醫(yī)院制劑滑膜膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升研究*

趙穎林 馮小燕 王顯著 馬強(qiáng) 賀麟桀 王衛(wèi)鋒

(1.西安市中醫(yī)醫(yī)院，陜西 西安 710021；2.陜西省中醫(yī)藥研究院，陜西 西安 710003)

滑膜膏是我院臨床使用的外用中藥復(fù)方制劑，制備工藝簡(jiǎn)單，使用方便，具有清熱涼血，化瘀止痛等作用，可用于治療骨關(guān)節(jié)腫脹、疼痛等癥狀，在膝關(guān)節(jié)滑膜炎治療方面有獨(dú)特療效[1-8]，臨床應(yīng)用30年未發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng)。該制劑由梔子，黃連，大黃，蒲公英等藥味組成，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅有性狀和顯微鑒別項(xiàng)，不能很好地控制本品質(zhì)量，筆者參考相關(guān)文獻(xiàn)[9-11]，建立了方中黃連、大黃和蒲公英的薄層鑒別方法，并采用超高液相色譜法對(duì)君藥梔子中的梔子苷[12-16]進(jìn)行了含量測(cè)定的方法學(xué)研究，其中梔子苷具有鎮(zhèn)痛、抗炎、抗內(nèi)毒素、保肝利膽、腦缺血保護(hù)等作用[17-19]，因此，研究并制定該制劑中梔子苷的含量對(duì)保證臨床療效具有重要作用。本文旨在完善該制劑的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，為制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Waters Acquity H-CLASS型超高效液相色譜儀(UPLC)(EmpowerTM3色譜工作站、PDA檢測(cè)器)；ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱(2.1 mm×50 mm，1.7 μm)；BT25S電子分析天平(d=0.01 mg；BS210S，d=0.1 mg，北京賽多利斯天平有限公司)；FOEA26810D純水機(jī)(德國(guó)Millipore公司)；KH-300DE型數(shù)控超聲波清洗機(jī)(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)。

1.2試藥 梔子苷(批號(hào)：110749-201718，供含量測(cè)定用)、黃連對(duì)照藥材(批號(hào)：120913-201611，供鑒別用)、大黃對(duì)照藥材(批號(hào)：120902-201311，供鑒別用)、蒲公英對(duì)照藥材(批號(hào)：121195-201503，供鑒別用)均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；滑膜膏(制劑批準(zhǔn)文號(hào)：陜藥制字Z20170056；生產(chǎn)批號(hào)：20190530、20190620、20191018，按照注冊(cè)批準(zhǔn)工藝經(jīng)我院自行生產(chǎn))；液相用試劑(色譜純，德國(guó)Merck公司)；水為超純水；其它試劑均為分析純，購(gòu)自西安化學(xué)試劑廠。

2 方法與結(jié)果

2.1薄層色譜鑒別

2.1.1黃連的薄層色譜鑒別 取本品3 g，加甲醇20 mL，超聲提取15 min，濾過，濾液濃縮至1 mL，作為供試品溶液。另取黃連對(duì)照藥材0.03 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取鹽酸小檗堿對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。另取按處方比例和制備工藝制備除去黃連的陰性樣品，同供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0502)試驗(yàn)，吸取上述溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇-水(6∶3∶2∶1.5∶0.3)為展開劑，置用濃氨試液預(yù)平衡15 min的層析缸內(nèi)，展開8 cm,取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照樣品無干擾(圖1)。

1.鹽酸小檗堿；2.黃連對(duì)照藥材；3～5.樣品；6.陰性對(duì)照

2.1.2蒲公英的薄層色譜鑒別 取本品3 g，加甲醇20 mL，加熱回流30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，濾過，濾液用乙酸乙酯振搖提取2次，每次10 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取蒲公英對(duì)照藥材0.1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。另取按處方的比例和制備工藝制備除去蒲公英的陰性樣品，同供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液，照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0502)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各6 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸丁酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)，陰性對(duì)照樣品無干擾(圖2)。

1～3.樣品；4.陰性對(duì)照；5.蒲公英對(duì)照藥材

2.1.3大黃的薄層色譜鑒別 取本品3 g，加甲醇20 mL，超聲提取30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，再加鹽酸1 mL，加熱回流30 min，立即冷卻，用乙醚分2次提取，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)尤燃淄? mL使溶解，作為供試品溶液。另分別取大黃素、大黃酸對(duì)照品，分別加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。另取按處方的比例和制備工藝制備除去大黃的陰性樣品，同供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0502)試驗(yàn)，吸取上述溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸氣熏至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的紅色斑點(diǎn)，陰性樣品無干擾(圖3)。

1～3.樣品；4.大黃素；5.大黃酸；6.陰性對(duì)照

2.2含量測(cè)定

2.2.1色譜條件 色譜柱：C18色譜柱；以乙腈-水(15∶85)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為238 nm；流速：0.3 mL·min-1；柱溫：室溫；理論塔板數(shù)按梔子苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500[20]。

2.2.2對(duì)照品溶液的制備 取梔子苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.0158 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.3供試品溶液的制備 取本品約1.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理(功率120 W，頻率40 kHz)45 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4專屬性實(shí)驗(yàn) 按處方比例稱取缺梔子的其他藥材，模擬滑膜膏的制備工藝，制備梔子的陰性對(duì)照品，再按供試品溶液制備方法制得空白樣品溶液。取梔子苷對(duì)照品溶液1.0 μL、供試品溶液及空白樣品溶液各1.0 μL，依法測(cè)定。結(jié)果表明，空白樣品中無干擾，說明此法專屬性強(qiáng)，靈敏度好(見圖4A、圖4B、圖4C)。

A.梔子苷對(duì)照品；B.滑膜膏供試品；C.滑膜膏陰性

2.2.5線性范圍考察 分別精密吸取0.0158 mg·mL-1的梔子苷對(duì)照品溶液0.2，0.4，0.8，1.0和2.0 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，對(duì)進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=6657156.92X-1326.11(r=1)。結(jié)果表明，梔子苷對(duì)照品在0.00316 μg～0.0316 μg范圍內(nèi)，峰面積值與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。

2.2.6精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液1.0 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜峰面積及計(jì)算RSD，結(jié)果表明，RSD=0.22%，儀器精密度良好。

2.2.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取供試品溶液1.0 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣間隔2 h，測(cè)定峰面積。結(jié)果表明，梔子苷RSD=1.32%，供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.8重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 按擬定的含量測(cè)定條件及方法，取同一批號(hào)樣品，平行稱取6份進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果表明，平均含量為0.5414 mg·g-1，RSD=1.49%，表明重復(fù)性良好。

2.2.9加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取已知平均含量的滑膜軟膏(梔子苷0.5414 mg·g-1)樣品6份，每份0.75 g，精密稱定，精密加入一定量的梔子苷對(duì)照品溶液，按標(biāo)準(zhǔn)正文中梔子苷含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。計(jì)算公式為：

×100%

表1 梔子苷加樣回收率考察結(jié)果

2.2.10樣品含量測(cè)定 分別取滑膜膏三批樣品各約1.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理(功率120 W，頻率40 kHz)45 min，放冷，加再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，測(cè)定含量，結(jié)果見表2。

表2 滑膜膏中梔子苷的含量測(cè)定

2.2.11含量限度制定 中藥材隨其產(chǎn)地、采收時(shí)間、批次等的不同，有效成分含量差別較大。因此，按照中藥新藥含量測(cè)定限度的規(guī)定，最低限量以三批中試產(chǎn)品平均含量的80%來定，即本品每1 g含梔子以梔子苷(C17H24O10)計(jì)，不得少于0.44 mg。

3 討論

傳統(tǒng)醫(yī)院制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求較低，隨著國(guó)家、省市管理部門對(duì)醫(yī)院制劑越來越重視，管理越來越嚴(yán)格，我們也將以相關(guān)政策法規(guī)的要求為契機(jī)，全面提升我院制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。特色醫(yī)院制劑在醫(yī)療服務(wù)中起著舉足輕重的作用，其質(zhì)量對(duì)于臨床用藥的安全有效亦至關(guān)重要[21]。因此，提升醫(yī)院制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為傳承和推廣特色制劑，促進(jìn)醫(yī)院制劑的發(fā)展、藥學(xué)科研、教學(xué)發(fā)展，保障患者健康等方面都有積極的意義[22-25]。

本制劑處方由多味中藥材組成，我們對(duì)方中的主要藥味黃連，大黃，蒲公英，姜黃，血竭，白芷等進(jìn)行了薄層色譜鑒別研究，其中黃連，大黃，蒲公英薄層色譜條件成熟、穩(wěn)定，能夠檢出相關(guān)的薄層色譜特征，專屬性強(qiáng)。白芷，血竭，姜黃選用多種方法進(jìn)行薄層色譜鑒別條件的摸索，結(jié)果分離效果不佳，本文不作報(bào)道。超高效液相色譜法測(cè)定本品中的梔子苷含量，方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于本品的內(nèi)在質(zhì)量控制。

與本方治療目的相關(guān)的藥效成分含有多種，因此制定多種有效成分同時(shí)進(jìn)行質(zhì)量控制的方法更能全面反映該制劑的療效情況，我們將在后續(xù)進(jìn)一步完善研究方法，陸續(xù)報(bào)道。