短柄五加喂養(yǎng)大鼠安全性觀察

魏琳琳，劉俊娓，胡 萍

甘肅省疾病預(yù)防控制中心毒理科，甘肅 蘭州730000

短柄五加（Acanthopanax brachypusHarms）為五加科五加屬落葉灌木［1］，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，生長于海拔1000～2100 m 的山谷灌木叢中，在我國的分布范圍極其狹窄，主要分布于西北黃土高原，是我國特有的瀕危灌木［2-6］。在甘肅主要分布于慶陽、平?jīng)?、隴南、天水、臨夏、甘南等地［7-8］，《甘肅省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》將其收載為地方標(biāo)準(zhǔn)［9］，命名為“甘肅刺五加”，其根、根莖和莖是生產(chǎn)“五加片”的原料［10-11］，制劑功效與刺五加相近［12-13］。短柄五加含黃酮［14-17］、揮發(fā)油［18-20］、木質(zhì)素［21-22］、飽和脂肪酸［23］、氨基酸及多種微量元素［7］，有改善家兔血流狀態(tài)、延長小鼠及家蠶壽命的藥理作用［9，23］。目前關(guān)于短柄五加的化學(xué)成分有較多深入研究，但對其喂養(yǎng)90 天的試驗鮮有報道，本研究對短柄五加進(jìn)行90 天喂養(yǎng)試驗，旨在了解較長時間服用短柄五加的安全性，為保護(hù)及合理開發(fā)利用短柄五加提供評價依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 短柄五加由隴東學(xué)院/甘肅省高校隴東生物資源保護(hù)與利用省級重點實驗室提供。加工成固體淺棕色粉末。人體日推薦量為2 g/60 kg（體質(zhì)量）。

1.2 主要試劑與儀器BC-5000 VET 型全自動動物血液細(xì)胞分析儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）；BS-400 型全自動血液生化分析儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）；TP1020型全自動組織處理器、ST5010 型自動染色機(jī)（徠卡公司）等。

1.3 動物SPF 級SD 大鼠購于蘭州大學(xué)實驗動物中心，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（甘）2018-0001。實驗動物飼料（北京科奧協(xié)力飼料有限公司，質(zhì)量合格證號：196335）。大鼠飼養(yǎng)環(huán)境為SPF 級，室溫（22±2）℃，相對濕度40%～55%，實驗動物使用許可證號：SYXK（甘）2018-0004。實驗動物在試驗前均適應(yīng)性喂養(yǎng)3天。

1.4 方法

1.4.1 受試物配置 恒溫水浴鍋調(diào)節(jié)至80～90 ℃，整個提取過程水溫保持不變。稱取受試物340 g，加入80～90 ℃蒸餾水3400 mL，放入水浴鍋中提取30 min。然后將提取液全部傾出，再加入已預(yù)熱的蒸餾水3400 mL，再提取1 次。將2 次提取液混合，濃縮至340 mL，此時受試物提取液濃度為1.00 g/mL，冰箱保存，每周配制1次。

1.4.2 動物分組及給藥 體質(zhì)量65～80 g 大鼠80 只，隨機(jī)分為4 組，每組20 只，雌雄各半，單籠喂養(yǎng)。設(shè)低、中、高3個劑量組（4.3、8.5、17.0 g/kg（體質(zhì)量）和一個陰性對照組，低、中、高劑量組分別相當(dāng)于人群推薦日攝入短柄五加量的129、258、516 倍，陰性對照組予等容量蒸餾水。各劑量組大鼠均按1.0 mL/100 g（體質(zhì)量）灌胃。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 16 軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料以表示，方差齊時采用方差分析；方差不齊，變量轉(zhuǎn)換后仍方差不齊，采用秩和檢驗；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠一般表現(xiàn)試驗過程中大鼠毛發(fā)正常，無異常行為表現(xiàn)，無死亡。

2.2 大鼠體質(zhì)量、總進(jìn)食量及總食物利用率各劑量組大鼠體質(zhì)量、總進(jìn)食量、總食物利用率與陰性對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 各組大鼠體質(zhì)量增加及總食物利用率比較（）

2.3 血液學(xué)檢查

2.3.1 血常規(guī) 試驗中期低劑量組雌性大鼠的紅細(xì)胞(red blood cell，RBC)、單核細(xì)胞(monocyte，M)計數(shù)均高于陰性對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），中劑量組雌性動物紅細(xì)胞(red blood cell，RBC)、白細(xì)胞(white blood cell，WBC)、淋巴細(xì)胞(lymphocyte，LC)、嗜中性粒細(xì)胞（neutrophil，PMN)和M計數(shù)均高于陰性對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；末期低、中劑量組雌性動物WBC、LC、PMN、嗜酸性粒細(xì)胞（eosinophil，EOS)高于陰性對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），中劑量組雌性動物M 高于陰性對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），但均在正常值范圍內(nèi)，故無生物學(xué)意義。其余各項指標(biāo)與陰性對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。試驗中、末期雄性大鼠各劑量組各指標(biāo)與陰性對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表2—3。

表2 各組大鼠試驗中期血常規(guī)（）

表2 各組大鼠試驗中期血常規(guī)（）

注：與陰性對照組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，但均無生物學(xué)意義

表3 各組大鼠試驗?zāi)┢谘Ｒ?guī)（）

表3 各組大鼠試驗?zāi)┢谘Ｒ?guī)（）

注：與陰性對照組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，但均無生物學(xué)意義

2.3.2 血液生化指標(biāo) 雌性大鼠高劑量組谷草轉(zhuǎn)氨酶(glutamic-oxalacetic transaminease，AST)、尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)、甘油三酯(triglyceride，TG)水平低于陰性對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），雄性大鼠低劑量組BUN、肌酐（creatinine，Cr）、中劑量組TG、總蛋白（total protein，TP）、高劑量組TP 值低于陰性對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），但均在正常值范圍內(nèi)，故無生物學(xué)意義。其余各項指標(biāo)與陰性對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表4。

表4 各組大鼠血液生化指標(biāo)（）

表4 各組大鼠血液生化指標(biāo)（）

注：與陰性對照組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，但均無生物學(xué)意義

2.4 臟器系數(shù)及病理組織檢查經(jīng)口連續(xù)給予不同劑量受試物90 天后經(jīng)大體解剖，各劑量組大鼠肝、脾、腎、睪丸的質(zhì)量和臟/體比值與陰性對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），且均在正常值范圍內(nèi)。經(jīng)肉眼觀察與顯微鏡下觀察，各劑量組與陰性對照組大鼠主要臟器的外觀形態(tài)、表面色澤、輪廓體積、位置、臟器結(jié)構(gòu)與細(xì)胞內(nèi)容物等均未見異常病理改變。

3 討論

按4.3、8.5、17.0 g/kg（體質(zhì)量）連續(xù)灌胃大鼠短柄五加90 天，大鼠一般狀況未見明顯異常；體質(zhì)量、總攝食及總食物利用率比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義；血液學(xué)某些指標(biāo)高于或低于陰性對照組，但均在實驗室正常值參考范圍內(nèi)，并且無劑量反應(yīng)關(guān)系；動物解剖后臟/體比值各組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，病理組織學(xué)未見病變。

綜上所述，短柄五加喂養(yǎng)大鼠90 天，觀察到的無害作用劑量最大為17.0 g/kg（體質(zhì)量），本研究可為短柄五加長期服用及推廣應(yīng)用提供實驗依據(jù)。