飼料中添加乳酸菌對(duì)南美白對(duì)蝦蝦苗生長(zhǎng)的影響

曾思源，饒從穩(wěn)，2，韓坤煌*，陳欣欣，詹巧玲，李菲艷，李華民

（1.寧德師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院/閩東水產(chǎn)品精深加工福建省高校工程研究中心，福建 寧德 352100；2.福建農(nóng)林大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，福建 福州 350000）

南美白對(duì)蝦（Penaeus vannamei），學(xué)名凡納濱對(duì)蝦，又名白肢蝦、白對(duì)蝦，為廣溫、廣鹽性熱帶蝦類，原產(chǎn)于太平洋西海岸至墨西哥灣沿岸,是世界三大經(jīng)濟(jì)蝦類之一。南美白對(duì)蝦也是我國(guó)主要的蝦類養(yǎng)殖對(duì)象，是一種經(jīng)濟(jì)效益高的養(yǎng)殖品種，其肉質(zhì)鮮美，含肉率高，營(yíng)養(yǎng)豐富，深受消費(fèi)者的喜愛(ài)。

隨著南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖規(guī)模日漸擴(kuò)大，病害、食品安全等諸多問(wèn)題也開(kāi)始顯現(xiàn)。一方面由于養(yǎng)殖過(guò)程中過(guò)多使用藥物，造成蝦代謝系統(tǒng)紊亂，抵抗力下降；另一方面是細(xì)菌、病毒和寄生蟲(chóng)引起的各種病害增多。近年來(lái)，綠色、環(huán)保藥物、益生菌等在水產(chǎn)養(yǎng)殖中大量應(yīng)用，效果良好。

乳酸菌是一類能利用可發(fā)酵碳水化合物產(chǎn)生乳酸的異氧厭氧型細(xì)菌，具有提高養(yǎng)殖對(duì)象的攝食量、促進(jìn)其腸道消化、增強(qiáng)機(jī)體抗病力、強(qiáng)化肝臟功能和調(diào)節(jié)水質(zhì)等優(yōu)點(diǎn)，在南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖生產(chǎn)中被廣泛應(yīng)用。目前，在基礎(chǔ)餌料中添加乳酸菌對(duì)南美白對(duì)蝦生長(zhǎng)影響的研究報(bào)道不多，現(xiàn)通過(guò)添加不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的乳酸菌混合餌料，喂養(yǎng)南美白對(duì)蝦蝦苗，分析其對(duì)南美白對(duì)蝦蝦苗生長(zhǎng)性能的影響，以期為生產(chǎn)實(shí)踐中合理使用乳酸菌喂養(yǎng)南美白對(duì)蝦提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間

2021年3月24日—4月23日。

1.2 試驗(yàn)地點(diǎn)

試驗(yàn)地點(diǎn)位于福州市長(zhǎng)樂(lè)友豐養(yǎng)殖有限公司蝦苗場(chǎng)，共有12口高位池，面積均約300 m，高均約2 m，前期只使用4口高位池。投苗前，用火槍噴射火焰灼燒4口高位池地面與墻壁，進(jìn)行高溫消毒。對(duì)火焰噴射不到的地方，使用氫氧化鈉溶液消毒。投苗前7 d內(nèi)，選擇陰天或雨天，將被火焰灼燒過(guò)的4口高位池洗凈，每667 m按1 m水深使用漂白粉50 kg，嚴(yán)格消毒，其他8口高位池亦要在分苗前完成相同的消毒程序。

1.3 試驗(yàn)材料

1.3.1 試驗(yàn)蝦

試驗(yàn)蝦苗購(gòu)自廈門喜大生物科技有限公司，初始平均體長(zhǎng)（0.33±0.06）cm，平均體質(zhì)量為（0.049±0.014）g，投放密度約為666尾/m。將12口高位池分成4組，分別為A、B、C、D組，A組為對(duì)照組，每組3口高位池。蝦苗養(yǎng)殖的第20天開(kāi)始分苗，將蝦苗平均分至12口高位池進(jìn)行養(yǎng)殖，以保障成活率以及平行樣品數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。用分別添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0%，0.75%，1.00%和1.25%乳酸菌的混合飼料進(jìn)行飼養(yǎng)。

1.3.2 試劑和設(shè)備

生理鹽水，亞硝酸鹽氮，氨氮試劑盒；溶氧儀，pH計(jì)，電子天平，高精度數(shù)顯電子鹽度計(jì)，顯微鏡，載玻片，蓋玻片，試管，100 mL燒杯，100 mL容量瓶等。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 乳酸菌用法

乳酸菌來(lái)自廈門優(yōu)必和生物科技有限公司，按質(zhì)量分?jǐn)?shù)1.00%的量，以接種擴(kuò)培的方式接入菌種，依次加入3%的糖蜜和96%的水充分?jǐn)嚢柚敝镣耆诮?，密閉發(fā)酵3 d左右，直至產(chǎn)生芳香氣味。使用pH試紙測(cè)得pH值為3~4即可，然后分別按照質(zhì)量分?jǐn)?shù)0%，0.75%，1.00%和1.25%的比例與對(duì)蝦飼料混合，待用。

1.4.2 水質(zhì)指標(biāo)測(cè)定方法

每日測(cè)量高位池水溫3次；使用高精度數(shù)顯電子鹽度計(jì)，定期監(jiān)測(cè)鹽度；使用廣泛pH試紙檢測(cè)pH值；用水質(zhì)檢測(cè)試劑盒定期測(cè)定亞硝酸鹽氮、氨氮含量，溶氧儀檢測(cè)水體中溶解氧（DO）含量。

1.4.3 水樣采集時(shí)間

水質(zhì)指標(biāo)測(cè)定時(shí)間為每隔5 d于10：30取樣測(cè)定，12口池中每口取樣至少3次，取其平均值用于統(tǒng)計(jì)。每天06：30、12：30、18：30各測(cè)量水溫1次，取平均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

1.4.4 肝臟壓片觀察

試驗(yàn)過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)A組中的一口高位池蝦苗肝萎縮比較嚴(yán)重。隨機(jī)抽取5尾肝萎縮比較嚴(yán)重的幼蝦以及其他組正常健康的幼蝦，用解剖器取出肝臟，放入裝有生理鹽水的載玻片，蓋上蓋玻片進(jìn)行壓片處理，顯微鏡鏡檢觀察。

1.4.5 不同組別的生物學(xué)特征測(cè)量

養(yǎng)殖期結(jié)束后，取A、B、C、D 4組蝦苗，每口池取30尾，測(cè)定蝦苗體長(zhǎng)、體質(zhì)量，計(jì)算質(zhì)量增加率和特定生長(zhǎng)率。采用SPSS 15.0單因素方差分析對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果用（平均值±標(biāo)準(zhǔn)差）表示。

質(zhì)量增加率（%）=100%×（末均質(zhì)量-初均質(zhì)量）/初均質(zhì)量；

體質(zhì)量特定生長(zhǎng)率（%·d）=100%×（ln末均質(zhì)量-ln初均質(zhì)量）/飼養(yǎng)天數(shù)；

體長(zhǎng)增長(zhǎng)率（%）=100%×（末均體長(zhǎng)-初均體長(zhǎng)）/初體長(zhǎng)；

體長(zhǎng)特定生長(zhǎng)率（%·d）=100%×（ln末均體長(zhǎng)-ln初均體長(zhǎng)）/飼養(yǎng)天數(shù)。

1.5 數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計(jì)

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件中ANOVA單因素方差分析，進(jìn)行各組間數(shù)據(jù)兩兩比較，對(duì)其差異進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 水質(zhì)理化因子測(cè)定

4組高位池的水溫見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，4組高位池的水溫變化為21.3～26.8℃，各組間水溫差異較小。4組高位池的鹽度為0.420%～0.470%，說(shuō)明水體的鹽度比較穩(wěn)定，滿足對(duì)蝦生長(zhǎng)需求（表2）。DO是水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物重要的水質(zhì)影響因子，4組高位池的DO為6.12～7.60 mg/L，滿足對(duì)蝦生長(zhǎng)需求（表3）。4組高位池在加入乳酸菌之后，養(yǎng)殖水體pH值變化范圍不斷變小，D組的數(shù)值最穩(wěn)定，為7.55～7.75（表4）。乳酸菌對(duì)降解水體中的亞硝酸鹽氮具有明顯效果，在4月3日開(kāi)始，C與A組相比，差異顯著（P＜0.05），D組A組相比，差異極顯著（P<0.01）；在4月18日之后，C組和D組的測(cè)量值已趨于穩(wěn)定（表5）。

表1 4組高位池的水溫 ℃

表2 4組高位池的鹽度 %

表3 4組高位池的DO mg/L

表4 試驗(yàn)期間四組高位池的pH值

表5 4組高位池的亞硝酸鹽氮① mg/L

4組高位池中氨氮一直處于較低水平，在3月24日—4月13日，氨氮數(shù)值有所增加，C組和D組的增加幅度明顯較小；A組在4月8日達(dá)到峰值，B組在4月13日達(dá)到峰值，之后開(kāi)始下降，2組間的數(shù)值比較接近。在4月18日時(shí)C組值已明顯下降，D組值為0，到4月23日時(shí)C和D組的檢測(cè)數(shù)據(jù)均為0（表6）。

表6 4組高位池的氨氮 mg/L

2.2 不同試驗(yàn)組生長(zhǎng)速率統(tǒng)計(jì)

乳酸菌對(duì)南美白對(duì)蝦生長(zhǎng)性能的影響見(jiàn)表7。由表7可見(jiàn)，隨著乳酸菌劑量的增加，在飼養(yǎng)30 d后，C組末體長(zhǎng)、末體質(zhì)量比A組均有顯著提高（P＜0.05），而D組末體長(zhǎng)、末體質(zhì)量則比A組均有極顯著提高（P＜0.01）。說(shuō)明乳酸菌在促進(jìn)其生長(zhǎng)性

表7 乳酸菌對(duì)南美白對(duì)蝦生長(zhǎng)性能的影響①（n=30）

2.3 肝臟壓片顯微觀察結(jié)果

能方面效果顯著。

患病、正常蝦苗肝臟壓片結(jié)果見(jiàn)圖1（a）（b）。由圖1可見(jiàn)，正常蝦苗和發(fā)病蝦苗兩者都寄生有大量弧菌，發(fā)病蝦苗肝臟壓片顯微鏡觀察附有更多異物，且有明顯萎縮現(xiàn)象；而正常蝦苗的肝臟壓片干凈、無(wú)異物，且肝臟組織紋理清楚。

圖1 患病、正常蝦苗肝臟壓片結(jié)果

3 討論

乳酸菌是一類無(wú)芽孢、革蘭陽(yáng)性菌的總稱，可在機(jī)體腸道內(nèi)產(chǎn)生維生素和促生長(zhǎng)因子，從而實(shí)現(xiàn)促進(jìn)對(duì)蝦生長(zhǎng)的目的。張家國(guó)等研究發(fā)現(xiàn)，乳酸菌在水產(chǎn)動(dòng)物的養(yǎng)殖方面具有改善水質(zhì)、提高機(jī)體免疫能力和替代抗生素藥物治療疾病等功效。文獻(xiàn)[16]研究表明，從皮皮蝦、南美白對(duì)蝦腸道及養(yǎng)殖池底質(zhì)活性污泥中，分離具有水質(zhì)凈化功能的乳酸菌，可有效降低水中亞硝酸鹽氮和氨氮，具有顯著的水體凈化效果。本研究中，拌喂乳酸菌飼料的試驗(yàn)組與對(duì)照組相比，水溫、鹽度、pH值、DO值均無(wú)顯著性差異，但添加較多劑量乳酸菌的D組，水體中溶解氧含量更高，水體pH值更穩(wěn)定，氨氮和亞硝酸鹽氮測(cè)定值更低，說(shuō)明隨著養(yǎng)殖時(shí)間延長(zhǎng)，乳酸菌在改良水質(zhì)方面的功能逐漸顯現(xiàn)出來(lái)，與黃浦江等的研究結(jié)果一致。

文獻(xiàn)[18]研究顯示，南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖飼料中添加乳酸菌，可顯著增加機(jī)體腸道有益菌數(shù)量、抑制病原菌的生長(zhǎng)繁殖、提高機(jī)體病原菌的抵抗力。本研究顯示，隨著乳酸菌添加劑量增加，對(duì)蝦蝦苗體長(zhǎng)和體質(zhì)量的增加幅度亦提高，并顯著高于對(duì)照組；同時(shí)，肝臟的顯微壓片結(jié)果顯示，乳酸菌可有效提高對(duì)蝦機(jī)體抗病能力，減少有害物質(zhì)引起的蝦苗肝萎縮。Kongnum等研究發(fā)現(xiàn)，南美白對(duì)蝦飼料中拌喂乳酸菌可顯著提高質(zhì)量增加率、特定生長(zhǎng)率、免疫力、成活率及抗弧菌效果。張玲研究表明，日本囊對(duì)蝦和中國(guó)明對(duì)蝦的養(yǎng)殖過(guò)程中口服或浸浴乳酸菌，均能改善水質(zhì)、提高成活率和抗病能力。文金順研究表明，提高南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖環(huán)境中的乳酸菌含量可顯著提高蝦體生長(zhǎng)速度。汪海燕等研究表明，南美白對(duì)蝦發(fā)酵飼料中添加乳酸菌可顯著提高對(duì)蝦生長(zhǎng)速度，體長(zhǎng)比對(duì)照組增長(zhǎng)0.5~0.8 cm。Sha等研究表明，乳酸菌不僅可以促進(jìn)對(duì)蝦生長(zhǎng)，還可提高對(duì)蝦的免疫應(yīng)激和抗病能力，成活率顯著提高。鄭玉等在南美白對(duì)蝦餌料中添加蝦體質(zhì)量3%的乳酸菌，飼喂8周后，對(duì)蝦的終全長(zhǎng)、質(zhì)量增加率和特定生長(zhǎng)率均具有顯著提高。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果顯示，南美白對(duì)蝦蝦苗淡水養(yǎng)殖過(guò)程中，投喂添加了1.25%乳酸菌的飼料后，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組蝦苗生長(zhǎng)速率更快，活力更強(qiáng)，水體環(huán)境更好，水體pH值更穩(wěn)定，溶解氧含量更高，肝萎縮現(xiàn)象更少，說(shuō)明飼料中拌喂乳酸菌可以促進(jìn)南美白對(duì)蝦蝦苗生長(zhǎng)。