三種動(dòng)物體虱玻片標(biāo)本制作及其種類鑒定

宋 靜，陳曉曉，梁高星，宋軍科*

(1.陜西省榆林市吳堡縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，陜西 吳堡 718200；2.西北農(nóng)林科技大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，陜西 楊凌 712100)

虱是哺乳動(dòng)物及鳥類動(dòng)物體表的永久性寄生蟲，常具有嚴(yán)格的宿主特異性，宿主被感染后可造成慢性皮炎，出現(xiàn)持續(xù)性地瘙癢、摩擦和啃咬皮毛等臨床特征，甚至導(dǎo)致寄生部位的皮膚破損，從而產(chǎn)生繼發(fā)性感染。此外，虱還可以傳播某些疾病，例如人虱能傳播多斑疹傷寒、鼠虱傳播地方性斑疹傷寒、還有一些虱類可傳播非洲及歐洲回歸熱等。因此，在臨床中對(duì)由虱類寄生引起的虱病進(jìn)行準(zhǔn)確診斷及防治，顯得尤為重要。目前一般是以其形態(tài)學(xué)特征為依據(jù)對(duì)虱類進(jìn)行種屬鑒定，這就需要檢測(cè)人員對(duì)虱類寄生蟲的形態(tài)結(jié)構(gòu)有清楚的認(rèn)識(shí)。

玻片標(biāo)本是寄生蟲教學(xué)和研究中不可或缺的重要材料，虱類玻片標(biāo)本按照保存時(shí)間長(zhǎng)短分為臨時(shí)玻片標(biāo)本和永久性玻片標(biāo)本。永久性玻片一般以加拿大或者中性樹膠封固，由于可以長(zhǎng)久保存，常用于存檔分類或者教學(xué)，制作步驟一般要經(jīng)過(guò)軟化、脫水、封片和干燥等過(guò)程，由于步驟繁雜，所用試劑多，常常讓基層科研工作者望而卻步。

本研究通過(guò)對(duì)寄生于山羊、羚牛和豬等3種動(dòng)物體表的虱類進(jìn)行玻片標(biāo)本制作，以期探索更加簡(jiǎn)便、高效、優(yōu)質(zhì)的標(biāo)本制作方法，為教學(xué)和科研提供一些基礎(chǔ)資料。同時(shí)，對(duì)寄生于山羊、羚牛和豬體表的虱類進(jìn)行形態(tài)學(xué)種類鑒定，也可以為虱病的臨床診斷及流行病學(xué)的調(diào)查提供參考數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 寄生蟲樣品

本研究所用的山羊、羚牛和豬體虱各20只均由西北農(nóng)林科技大學(xué)寄生蟲實(shí)驗(yàn)室采集并提供。

1.2 虱的采集與固定

用鑷子或者細(xì)刷子等從動(dòng)物的體表直接采集并分離虱子，將采集到的虱子盛放在安瓿瓶?jī)?nèi)保存。一般在采集到蟲體后，將蟲體放于陰涼干燥的地方2～3 d后，使用固定液(一般為10%甲醛溶液或者75%酒精)對(duì)蟲體進(jìn)行固定。

1.3 玻片標(biāo)本的制作

(1)將固定液中的蟲體放入5%氫氧化鈉或氫氧化鉀中水浴5～10 min(可加入少量甘油使煮后的蟲體更加柔軟)，水浴至蟲體稍微半透明即可。(2)將標(biāo)本從堿液中取出后置于蒸餾水中，浸泡5～24 h，使其體內(nèi)容物自然排出。可使用微針輕輕按摩蟲體，加快蟲體內(nèi)容物排出。(3)將經(jīng)過(guò)洗滌的蟲體放入蒸發(fā)皿中，然后加入染色液，經(jīng)過(guò)15～20 min后，先用清水沖洗掉蟲體表面和蒸發(fā)皿中的染液，再用75%的酒精對(duì)蟲體脫色30 min。(4)將處理的蟲體在濃度為30%、50%、70%、80%、85%、90%、95%和100%的酒精依次浸泡5～10 min，然后在100%酒精中加入二甲苯(1∶1)，并浸泡2 h，最后移入純二甲苯中浸泡1 h。(5)先在蓋玻片上滴加一滴中性樹膠，然后用挑蟲針將蟲體標(biāo)本挑到液滴上并小心移至載片中心，腹面向上，將載玻片靠近，盡量放低，接觸蓋玻片上的標(biāo)本后迅速翻轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)。(6)玻片制好后放在陰涼通風(fēng)干燥的地方干燥，注意干燥時(shí)不要疊放，避免玻片標(biāo)本相互溢出粘連。有條件的也可以將玻片放入45～50 ℃烘箱中烘干。

1.4 形態(tài)學(xué)鑒定

將干固的玻片標(biāo)本放在顯微鏡下觀察，進(jìn)行形態(tài)鑒定：觸角的節(jié)數(shù)、形狀以及是否隱藏或者外露；上顎水平或者垂直；爪的數(shù)目；前胸與后胸的形狀；中、后胸有無(wú)縫線分隔；頭部的形狀；腹部氣門的位置；下顎須的節(jié)數(shù)等。隨機(jī)挑選出3種動(dòng)物不同種虱各20只，測(cè)量蟲體長(zhǎng)、蟲體寬、頭長(zhǎng)、頭寬、前胸長(zhǎng)、前胸寬、后胸長(zhǎng)、后胸寬、腹長(zhǎng)和觸角長(zhǎng)等并記錄結(jié)果。

2 結(jié) 果

2.1 山羊虱形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果

山羊虱形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果顯示，蟲體分頭、胸、腹3部分，頭部窄長(zhǎng)，可見觸角1對(duì)，觸角由5節(jié)組成。頭部觸角前的距離和觸角間的距離大約相等。胸部近似矩形，前、中、后3對(duì)足分別位于前胸、中胸和后胸。第1對(duì)足比后2對(duì)足較小，其爪細(xì)而銳利；第2、3對(duì)足的爪則較粗大。足基部和胸部密切相聯(lián)，脛節(jié)發(fā)達(dá)，末端生有剛毛。腹呈橢圓形，上有許多剛毛。中央部較密集而短，兩側(cè)部較長(zhǎng)而疏，每節(jié)呈不規(guī)則的雙行排列，腹表面有鱗狀的紋理構(gòu)造，生殖器官位于體尾端(圖1)。通過(guò)對(duì)比發(fā)現(xiàn)與顎虱科(Linognathidae)顎虱屬()非洲顎虱()描述的一致，初步鑒定為非洲顎虱()。

圖1 非洲顎虱(L. africanus)的形態(tài)學(xué)特征(400×)

2.2 羚牛虱的形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果

羚牛虱形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果顯示，標(biāo)本中的蟲體頭、胸、腹3部分，頭部較大呈扁圓形，前段鈍圓，比胸部略寬，可見觸角1對(duì)，觸角較短，由3節(jié)組成。無(wú)觸須。觸角后無(wú)三角形突起。咀嚼式口器。胸部有前、中、后3對(duì)足，分別位于前胸、中胸和后胸。腹部由7節(jié)組成，生殖器官位于體尾端(圖2)。通過(guò)對(duì)比發(fā)現(xiàn)與于三科等描述的毛虱科(Trichoddectidae)毛虱屬()羚牛毛虱()形態(tài)一致，初步鑒定為羚牛毛虱()。

圖2 羚牛毛虱(D. budorcas)的形態(tài)學(xué)特征(100×)

2.3 豬虱形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果

豬虱玻片標(biāo)本形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果顯示，標(biāo)本中的蟲體分頭、胸、腹3部分，頭部可見觸角1對(duì)，觸角由5節(jié)組成。刺吸式口器。胸部有前、中、后3對(duì)足，分別位于前胸、中胸和后胸。胸板近梯形，前緣略內(nèi)凹，無(wú)明顯中央突，前側(cè)角鈍，后側(cè)角較尖細(xì)，后緣外凸。腹部由8節(jié)組成，生殖器官位于體尾端(圖3)。

圖3 豬血虱(H. suis)的形態(tài)學(xué)特征(40×)

通過(guò)對(duì)比發(fā)現(xiàn)與血虱科(Haematopinidae)血虱屬()豬血虱()描述的一致，初步鑒定為豬血虱()。

2.4 3種動(dòng)物體虱主要部位的長(zhǎng)度

3種動(dòng)物體虱標(biāo)本主要部位長(zhǎng)度測(cè)量結(jié)果見表1。結(jié)果顯示：山羊虱與顎虱科(Linognathidae)顎虱屬()非洲顎虱()描述的一致；羚牛虱與于三科等描述的毛虱科(Trichoddectidae)毛虱屬()羚牛毛虱()形態(tài)一致；豬虱與血虱科(Haematopinidae)血虱屬()豬血虱()描述的一致。

表1 3種寄生虱主要部位長(zhǎng)度測(cè)量結(jié)果

3 討 論

虱主要以宿主血液和毛發(fā)為食，其種類繁多，傳染性極強(qiáng)，而且常攜帶和傳播各種疾病，給人和各種動(dòng)物健康造成危害。因此，在臨床中對(duì)由虱類寄生引起的虱病進(jìn)行準(zhǔn)確的診斷及防治顯得尤為重要。形態(tài)學(xué)鑒定是虱類鑒定的重要方法，它是以虱類的形態(tài)學(xué)特征為依據(jù)，一個(gè)不完整的標(biāo)本不僅給蟲種的鑒定帶來(lái)一定的困難，甚至失去原有的鑒定價(jià)值，所以在進(jìn)行玻片標(biāo)本制作時(shí)要盡量使蟲體結(jié)構(gòu)完整、清晰。

本研究通過(guò)形態(tài)學(xué)方法對(duì)采集到的山羊、羚牛和豬3種動(dòng)物體表寄生的虱進(jìn)行玻片標(biāo)本制作和種類鑒定，結(jié)果表明本研究中寄生于山羊體表的為非洲顎虱()，寄生于羚牛體表的為羚牛毛虱()，寄生于豬體表的為豬血虱()。此外，研究進(jìn)一步通過(guò)顯微鏡觀察對(duì)蟲體、胸、腹及觸角等主要部位進(jìn)行長(zhǎng)度測(cè)量和比較分析，發(fā)現(xiàn)3種寄生于不同動(dòng)物體表的虱具有明顯的形態(tài)學(xué)差異，比如，豬血虱與非洲顎虱和羚牛毛虱相比體態(tài)更大，豬血虱的頭部的長(zhǎng)寬比為2.40(1.25/0.52)，與非洲顎虱的1.38(0.47/0.34)和羚牛毛虱的1.02(0.61/0.60)頭部的長(zhǎng)寬比相比，豬血虱不僅擁有更大的頭部，而且與非洲顎虱和羚牛毛虱相比更加狹長(zhǎng)。細(xì)微的形態(tài)結(jié)構(gòu)對(duì)比基于理想的玻片染色標(biāo)本，這就要求在標(biāo)本制作的過(guò)程中盡量避免對(duì)樣品的損害?；诖耍狙芯吭诩纳谰眯圆Ｆ瑯?biāo)本制作的過(guò)程中注意了很多細(xì)節(jié)，比如，在軟化虱子時(shí)水浴溫度不易太高(70 ℃～85 ℃)，且軟化時(shí)間也不宜過(guò)長(zhǎng)，否則蟲體部分結(jié)構(gòu)就會(huì)變得模糊，不利于標(biāo)本的觀察；在脫水時(shí)可以用吸管將蒸發(fā)皿內(nèi)的酒精吸走，然后再加入新的酒精，這樣避免了標(biāo)本的多次移動(dòng)，利于保持標(biāo)本結(jié)構(gòu)的完整性。有研究表明，在封片之前增加一個(gè)預(yù)封步驟，可使標(biāo)本在蓋片時(shí)不易移動(dòng)位置，使標(biāo)本的特征清晰可見。用于制作的玻片也可能影響玻片標(biāo)本的質(zhì)量，因此要在使用前要進(jìn)行清洗，先用洗衣粉水清洗，然后用鹽酸浸泡，再用5%酒精擦拭，然后用蒸餾水沖洗。這樣可以清除玻片表面的雜質(zhì)，使做出來(lái)的片子干凈，易于觀察。

4 小 結(jié)

本研究通過(guò)對(duì)虱形態(tài)的觀察和各器官的測(cè)量，參照相關(guān)文獻(xiàn)對(duì)對(duì)寄生于山羊、羚牛和豬3種動(dòng)物的體虱作出初步的鑒定，該研究結(jié)果可以為臨床檢測(cè)并鑒定虱的種類，以及相關(guān)教學(xué)和科研提供一些參考資料。