòng)態(tài)曲線如圖4～5所示。施藥后2 h氟啶胺在三七植株中的原始沉積量分別為36.2(沾益)和31.1 mg/kg(彌勒)，殘留量隨間隔期延長(zhǎng)逐漸降低，7 d降解率55%～60%，30 d后降解率99%以上，消解動(dòng)態(tài)符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)模型，降解方程為C=27.332e-0.106t，r=0.9824(沾益)和C=22.6e-0.094t，r=0.9545(彌勒)，半衰期分別為6.5和7.4 d。施藥后2 h氟啶胺在根際土壤中即能被檢測(cè)到，原始沉積量為0.046～0.053 mg/kg，之后殘留量逐漸升高，分別于施藥后14(沾益)和5 d(彌勒)達(dá)到峰值，為0.45和0.22 mg/kg，殘留量隨時(shí)間呈波動(dòng)性降解，60 d后均低于0.05 mg/kg，降解趨勢(shì)不符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)模型。氟啶胺在根系中的原始沉積量為0.033～0.057 mg/kg，之后殘留量逐漸升高，分別于5(沾益)和14 d(彌勒)達(dá)到第1個(gè)高峰0.098～0.110 mg/kg，于21(沾益)和30 d (彌勒)達(dá)到第2個(gè)高峰0.068～0.16 mg/kg，降解趨勢(shì)不符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程。氟啶胺在土壤中的原始沉積量為0.23～0.61 mg/kg，之后殘留量在14 d內(nèi)(沾益)和21 d(彌勒)內(nèi)隨時(shí)間的推移逐漸降低，分別降解49%和86%，之后殘留量呈波動(dòng)性降解，60 d后降解86%～89%，擬合降解方程分別為：C=0.5715e-0.023t，r=0.782(沾益)；C=0.2139e-0.033t，r=0.7359(彌勒)，半衰期分別為30.1和20 d。

圖4 沾益試驗(yàn)點(diǎn)氟啶胺在三七體系中的消解動(dòng)態(tài)曲線(n=3)Fig.4 Dissipation dynamic curves of fluazinam in P. notoginseng systemin Zhanyi (n=3)

圖5 彌勒試驗(yàn)點(diǎn)氟啶胺在三七體系中的消解動(dòng)態(tài)曲線Fig.5 Dissipation dynamic curves of fluazinam in P. notoginseng systemin Mile (n=3)

表3 方法的線性范圍、相關(guān)系數(shù)、基質(zhì)效應(yīng)、平均回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=5)及定量限

氟啶胺為保護(hù)性殺菌劑，本身不具有內(nèi)吸傳導(dǎo)性，噴施后氟啶胺藥劑主要附著于三七地上部分莖葉上，到達(dá)地下部分的藥劑量較低；此外，氟啶胺在根際土壤中的最大殘留量分別為沾益14 d時(shí)的0.45 mg/kg以及彌勒5 d時(shí)的0.22 mg/kg，約為直接噴施于土壤中的最大沉積量的63%～70%，由此可推斷噴施于作物的大部分藥劑最終將進(jìn)入土壤，至少占噴施總量的60%以上。氟啶胺在三七根系中的殘留量分別為0.057～0.160 mg/kg(沾益)和0.022～0.098 mg/kg(彌勒)，說明雖然氟啶胺不具有內(nèi)吸性，但有一定的滲透性，進(jìn)入土壤中的氟啶胺藥劑可通過滲透擴(kuò)散作用進(jìn)入三七根系中，而沾益的殘留水平高于彌勒，這可能與土壤中的微生物群落及其對(duì)藥劑的利用降解能力有關(guān)，在彌勒土壤中氟啶胺的降解半衰期更短、降解速率更快，因此最終進(jìn)入三七根系中的藥劑量更少，表現(xiàn)為更低的殘留水平。

2.4 最終殘留試驗(yàn)

最終殘留試驗(yàn)結(jié)果表明，4個(gè)地點(diǎn)三七花中氟啶胺的最終殘留量為0.015～0.860 mg/kg，三七塊根為0.045～0.750 mg/kg，須根為0.029～0.920 mg/kg。不同施藥因子下氟啶胺在不同基質(zhì)中的殘留分布如圖6～8所示，增大施藥劑量，三七花和塊根中的殘留量均顯著增加(P<0.01)，但在三七須根中差異不顯著(P>0.05)；而增加施藥次數(shù)，3種基質(zhì)中的殘留變化均不顯著(P>0.05)；此外，隨著采收間隔期的延長(zhǎng)氟啶胺在三七花中表現(xiàn)為7 d內(nèi)顯著降低(P<0.001)，而7～14 d輕微升高(P>0.05)，究其原因可能與農(nóng)藥性質(zhì)有關(guān)，氟啶胺雖無(wú)內(nèi)吸傳導(dǎo)性，但具有一定滲透擴(kuò)散性，在施藥初期附于植株(三七花)表面的藥劑受滴灌水或雨水沖刷而進(jìn)入土壤，殘留量大幅降低，隨著時(shí)間的推移，藥劑逐漸滲透吸附于植株表皮，因此殘留量變化趨于穩(wěn)定。三七塊根和須根中的氟啶胺殘留隨采收間隔期變化不顯著(P>0.1)，氟啶胺主要通過根際土壤滲透進(jìn)入三七根系中，同時(shí)伴隨滲透、擴(kuò)散、富集和降解行為，過程受土壤性質(zhì)和微生物影響，因此隨采收間隔期波動(dòng)不明顯。

圖6 不同施藥劑量下三七中氟啶胺最終殘留量Fig.6 The final residues of fluazinam in P.notoginseng at different doses

圖7 不同施藥次數(shù)下三七中氟啶胺最終殘留量Fig.7 The final residues of fluazinam in P.notoginseng at different application times

圖8 不同采收間隔期三七中氟啶胺最終殘留量Fig.8 The final residues of fluazinam in P.notoginseng at different harvesting intervals

2.5 膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

氟啶胺ADI值為0.01 mg/kg bw[22]。根據(jù)中國(guó)農(nóng)藥信息網(wǎng)氟啶胺在中國(guó)的登記使用情況，結(jié)合中國(guó)居民人均膳食結(jié)構(gòu)調(diào)查數(shù)據(jù)[23]、農(nóng)藥毒理學(xué)數(shù)據(jù)以及本研究獲得的規(guī)范殘留試驗(yàn)中值(表4)，以收獲期21 d三七須根中氟啶胺殘留中值數(shù)據(jù)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。結(jié)果如表5所示，氟啶胺的國(guó)家估算每日攝入量(NEDI)為0.45 mg，每日允許攝入量為0.63 mg，風(fēng)險(xiǎn)概率為71.4%，說明50%氟啶胺懸浮劑按照推薦劑量在三七上施用，對(duì)消費(fèi)者的慢性膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)在安全范圍內(nèi)。

表4 氟啶胺在三七花、塊根、須根中的最終殘留量

表5 氟啶胺膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果

3 討 論

3.1 氟啶胺在三七中的消解動(dòng)態(tài)

目前，已有對(duì)氟啶胺在馬鈴薯[11,14]、菊花[12]、黃瓜[13]、辣椒[15]、蔥[16]等作物中的殘留消解研究報(bào)道，研究表明氟啶胺在這些作物上的降解均較快，半衰期為1.0～8.7 d，屬于易于降解的農(nóng)藥，與本研究結(jié)果相似。但是報(bào)道的氟啶胺在土壤中的降解速率差異較大，氟啶胺在土壤中降解主要依靠土壤微生物分解，受土壤pH、濕度、有機(jī)質(zhì)含量及土壤微生物影響[24]，因此存在明顯的地區(qū)差異。此外，分析苯醚甲環(huán)唑[7]、多菌靈[8]及百菌清[9]在三七中的降解行為可知，內(nèi)吸性殺菌劑苯醚甲環(huán)唑和多菌靈可迅速被三七植物吸收并傳導(dǎo)至地下根部，施藥后3 d內(nèi)地下根部殘留量達(dá)到峰值，且殘留較高(約為0.7 mg/kg)，遠(yuǎn)高于非內(nèi)吸性農(nóng)藥百菌清及氟啶胺。

3.2 氟啶胺在收獲期三七中的殘留水平

最終殘留試驗(yàn)表明，施藥后7 d內(nèi)三七花中氟啶胺殘留大幅降低，之后殘留則變化較小，因此三七花的采收間隔期宜在施藥7 d以后。氟啶胺在三七根中的殘留量在施藥后21 d內(nèi)變化幅度較小，氟啶胺不具有內(nèi)吸傳導(dǎo)作用，大部分藥劑將殘留于地上部分及土壤環(huán)境中，到達(dá)地下根部的殘留較少，但由于三七收獲后要進(jìn)行干制處理，脫水后作物中的農(nóng)藥經(jīng)過濃縮富集，因此在三七干樣中殘留較高，這一現(xiàn)象在其他干制作物中也有類似的現(xiàn)象[12]。目前中國(guó)制定氟啶胺在三七塊根中的MRL值為1 mg/kg，三七須根中的MRL值為2 mg/kg[22]，推薦安全采收間隔期為7 d。

4 結(jié) 論

采用超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)建立了三七和土壤基質(zhì)中氟啶胺殘留的提取定量方法。氟啶胺在三七植株上的半衰期為6.5～7.4 d，在土壤中的半衰期為20.0～30.1 d，在根際土壤和三七根系中的消解不符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)反應(yīng)模型，呈先升高后波動(dòng)性降解的趨勢(shì)。50%氟啶胺懸浮劑分別按250和375 g a.i./hm2的劑量噴霧施藥3和4次，施藥間隔7 d，施藥后7、14、21 d三七塊根中氟啶胺的殘留量均<1 mg/kg，三七須根中氟啶胺的殘留量均<2 mg/kg，推薦安全采收間隔期(PHI)7 d。膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果顯示，氟啶胺的風(fēng)險(xiǎn)概率(RQ)為71.4%，風(fēng)險(xiǎn)在安全范圍內(nèi)。