舒悠顆粒質(zhì)量控制研究*

屈小娟 田元 于吉臣 劉建書 劉玉鳳 趙玉珍 馮會(huì)迎 韓曉玲**

(1.西安力邦制藥有限公司，陜西 西安 710000；2.陜西功能食品工程中心有限公司，陜西 西安 710000；3.楊凌職業(yè)技術(shù)學(xué)院，陜西 楊凌 712100)

舒悠顆粒是由西安力邦制藥有限公司與陜西功能食品工程中心有限公司合作開發(fā)的具有通便功能的保健食品。本產(chǎn)品選用質(zhì)潤(rùn)多脂、潤(rùn)腸通便作用的火麻仁[1]和益氣固、補(bǔ)氣升陽(yáng)作用的黃芪[2]，輔以當(dāng)歸[3]、麥冬[4]補(bǔ)血活血、潤(rùn)腸通便，枳實(shí)[5]行氣通腑、促進(jìn)腸蠕動(dòng)、弛緩腸平滑肌，沙棘[6]消食化滯、潤(rùn)腸通便，諸藥并用，融潤(rùn)腸通便、補(bǔ)氣固表、破氣消積為一體，達(dá)到通便的目的。

便秘是指糞便在腸內(nèi)滯留過久導(dǎo)致的秘結(jié)不通，排便周期延長(zhǎng)，糞質(zhì)干結(jié)，排出困難的情況[7]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，便秘與胃、脾、腎等臟腑的功能失養(yǎng)，大腸傳導(dǎo)失司相關(guān)[8]，脾胃是全身氣機(jī)升降的樞紐，調(diào)節(jié)支配消化系統(tǒng)，脾虛導(dǎo)致氣行無力，無法驅(qū)動(dòng)大小腸有效運(yùn)動(dòng)，導(dǎo)致便秘[9]。火麻仁能刺激腸粘膜分泌黏度，使腸道蠕動(dòng)加快，減少大腸吸收水分[10]，黃芪促進(jìn)機(jī)體新陳代謝，增強(qiáng)小腸運(yùn)動(dòng)和平滑肌緊張度[11]；當(dāng)歸明顯改善血虛便秘癥候，增加結(jié)腸和糞便含水量、軟化糞便、改善結(jié)腸粘液的分泌，促進(jìn)糞便排出[12-13]；麥冬富含粘多糖，可促進(jìn)大腸黏液的分泌，均具有潤(rùn)腸通便、緩解便秘的作用。另有研究[14]表明，沙棘中富含多糖和黃酮，而多糖和黃酮類物質(zhì)具有明顯的通便潤(rùn)腸作用。

本研究采用薄層色譜法(TLC)定性鑒別了舒悠顆粒中的當(dāng)歸、麥冬，采用紫外-可見分光光度法(UV-Vis)測(cè)定粗多糖和總黃酮的含量，采用高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定黃芪甲苷的含量，以期控制舒悠顆粒的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilent 1260高效液相色譜儀(安捷倫科技有限公司)；TU-1810紫外-可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；BSA224S電子天平(德國(guó)賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；數(shù)顯水浴鍋(北京科偉永興儀器有限公司)；3-30K離心機(jī)(德國(guó)sigma)；KQ5200DE數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；WFH-203C紫外分析儀(上海精科實(shí)業(yè)有限公司)。

1.2試藥 舒悠顆粒(批號(hào)：20171001、20171002、20171003，規(guī)格：3 g/袋)；陰性樣品1(不含當(dāng)歸)、陰性樣品2(不含麥冬)，均由陜西功能食品工程技術(shù)中心按舒悠顆粒的處方與制備工藝制得；當(dāng)歸對(duì)照藥材(批號(hào)：120927-201617)、麥冬對(duì)照藥材(批號(hào)：121013-201711)、黃芪甲苷對(duì)照品(批號(hào)：110781-201717，純度：96.9%)、D-葡萄糖對(duì)照品(批號(hào)：110833-201707，純度：99.9%)、蘆丁對(duì)照品(批號(hào)：100080-201610，純度：92.6%)均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；硅膠G薄層板、硅膠GF254薄層板均購(gòu)自青島海洋化工廠有限公司；乙腈為色譜純，水為純化水，其余試劑均為分析純。

2 薄層色譜鑒別

2.1當(dāng)歸的薄層色譜鑒別 取本品粉末1.3 g，加乙醚50 mL，超聲10 min，濾過，濾液蒸干，加乙醇1 mL溶解，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸對(duì)照藥材和當(dāng)歸藥材各0.5 g，加乙醚20 mL，超聲10 min，濾過，濾液蒸干，加乙醇1 mL溶解，分別作為當(dāng)歸對(duì)照藥材溶液和當(dāng)歸藥材溶液。按舒悠顆粒處方和工藝制備陰性樣品1(不含當(dāng)歸)，照供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。取上述四種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(4∶1∶0.1)為展開劑，預(yù)飽和30 min，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。結(jié)果，供試品色譜中，在與當(dāng)歸對(duì)照藥材及當(dāng)歸藥材在相應(yīng)的位置顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，專屬性好，見圖1。

1.當(dāng)歸對(duì)照藥材； 2.當(dāng)歸藥材； 3.20171001號(hào)樣品；

2.2麥冬的薄層色譜鑒別 取本品5 g，研成細(xì)粉，加水30 mL與鹽酸3 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液用乙醚25 mL振搖提取，蒸干乙醚，加三氯甲烷2 mL溶解，作為供試品溶液。另取麥冬對(duì)照藥材和麥冬藥材各1 g，同法制成麥冬對(duì)照藥材溶液和麥冬藥材溶液。按舒悠顆粒處方和工藝制備陰性樣品2(不含麥冬)，照供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。分別取上述四種溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(1∶1)為展開劑，預(yù)飽和30 min，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視。結(jié)果，供試品色譜中，在與麥冬對(duì)照藥材及麥冬藥材在相應(yīng)位置顯相同顏色的熒光淬滅斑點(diǎn)，專屬性好，見圖2。

1.麥冬對(duì)照藥材； 2.麥冬藥材； 3.20171001號(hào)樣品；

3 含量測(cè)定

3.1黃芪甲苷含量測(cè)定

3.1.1色譜條件 色譜柱：漢邦C18色譜柱(4.6×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-水(32∶68)；流速：1 mL·min-1；ELSD檢測(cè)條件：漂移管溫度：60 ℃；載氣流量：1.6 L·min-1；增益：3.0。

3.1.2對(duì)照品溶液的制備 取黃芪甲苷對(duì)照品適量,精密稱定，加80%甲醇溶解，稀釋定容于5 mL量瓶中，混勻，配制成每1 mL含4.8489 mg黃芪甲苷的溶液，作為對(duì)照貯備液。精密吸取對(duì)照貯備液(4.8489 mg·mL-1)2.5 mL，置25 mL容量瓶中，用80%甲醇定容，搖勻，配制成每1 mL含484.89 μg黃芪甲苷的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.1.3供試品溶液的制備 取本品細(xì)粉約6 g，精密稱定，置100 mL錐形瓶中，精密加入甲醇60 mL，超聲(功率600 W、溫度50 ℃)30 min，3000×g離心5 min。上清液濾過(0.45 μm微孔濾膜)；濾渣用甲醇洗滌2次，每次30 mL，超聲5 min，離心5 min，濾過，合并濾液，減壓蒸干，加氨水溶液(10%)20 mL溶解，放置10 min，不時(shí)振搖，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇萃取3次(30 mL、20 mL、20 mL)。合并萃取液，減壓蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，加80%甲醇定容，搖勻，即得供試品溶液。

3.1.4陰性樣品溶液的制備 按處方比例，取除去黃芪的其他藥材，按照制劑工藝制成陰性樣品，按照3.1.3項(xiàng)下供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液。

3.1.5測(cè)定法 分別精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液10 μL、20 μL，供試品溶液20 μL，注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算。

3.1.6專屬性 精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和缺黃芪陰性對(duì)照樣品溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。對(duì)照品和供試品溶液里被測(cè)組分均能達(dá)到基線分離，且峰型對(duì)稱，缺黃芪陰性對(duì)照樣品中其他組分均不干擾黃芪甲苷測(cè)定，見圖3。

A.黃芪甲苷對(duì)照品溶液；B.供試品溶液；C.缺黃芪陰性樣品

3.1.7線性范圍 精密吸取標(biāo)準(zhǔn)貯備液0.5 mL、1.5 mL、2.5 mL、3.75 mL、5 mL、7.5 mL，分別置25 mL量瓶中，用80%甲醇定容，搖勻。分別精密吸取20μL，注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。以對(duì)照品濃度的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，以黃芪甲苷峰面積的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，黃芪甲苷在96.98～1454.66 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)呈良好線性，回歸方程為Y=1.761X-2.0411(r=0.9997)。

3.1.8定量限和檢出限 以信噪比為3∶1對(duì)應(yīng)的濃度為檢出限，得黃芪甲苷檢出限為40.03 μg·mL-1；以信噪比為10∶1對(duì)應(yīng)的濃度為定量限，得黃芪甲苷定量限為120.09 μg·mL-1。

3.1.9精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取3.1.6項(xiàng)下線性測(cè)定中標(biāo)4溶液20 μL，注入液相色譜儀中，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。黃芪甲苷峰面積RSD為2.38%(n=6)，表明精密度良好。

3.1.10重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取本品，按3.1.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，共6份，分別精密吸取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，黃芪甲苷色譜峰面積RSD為1.16%，表明該方法重復(fù)性良好。

3.1.11穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取本品，按3.1.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別在0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h時(shí)進(jìn)樣20 μL，記錄色譜圖。黃芪甲苷色譜峰面積RSD為0.46%，表明室溫條件下供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.1.12回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取本品(批號(hào)：20171001，黃芪甲苷含量為0.7136 mg·g-1)3 g，共9份，平均分為3組，每組分別加入濃度為4.8489 mg·mL-1的黃芪甲苷對(duì)照貯備液0.25 mL、0.5 mL、0.75 mL，按3.1.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別精密吸取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計(jì)算回收率。平均回收率為95.55%，RSD為1.76%(n=6)，回收率良好(見表1)。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1.13樣品含量測(cè)定 取3批舒悠顆粒樣品(批號(hào)為20171001，20171002和20171003)6 g，各兩份，精密稱定，照3.3.1項(xiàng)下操作，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。3批舒悠顆粒中黃芪甲苷含量分別為0.7107 mg·g-1、0.7041 mg·g-1、0.7059 mg·g-1(見表2)。

表2 黃芪甲苷含量測(cè)定結(jié)果

3.2粗多糖含量測(cè)定

3.2.1供試品溶液的制備 取本品0.5 g，精密稱定，加乙醚100 mL，40 ℃加熱回流1 h，靜置，放冷，小心傾去乙醚，殘?jiān)谒∩险舾伞＜?0%乙醇100 mL，80 ℃加熱回流1 h，趁熱濾過，濾渣與濾器用熱80%乙醇30 mL分次洗滌，濾渣連同濾紙置燒瓶中，加水150 mL，100 ℃加熱回流2 h。趁熱濾過，用少量熱水洗滌濾器，合并濾液和洗液。加糖化酶30 mg，于60 ℃、pH4.5條件下酶解1.5 h，小心加熱至沸，冷卻，過濾，濾液加水至150 mL，取30 mL，置250 mL錐形瓶，加無水乙醇200 mL，混勻，于4 ℃冰箱靜置4 h以上，6000 rpm離心15 min，棄去上清液，殘?jiān)盟芙?、定容?0 mL，混勻。

3.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取D-葡萄糖對(duì)照品10.01 mg，置100 mL容量瓶中，加水適量溶解，稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL中含D-葡萄糖0.10 mg的溶液，作為葡萄糖對(duì)照貯備液。精密量取葡萄糖對(duì)照貯備液0 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL，置10 mL具塞試管中，加水至2.0 mL，精密加入5%苯酚溶液1 mL，搖勻，迅速精密加入硫酸5 mL，搖勻，放置10 min，置100 ℃水浴中2 min，取出，迅速冷卻至室溫，以相應(yīng)試劑為空白，于485 nm處測(cè)定吸光度。以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，葡萄糖的濃度(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得線性方程。

3.2.3測(cè)定法 精密量取供試品溶液1 mL，置10 mL具塞試管中，加水1 mL，照3.2.2項(xiàng)下自“精密加入5%苯酚溶液1 mL”起，至“于485 nm處測(cè)定吸光度”操作。由線性方法計(jì)算供試品溶液的濃度C，計(jì)算樣品中粗多糖含量。

3.2.4線性范圍 照3.2.2項(xiàng)下操作。葡萄糖在0～15.00 μg·mL-1的濃度范圍內(nèi)呈良好線性，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：A=0.0466×C+0.0068，相關(guān)系數(shù)r=0.9996。

3.2.5檢出限 以20次空白測(cè)定值的3.3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差除以標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率(即LOD=3.3δ/S)計(jì)算，粗多糖的檢出限為0.4 μg·g-1，表明該法檢出限低，靈敏度高。

3.2.6精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.10 mg·mL-1)0.6 mL，加水1.4 mL，共6份，照3.2.2項(xiàng)下自“精密加入5%苯酚溶液1 mL”起，至“于485 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度”操作。分別測(cè)定，葡萄糖吸光度RSD為0.10%(n=6)，表明儀器精密度良好。

3.2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取本品0.5 g，共6份，按3.2.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別測(cè)定。粗多糖平均含量為33.634 mg·g-1，RSD為1.96%，表明本方法重復(fù)性好。

3.2.8穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取供試品溶液，分別于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h時(shí)按3.2.3項(xiàng)下測(cè)定，記錄吸光度。吸光度的RSD為1.64%，表明室溫條件下供試品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.2.9回收率實(shí)驗(yàn) 取本品(批號(hào)：20171001，粗多糖含量為33.634 mg·g-1)0.25 g，精密稱定，共9份，平均分為3組，每組分別加入濃度為1.00 mg·mL-1的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯備液4 mL、8 mL、12 mL，照3.2.1及3.2.3項(xiàng)下操作，記錄吸光度，計(jì)算回收率。平均回收率為99.04%，RSD為1.35%(n=6)，表明回收率良好(見表3)。

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果

3.2.10樣品含量測(cè)定 取3批舒悠顆粒樣品(批號(hào)為20171001，20171002和20171003)0.5 g，各兩份，精密稱定，照3.2.1及3.2.3項(xiàng)下操作，記錄吸光度。3批舒悠顆粒樣品中粗多糖含量分別為33.749 mg·g-1、35.105 mg·g-1、33.302 mg·g-1(見表4)。

表4 粗多糖含量測(cè)定結(jié)果

3.3總黃酮含量測(cè)定

3.3.1供試品溶液的制備 取本品0.25 g，精密稱定，加乙醇定容至25 mL，搖勻，超聲提取20 min，靜置，取上清液1.0 mL于蒸發(fā)皿中，加聚酰胺粉1 g，于水浴上揮去乙醇，轉(zhuǎn)入層析柱。加石油醚(30～60 ℃)20 mL淋洗，棄去淋洗液，加甲醇20 mL洗脫，收集洗脫液并定容至25 mL，混勻。

3.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取蘆丁對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解，定容至100 mL，搖勻，制成每1 mL含蘆丁47.60 μg的溶液，作為蘆丁對(duì)照貯備液。取蘆丁對(duì)照貯備液0 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL于10 mL比色管中，加甲醇至刻度，搖勻，于360 nm處測(cè)定吸光度。以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，蘆丁的濃度(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。

3.3.3測(cè)定法 取供試品溶液，于360 nm處測(cè)定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算總黃酮含量。

3.3.4線性范圍 照3.3.2項(xiàng)下操作。蘆丁在0～23.80 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)呈良好線性，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：A=0.0261×C+0.0006，相關(guān)系數(shù)r=0.9994。

3.3.5檢出限 以20次空白值的3.3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差除以標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率(即LOD=3.3δ/S)計(jì)算，總黃酮的檢出限為1.8 μg·g-1，表明該法檢出限低，靈敏度高。

3.3.6精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取蘆丁對(duì)照貯備液(47.60 μg·mL-1)3.0 mL于10 mL比色管中，加甲醇至刻度，搖勻，于360 nm處測(cè)定吸光度。蘆丁吸光度RSD為0.11%(n=6)，表明該法精密度良好。

3.3.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密稱取本品0.25 g，共6份，照3.3.1及3.3.3項(xiàng)下操作，分別測(cè)定吸光度，總黃酮RSD為2.14%，表明該法重復(fù)性良好。

3.3.8穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取供試品溶液，分別于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h時(shí)照3.3.3項(xiàng)下操作，記錄吸光度。吸光度RSD為2.01%，表明室溫條件下供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.3.9回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取本品(批號(hào)：20171001，總黃酮含量為1.6476 mg·g-1)0.2 g，共9份，各置25 mL量瓶中，平均分為3組，每組分別加入濃度為0.20 mg·mL-1的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)貯備液0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL，照3.3.1及3.3.3項(xiàng)下操作，記錄吸光度，計(jì)算回收率。平均回收率為98.47%，RSD為1.83%(n=6)，表明該方法回收率良好(見表5)。

表5 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.3.10樣品含量測(cè)定 精密稱取3批舒悠顆粒樣品(批號(hào)：20171001，20171002，20171003)0.25 g，各兩份，精密稱定，照3.3.1及3.3.3項(xiàng)下操作，記錄吸光度。3批舒悠顆粒樣品中總黃酮含量分別為1.6042 mg·g-1、1.5955 mg·g-1、1.5837 mg·g-1(見表6)。

表6 總黃酮含量測(cè)定結(jié)果

4 討論與小結(jié)

4.1薄層色譜分析

4.1.1當(dāng)歸的薄層色譜鑒別 本研究參照《中國(guó)藥典》2015年版一部[15]當(dāng)歸項(xiàng)下薄層色譜方法，以正己烷-乙酸乙酯(4∶1)為展開劑試驗(yàn)，薄層色譜中舒悠顆粒樣品未顯示熒光斑點(diǎn)；參考相關(guān)文獻(xiàn)和資料[16-17]，對(duì)展開劑進(jìn)行了優(yōu)化研究，分別采用甲苯-乙酸乙酯-甲酸(4∶1∶0.1)、正己烷-乙酸乙酯(9∶1)、石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(19∶1)和甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶10∶1)等展開劑實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，展開劑為甲苯-乙酸乙酯-甲酸(4∶1∶0.1)時(shí)，在當(dāng)歸對(duì)照藥材及當(dāng)歸藥材相對(duì)應(yīng)的位置上，舒悠顆粒樣品的薄層色譜圖顯現(xiàn)清晰的熒光斑點(diǎn)，且與其它斑點(diǎn)分離良好。

4.1.2麥冬的薄層色譜鑒別 采用《中國(guó)藥典》2015年版一部[15]麥冬項(xiàng)下的薄層色譜方法試驗(yàn)，得到的薄層色譜圖未出現(xiàn)特征斑點(diǎn)。參考相關(guān)文獻(xiàn)[15,18-19]，分別對(duì)供試品溶液的制備方法、展開劑組成及比例進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明，采用中藥制劑婦寶顆粒的供試品溶液制備方法和展開劑正己烷-乙酸乙酯(1∶1)可得到清晰斑點(diǎn)及較好的分離效果。優(yōu)化后的方法縮短了樣品前處理時(shí)間，且不用甲苯、三氯甲烷等有毒試劑。

4.1.3其他成分的薄層色譜鑒別 筆者還對(duì)火麻仁、枳實(shí)、沙棘等進(jìn)行了定性鑒別研究，采用薄層色譜鑒別方法，通過優(yōu)化供試品溶液制備方法、展開劑組成和比例、展開溫度、濕度，均未得到清晰的色譜斑點(diǎn)、分離效果不佳。因此，暫不將火麻仁、枳實(shí)和沙棘列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

4.2含量測(cè)定分析 考慮到君藥火麻仁無特定的指標(biāo)成分，無法直接反映制劑質(zhì)量，因此選用黃芪甲苷、粗多糖、總黃酮等有效成分含量進(jìn)行研究。

4.2.1黃芪甲苷含量測(cè)定 黃芪甲苷常用的檢測(cè)方法有HPLC-UV、HPLC-ELSD、薄層掃描法等。因黃芪甲苷僅在紫外末端有吸收，采用紫外檢測(cè)器檢測(cè)靈敏度低，干擾大，重現(xiàn)性差；《中國(guó)藥典》2015年版的檢測(cè)方法(HPLC-ELSD法)，費(fèi)時(shí)費(fèi)工，樣品制備繁瑣，且未規(guī)定明確的蒸發(fā)光檢測(cè)參數(shù)；薄層掃描法穩(wěn)定性、重現(xiàn)性差，操作繁瑣。為此，參考相關(guān)文獻(xiàn)，通過一系列的實(shí)驗(yàn)優(yōu)化，建立了一種簡(jiǎn)便快速、準(zhǔn)確的黃芪甲苷含量測(cè)定方法。

筆者對(duì)比研究了超聲和加熱回流兩種提取方法的提取效率，結(jié)果表明無明顯差異；對(duì)超聲工藝參數(shù)(超聲功率、超聲時(shí)間、溫度)進(jìn)行了優(yōu)化，在超聲時(shí)間30 min、溫度50 ℃、超聲功率600 W條件下黃芪甲苷的提取率最高，采用此提取方法，提取時(shí)間從《中國(guó)藥典》2015年版方法中的4 h縮短到30 min。

參照《香港中藥材標(biāo)準(zhǔn)(第一冊(cè))》[20]中黃芪項(xiàng)下黃芪甲苷含量測(cè)定方法中供試樣品處理方法，對(duì)黃芪甲苷富集純化方法進(jìn)行了優(yōu)化，采用氨試劑溶解提取物，再用水飽和正丁醇萃取，去除酚、酸性成分等，以達(dá)到富集純化的目的。與《中國(guó)藥典》2015年版測(cè)定方法相比，簡(jiǎn)化了操作步驟，省去了大孔樹脂洗脫步驟，縮短了分析時(shí)間，降低了因操作冗繁帶來的實(shí)驗(yàn)誤差。

研究了蒸發(fā)光檢測(cè)器的漂移管溫度和霧化器氣體流量對(duì)黃芪甲苷響應(yīng)值的影響，最終選擇漂移管溫度60℃、載氣氮?dú)獾牧魉?.6 L·min-1、增益3.0檢測(cè)方法，獲得了較好的分析效果。

通過以上研究，簡(jiǎn)化了黃芪甲苷含量測(cè)定的操作步驟，縮短了分析時(shí)間，提高了分析精確性。

4.2.2粗多糖含量測(cè)定中供試品溶液制備方法的優(yōu)化 舒悠顆粒中添加了輔料糊精，需用糖化酶將糊精酶解為單糖以排除干擾。本研究對(duì)糖化酶添加量(25 mg、30 mg、35 mg)和酶解時(shí)間(1 h、1.5 h、2 h、2.5 h)進(jìn)行了優(yōu)化，用碘液測(cè)試是否酶解完全。結(jié)果表明當(dāng)糖化酶添加量為30 mg，酶解時(shí)間1.5 h酶解完全，可確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

綜上，本研究建立的當(dāng)歸、麥冬的薄層色譜鑒別方法以及黃芪甲苷、粗多糖、總黃酮的含量測(cè)定方法，專屬性強(qiáng)、方法簡(jiǎn)單可行、精密準(zhǔn)確，適用于舒悠顆粒的質(zhì)量控制。