茯苓多糖對鸚鵡魚抗氧化、肝功能、非特異性免疫以及消化酶的影響

初宇軒，張 震，張鳳東，方珍珍，孫學(xué)亮，陳成勛

（1.天津農(nóng)學(xué)院天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點實驗室，天津 300384；2.天津東子水產(chǎn)科技發(fā)展有限公司，天津 301802）

茯苓又名茯菟、茯靈，屬于擔(dān)子菌綱非褶菌目多孔菌科，主要功能成分為茯苓多糖。分子結(jié)構(gòu)多為β-（1→3）-d-葡聚糖，含有少量β-（1→6）糖苷鍵側(cè)鏈。茯苓多糖具有抗病毒、抗炎、抗衰老和增強免疫力的作用。它在提高免疫力的同時，還間接發(fā)揮抗腫瘤作用。茯苓多糖分布于茯苓內(nèi)部不同位置，且在菌體的不同部位，多糖含量也有所不同，經(jīng)化學(xué)修飾后具有增強其生物學(xué)活性的能力。多糖在參與生命活動過程中，以綴合物的形態(tài)，對生理機能的平穩(wěn)過程產(chǎn)生重要的調(diào)節(jié)作用。因此，可作為飼料添加劑用于高密度水產(chǎn)養(yǎng)殖。

鸚鵡魚是很受大眾喜愛的一種熱帶觀賞魚，其體色絢麗多彩，嘴巴的形狀很像鸚鵡的喙，故而得名。近年來對茯苓多糖的研究主要是多糖成分提取和有效成分的作用，主要應(yīng)用在畜牧業(yè)，如家畜家禽等抗炎、抗病毒、抗腫瘤、增強免疫力等，但在水產(chǎn)方面應(yīng)用實例較少。為擴大茯苓多糖的應(yīng)用，提高水產(chǎn)魚類的體質(zhì)，王慶奎等進行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，茯苓多糖能提高點帶石斑魚血清補體C3的含量并降低血清中A/G值，同時還能提高魚體的抗病能力。本研究探究在飼料中添加不同量茯苓多糖對鸚鵡魚肝功能、抗氧化、非特異性免疫以及腸道消化酶活力的影響，為日后茯苓多糖在鸚鵡魚養(yǎng)殖中地應(yīng)用提供參考。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

試驗魚450尾，選自天津市眾民水產(chǎn)科研基地室外養(yǎng)殖池塘，對幼魚進行馴化以適應(yīng)車間內(nèi)環(huán)境并投喂基礎(chǔ)飼料。鸚鵡魚的平均體長為（10.06±0.21）cm，平均體質(zhì)量為（41.82±1.09）g。茯苓多糖購自四川省維克奇生物科技有限公司，多糖純度（HPLC≥90%）。

1.2 飼料準(zhǔn)備

試驗分為5組，分別在基礎(chǔ)飼料中添加不同含量的茯苓多糖制成配合飼料：FL0（添加茯苓多糖0%），F(xiàn)L05（添加茯苓多糖0.5%），F(xiàn)L1（添加茯苓多糖1%），F(xiàn)L15（添加茯苓多糖1.5%），F(xiàn)L2（添加茯苓多糖2%）?；A(chǔ)飼料配方和營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼料配方

1.3 試驗方法

1.3.1 飼養(yǎng)管理 鸚鵡魚經(jīng)過馴養(yǎng)后開始試驗，在養(yǎng)殖車間水泥池中設(shè)置15個長方形網(wǎng)箱，水溫控制在30℃左右，淡水，早、晚共投喂飼料2次，并保證充足的光照時間。每隔7 d采1次樣，共取5次樣品（0 d需采樣），每個平行取5條魚。采樣方法：將魚解剖，分離出肝臟和腸道，在-80℃條件下冷藏，用于抗氧化、肝功能、非特異性免疫、消化酶指標(biāo)的測定。

1.3.2 樣品的測定 本試驗共測定12項指標(biāo)，包括超氧化物歧化酶（SOD）、總抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）、白球比（A/G）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）、溶菌酶、酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP），以及前腸的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶。檢測用試劑盒均來自南京建成生物工程技術(shù)研究所。

1.4 數(shù)據(jù)分析

試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2010軟件進行整理，采用SPSS17.0軟件進行單因素方差分析，差異顯著性分析（<0.05）。結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 茯苓多糖對鸚鵡魚肝臟抗氧化能力的影響

2.1.1 茯苓多糖對鸚鵡魚肝臟SOD活力的影響由表2可知，7 d時，F(xiàn)L1、FL15、FL2組SOD活力顯著高于FL0、FL05組（<0.05)；14 d時，F(xiàn)L1組SOD活力顯著高于其他組（<0.05)；21 d時，F(xiàn)L1、FL15組活力顯著高于其他組（<0.05)；28 d時，F(xiàn)L0、FL1組活力顯著高于其他組（<0.05）。

表2 茯苓多糖對鸚鵡魚肝臟SOD活力的影響 U·（mg·prot）-1

FL05組 中，7，14 d的SOD活 力 顯 著 高 于0，21，28 d（<0.05)；FL1組中，7~28 d的SOD活力顯著高于0 d（<0.05)；FL15組中，7 d的SOD活力顯著高于0，14，21，28 d（<0.05)；FL2組中，7，14 d的SOD活力顯著高于0，21，28 d（<0.05)。

2.1.2 茯苓多糖對鸚鵡魚肝臟T-AOC活力的影響由表3可知，7 d時，F(xiàn)L2組T-AOC活力顯著高于FL0、FL05組（<0.05)；14 d時，F(xiàn)L2組T-AOC活力顯著高于其他組（<0.05)；28 d時，F(xiàn)L05、FL15、FL2組T-AOC活力顯著高于FL0組（<0.05)。

表3 茯苓多糖對鸚鵡魚肝臟T-AOC活力的影響 mmol·mg-1

FL0、FL05組中，0 d的T-AOC活力顯著高于7~28 d（<0.05)；FL1組中，0，7 d的T-AOC活力均顯著高于14~28 d（<0.05)；FL15組中，0，7 d的T-AOC活力顯著高于14~28 d（<0.05)；FL2組中，0，7 d的T-AOC活力顯著高于14~28 d（<0.05)，14，21 d的T-AOC活力顯著高于28 d（<0.05)。

2.1.3 茯苓多糖對鸚鵡魚肝臟MDA含量的影響由表4可知，14~21 d時，F(xiàn)L0、FL05、FL1組的MDA活力均顯著低于FL15、FL2組（<0.05)；28 d時，F(xiàn)L0、FL05、FL1、FL15組MDA含量顯著低于FL2組（<0.05)。

副中心周邊的農(nóng)村公路，在實際生活中已經(jīng)半兼顧城市道路的功能，但道路等級依然是農(nóng)村公路屬性. 對于這部分農(nóng)村公路規(guī)劃應(yīng)著眼于未來，尤其應(yīng)注重提升慢行交通、景觀生態(tài)、公共交通以及智能交通管理在規(guī)劃中的地位，同時使其滿足可以鋪設(shè)市政管線的要求. 首先要進行改造升級，如道路寬度不夠、交通基礎(chǔ)設(shè)施不健全等問題要全面考慮，改造同時可將重心轉(zhuǎn)移到大力發(fā)展公共交通的目標(biāo)上，有條件的地區(qū)可設(shè)置交通專用道，從而為公交線路更廣泛的覆蓋農(nóng)村地區(qū)，方便農(nóng)村居民的出行提供有力條件. 對于居民出行需求強烈的地區(qū)，道路設(shè)計要求機非分離.

表4 茯苓多糖對鸚鵡魚肝臟MDA含量的影響 nmol·（g·prot）-1

FL0、FL05組中，0，7，28 d的MDA含量均顯著低于14，21 d（<0.05)；FL1組中，0，21，28 d的MDA含量顯著低于7，14 d（<0.05)；FL15組中，0，28 d的MDA含量顯著低于7~21 d（<0.05)；FL2組中，0，28 d的MDA含量顯著低于7~21 d（<0.05)。

2.2 茯苓多糖對鸚鵡魚肝功能的影響

2.2.1 茯苓多糖對鸚鵡魚A/G的影響 由表5可知，7 d時，F(xiàn)L0組A/G值顯著高于FL05、FL15、FL2組（<0.05)；14 d時，F(xiàn)L0組、FL15組A/G值顯著高于FL05、FL1、FL2組（<0.05)；28 d時，F(xiàn)L2組A/G值顯著高于其他組（<0.05)。

表5 茯苓多糖對鸚鵡魚A/G值的影響

FL0組中，0 d A/G值顯著高于其他時期（<0.05)；FL05組中，0，21 d A/G值顯著高于28 d（<0.05)，28 d A/G值顯著高于7，14 d（<0.05)；FL15組中，0，21 d A/G值顯著高于7，14 d（<0.05)，28 d A/G值顯著高于其他時期（<0.05)；FL2組中，28 d A/G值顯著高于其他時期（<0.05)。

2.2.2 茯苓多糖對鸚鵡魚GOT活力的影響 由表6可知，7 d時，F(xiàn)L0組GOT活力均顯著低于FL05、FL1、FL15、FL2組（<0.05)）；14 d時，F(xiàn)L0、FL2組GOT活力顯著低于FL05組（<0.05)；21 d時，F(xiàn)L0、FL1、FL2組GOT活力顯著低于FL05組（<0.05)。

表6 茯苓多糖對鸚鵡魚GOT活力的影響 U·（g·prot）-1

FL0組中，0 d GOT活力顯著高于其他各個時期（<0.05)；FL15組中，0，14，28 d GOT活力顯著低于7，21d（<0.05)；FL2組中，14~28 d GOT活力顯著低于0，7 d（<0.05)。

2.2.3 茯苓多糖對鸚鵡魚GPT活力的影響 由表7可知，7 d時，F(xiàn)L0、FL05組GPT活力顯著低于FL1組（<0.05)；28 d時，F(xiàn)L0、FL05、FL15組GPT活力顯著低于FL1、FL2組（<0.05)。

表7 茯苓多糖對鸚鵡魚GPT活力的影響 U·（g·prot）-1

FL0、FL05組中，14，21，28 d GPT活力顯著低于0，7 d（<0.05)；FL1組中，7 d的GPT活力顯著高于各個時期（<0.05)；FL15組中，14，21，28 d GPT活力顯著低于0，7 d（<0.05)；FL2組中，7 d的GPT活力顯著高于各個時期（<0.05)。

2.3 茯苓多糖對鸚鵡魚非特異性免疫的影響

2.3.1 茯苓多糖對鸚鵡魚肝臟溶菌酶活力的影響由表8可知，14 d時，F(xiàn)L05組溶菌酶活性顯著高于其他各組（<0.05)；21 d時，F(xiàn)L05組的溶菌酶活力顯著高于其他組（<0.05)；28 d時，F(xiàn)L05組溶菌酶活力顯著高于FL0、FL1、FL2組（<0.05)。

表8 茯苓多糖對鸚鵡魚溶菌酶活力的影響 U·（g·prot）-1

2.3.2 茯苓多糖對鸚鵡魚肝臟AKP活力的影響由表9可知，7 d時，F(xiàn)L2組AKP活力顯著高于其他組（<0.05)；14 d時，F(xiàn)L2組AKP活力顯著高于其他組（<0.05)；21 d時，F(xiàn)L15、FL2組AKP活力顯著高于FL0、FL05、FL1組（<0.05)。

表9 茯苓多糖對鸚鵡魚肝臟中AKP活力的影響 U·（g·prot）-1

FL05組中，21 d AKP活力顯著高于7，28 d（<0.05)；FL15、FL2組中，7，14，21，28 d AKP活力差異不顯著（>0.05)，但均顯著高于0 d（<0.05)。

2.3.3 茯苓多糖對鸚鵡魚肝臟ACP活力的影響由表10可知，14 d時，F(xiàn)L1、FL15、FL2組ACP活力均顯著高于其他組（<0.05)；28 d時，F(xiàn)L2組ACP活力顯著高于其他組（<0.05)。

表10 茯苓多糖對鸚鵡魚肝臟中ACP活力的影響 U·（g·prot）-1

FL05組中，14，21 d ACP活力顯著高于0，7，28 d（<0.05)；FL1組中，14，21 d ACP活力顯著 高 于0，7，28 d（<0.05)；FL15組中，14 d ACP活力顯著高于0，7，28 d（<0.05)。

2.4 茯苓多糖對鸚鵡魚腸道消化酶活力的影響

2.4.1 茯苓多糖對鸚鵡魚前腸蛋白酶活力的影響 由表11可知，F(xiàn)L05組中，7，14 d蛋白酶活力顯著高于其他時期（<0.05）；FL1組中，14，21 d蛋白酶活力顯著高于其他時期（<0.05）；FL15組中，14 d蛋白酶活力顯著高于其他時期（<0.05）。

表11 茯苓多糖對鸚鵡魚前腸蛋白酶活力的影響 U·（g·prot）-1

14 d時，各試驗組蛋白酶活力均顯著高于對照組(<0.05)；28 d時，F(xiàn)L1、FL2組蛋白酶活力顯著高于FL0、FL05組（<0.05）。

2.4.2 茯苓多糖對鸚鵡魚前腸淀粉酶活力的影響由 表12可 知，F(xiàn)L2組 中，7，28 d的 淀 粉 酶 活力顯著高于其他時期（<0.05）。14，21 d時試驗組與對照組淀粉酶活性的差異性均不顯著（>0.05）；在7 d時，F(xiàn)L2組的淀粉酶活力最高。

表12 茯苓多糖對鸚鵡前腸道淀粉酶活力的影響 U·（g·prot）-1

2.4.3 茯苓多糖對鸚鵡魚前腸脂肪酶活力的影響由表13可知，7，14，21 d時FL15組的脂肪酶活力顯著高于其他組（<0.05)。7，14 d時FL1、FL2組的脂肪酶活力顯著高于FL0、FL05組（<0.05)。FL1組中，14 d的脂肪酶活力顯著高于其他時期（<0.05)。

表13 茯苓多糖對鸚鵡魚前腸脂肪酶活力的影響 U·（g·prot）-1

3 結(jié)論與討論

3.1 茯苓多糖對鸚鵡魚抗氧化能力的影響

茯苓多糖具有較強的抗氧化能力，包括對DPPH自由基的清除能力、對Fe的還原能力以及對羥自由基的抑制能力，而且會隨著其濃度的加大而增強。茯苓多糖能夠減少機體內(nèi)自由基對細胞的破損，也能夠激活動物機體的抗氧化系統(tǒng)，從而達到保護動物本身的效果。SOD的主要功效是對超氧離子自由基催化進行歧化反應(yīng)。陳林等研究結(jié)果表明，茯苓胞內(nèi)多糖為優(yōu)良的天然抗氧化活性多糖，可以提高生物的抗氧化水平。黃聰亮等研究表明，茯苓多糖能提高糖尿病小鼠腎組織中SOD、GSH、CAT活性，降低MDA的含量。本研究結(jié)果FL1組SOD活力14 d時最高且顯著高于其他組（<0.05)，表明在飼料中添加1%的茯苓多糖可提高魚體的SOD活力。MDA是機體脂質(zhì)氧化程度的重要體現(xiàn)，隨著投喂時間的增加，MDA含量呈先升高后降低的趨勢，在28 d時，肝臟的MDA含量恢復(fù)正常水平。T-AOC是反映機體對外界脅迫的代償能力以及機體內(nèi)分解與清除氧自由基能力的綜合體現(xiàn)，研究結(jié)果表明，長時間添加T-AOC會對鸚鵡魚的總抗氧化能力產(chǎn)生抑制作用。以上數(shù)據(jù)與龔澤修等研究茯苓多糖對母豬抗氧化指標(biāo)的影響結(jié)果相一致。上述研究結(jié)果證實茯苓多糖可以提高動物機體的抗氧化能力，但對脂質(zhì)體內(nèi)氧化反應(yīng)物影響不顯著。

3.2 茯苓多糖對鸚鵡魚肝功能的影響

茯苓提取物的保肝活性研究早在20世紀(jì)90年代就已受到廣泛關(guān)注。研究表明，茯苓水溶性多糖和醇溶性三萜對肝炎、肝硬化等多種肝臟病癥均表現(xiàn)出明顯的防治作用。程玥等通過研究得出，3種茯苓提取物對CCL4誘導(dǎo)的小鼠肝損傷均具有不同程度的保護作用，以茯苓多糖效果最為顯著，其機制可能與增強肝臟抗氧化能力及減輕炎癥有關(guān)。吳科銳等研究羧甲基茯苓多糖的藥理作用結(jié)果表明，羧甲基茯苓多糖具有免疫調(diào)節(jié)、護肝減毒、抗氧化等作用。在試驗中通常用A/G來衡量魚類肝臟的健康狀況，當(dāng)肝臟受到嚴(yán)重?fù)p傷時白蛋白含量下降，血清中的A/G會偏低；當(dāng)球蛋白含量升高時，雖然也會使A/G值降低，但因球蛋白是免疫蛋白，所以這意味著此時機體免疫力有所提升。本研究在投喂茯苓多糖的第7天和第14天，除FL0組外，魚體出現(xiàn)了A/G值普遍偏低的情況。崔培等通過試驗發(fā)現(xiàn)，投喂500，350 mg·kg的甘草甜素7 d會降低點帶石斑魚血清A/G值，這與本研究所得出的結(jié)論基本相符。GPT和GOT是反映肝損傷最敏感的指標(biāo)，當(dāng)肝臟受損時，GOT和GPT會被釋放到血液中。GPT活力隨著試驗天數(shù)的遞增呈現(xiàn)出先上升后下降的趨勢，除FL0組外，其他組14，21 d活力均顯著低于0，7 d，表明茯苓多糖可以降低錦鯉肝臟的受損傷程度，從而提高肝功能。

3.3 茯苓多糖對鸚鵡魚非特異性免疫的影響

溶菌酶是魚類重要的非特異性免疫指標(biāo)，其作用機制是破壞細胞壁使細菌溶解。蔣逸凡等研究茯苓多糖及其免疫調(diào)節(jié)功能結(jié)果表明，茯苓多糖可提高機體非特異性免疫能力，這與本研究結(jié)果相一致。在飼料中添加適量的茯苓多糖能夠提高魚體內(nèi)溶菌酶的活力。AKP與ACP是一種彼此聯(lián)系的磷酸單脂酶，血細胞在進行吞噬的過程中會釋放ACP，因此亦是重要的非特異性免疫指標(biāo)。本研究結(jié)果表明，茯苓多糖可以提高魚體肝臟中溶菌酶、AKP、ACP的活力，其中14 d時ACP提高較為顯著（<0.05)，但不宜長時間添加。這與黃玉章通過試驗得出，黃芪多糖可以在一定范圍內(nèi)提高奧尼羅非魚血清中ACP的活力結(jié)果基本相符。

3.4 茯苓多糖對鸚鵡魚腸道消化酶的影響

蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶是動物腸道內(nèi)最常見的消化酶。多糖對于動物消化酶活性的影響國內(nèi)外學(xué)者一直都有研究。邱小琮等研究表明，異育銀鯽攝食添加含有中草藥成分的飼料，腸道的消化酶活性明顯提高（<0.05）。吉紅等在泥鰍的飼料中添加不同含量的中草藥添加劑，能顯著提高泥鰍的消化酶活性(<0.05)。本研究結(jié)果表明，茯苓多糖對蛋白酶、脂肪酶活性都有提高，而且在茯苓多糖含量為1.0%，添加14 d時消化酶活性達到最大值。對脂肪酶有不顯著的抑制作用，這與龔全研究云芝多糖對奧尼羅非魚消化酶的影響結(jié)果相一致。此外多糖還是合成蛋白與脂肪的物質(zhì)，這表明茯苓多糖對魚體消化酶活性的影響與脂肪含量、蛋白水平等密切相關(guān)，其作用機理還需要深入研究。

綜合以上結(jié)果表明，在飼料中添加1%的茯苓多糖可增強鸚鵡魚肝功能、抗氧化、非特異性免疫以及腸道消化酶的活力，但應(yīng)根據(jù)實際調(diào)整，建議添加14 d，效果最佳。