原發(fā)性肝癌患者血清miR-934和miR-498水平變化及其診斷價值和對預(yù)后的影響

詹學(xué)斌 岳 穎 馬劍鋒

原發(fā)性肝癌(primary hepatocellular carcinoma，PHC)是一種常見的惡性腫瘤，具有發(fā)展迅速、預(yù)后差等特征[1]。每年新發(fā)病例約有70萬人，由于工作壓力增大、生活習(xí)慣改變以及生活環(huán)境的變化，近年來該疾病的發(fā)病率呈現(xiàn)明顯的上升趨勢，且大量患者在確診為PHC時已達(dá)晚期。有統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明，PHC患者的平均5年生存率僅為10%～15%[2-3]。miRNAs是一類大小20～25個核苷酸的非編碼RNA，miRNA和靶基因間形成了復(fù)雜的調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，參與細(xì)胞生長、分化、炎癥和癌變等多種生理和病理過程[4-5]。有臨床資料指出，miRNAs在肝癌的生理病理學(xué)機制中發(fā)揮著重要的作用，除了影響肝細(xì)胞生長，還對應(yīng)激反應(yīng)、代謝、感染等過程發(fā)揮調(diào)節(jié)作用[6]。有研究證實miR-934和miR-498在原發(fā)性肝癌中出現(xiàn)異常表達(dá)[7]。本研究探討血清miR-934和miR-498在原發(fā)性肝癌中的診斷價值及其對預(yù)后的影響，可為原發(fā)性肝癌診斷的生物標(biāo)志物和預(yù)后干預(yù)的靶點提供新的研究方向，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選取2017年2月至2020年2月本院收治原發(fā)性肝癌患者90例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2017年版)》[8]中關(guān)于原發(fā)性肝癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，患者經(jīng)病理檢查確診為原發(fā)性肝癌； ②行手術(shù)切除術(shù)；③接受手術(shù)前沒有接受過放療、化療等相關(guān)治療項目； ④患者簽署自愿受試同意書，患者及其家屬需簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：① 合并病毒性肝炎感染者；②合并其他惡性腫瘤患者、免疫功能嚴(yán)重受損或正在服用免疫抑制劑者；③合并存在代謝功能異?；蛘咂渌鞴俟δ苷系K者。此外，選取同期本院收治的肝硬化(liver cirrhosis，LC)患者90例，納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《病毒性肝炎防治方案》[9]診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)肝功能檢查、影像學(xué)檢查或肝臟穿刺活檢診斷為LC。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并肝癌或其他惡性腫瘤；②合并嚴(yán)重心、肺、腎功能不全等疾病。選取同期在本院體檢的健康者90例納入對照組。

1.2 血清miR-934和miR-498水平檢測

所有入組患者抽取靜脈血5 mL，常溫下靜置并進(jìn)行離心處理，并分離血清。使用TRIzol RNA試劑盒(購自賽默飛世爾科技有限公司)提取總RNA待用；隨后采用紫外分光光度計(上海美譜達(dá)公司)檢測總RNA 濃度及純度。選用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(賽默飛世爾科技有限公司)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄試驗。取2 μg待用的總 RNA 進(jìn)行上述操作，隨后，進(jìn)行PCR擴增反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，循環(huán)40次。最后，選用2-ΔΔCt法對各組基因的相對表達(dá)量進(jìn)行計算。

1.3 評價指標(biāo)

收集患者一般資料。采用黃色促凝膠管抽取靜脈全血樣本，靜置待有肉眼可見的血清析出，置入離心機，以3500 r/min的轉(zhuǎn)速離心處理10 min，隨后使用全自動生化免疫分析儀以及配套試劑盒上機檢測患者天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、甲胎蛋白(AFP)水平。另外，通過醫(yī)院信息系統(tǒng)調(diào)取患者的病歷信息，收集患者接受手術(shù)后短期恢復(fù)情況，包括肝區(qū)疼痛、發(fā)熱、術(shù)后并發(fā)癥、術(shù)后住院時間等等；出院后，進(jìn)行術(shù)后隨訪24～60個月，隨訪時間截止至2021年5月。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 3組臨床資料比較

3組臨床資料比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3組年齡、性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；3組的ALT、AST、AFP、miR-934、miR-498水平比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，其中PHC組ALT、AST、AFP、miR-934、miR-498水平高于對照組和LC組(P<0.05)，LC組ALT、AST、AFP、miR-934、miR-498水平高于對照組(P<0.05)，見表1。

表1 3組患者臨床資料比較

2.2 血清miR-934和miR-498水平與患者術(shù)后短期恢復(fù)情況的關(guān)系

術(shù)后肝區(qū)疼痛、發(fā)熱、有術(shù)后并發(fā)癥、復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移的患者血清miR-934和miR-498水平顯著高于其他患者(P<0.05)，見表2。

表2 血清miR-934和miR-498水平與原發(fā)性肝癌患者術(shù)后短期恢復(fù)情況的關(guān)系

2.3 血清miR-934和miR-498聯(lián)合檢測原發(fā)性肝癌的診斷價值

ROC曲線對血清miR-934、miR-498水平及聯(lián)合檢測診斷原發(fā)性肝癌效能進(jìn)行分析，miR-934、miR-498單獨檢測AUC分別為0.702、0.693，聯(lián)合檢測AUC為0.821，高于單獨檢測的AUC值。見表3、圖1。

圖1 血清miR-934和miR-498聯(lián)合檢測診斷原發(fā)性肝癌ROC曲線圖

表3 血清miR-934和miR-498聯(lián)合檢測原發(fā)性肝癌的診斷效能評價

3 討論

PHC作為全球第5大常見腫瘤，占全球癌癥相關(guān)死亡的第3位，具有起病隱匿、病情進(jìn)展快、惡性程度高等特征，其發(fā)展過程與多種因素有關(guān)。且由于早期癥狀輕微不易察覺，因此相當(dāng)比例患者在最終確診時已經(jīng)進(jìn)入中、晚期階段，對疾病的治療以及患者預(yù)后造成了嚴(yán)重的負(fù)面影響。總而言之，早發(fā)現(xiàn)、早治療是挽救原發(fā)性肝癌患者生命的關(guān)鍵[10-11]?；顧z、影像學(xué)和腫瘤標(biāo)志物檢測是目前臨床常用的原發(fā)性肝癌的診斷方法，但是其靈敏度和特異度具有局限性，且對影像學(xué)醫(yī)師的臨床經(jīng)驗以及檢測水平要求較高，在實際檢測過程中時常存在漏診、誤診情況[12]。近年來，隨著分子生物學(xué)診斷技術(shù)不斷發(fā)展，miRNAs表達(dá)異常與腫瘤之間的相關(guān)性已逐漸獲得了越來越多臨床醫(yī)學(xué)家的重視[13]。尋找兼具敏感性、特異性的原發(fā)性肝癌標(biāo)志物具有重要的臨床意義以及研究價值。

研究證實，腫瘤患者組織和血清中miRNA表達(dá)相比正常水平會出現(xiàn)明顯變化。相比病理學(xué)活檢，miRNA的檢測更加方便，且樣本的采集不涉及侵入性操作，具有較強的操作性和可重復(fù)性，作為診斷標(biāo)志物具有明顯的推廣優(yōu)勢[14-15]。有研究證實miR-934和miR-498水平在PHC中表達(dá)失常[16]，本研究發(fā)現(xiàn)PHC組miR-934、miR-498水平高于對照組和LC組，LC組miR-934、miR-498水平高于對照組，該結(jié)果說明miR-934、miR-498水平不僅與原發(fā)性肝癌有關(guān)，可能還受肝硬化的影響。本研究還發(fā)現(xiàn)miR-934、miR-498檢測AUC分別為0.702、0.693，聯(lián)合檢測AUC為0.821，高于單獨檢測的AUC值，提示血清miR-934、miR-498在PHC診斷中具有臨床價值，且聯(lián)合檢測成為診斷PHC的臨床檢測指標(biāo)的潛力最大。另外有研究證實miR-934和miR-498在肝癌、胃癌、肺癌等多種癌癥中表達(dá)失常，且高表達(dá)的miR-934和miR-498與腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及預(yù)后相關(guān)[17-18]，本研究中術(shù)后肝區(qū)疼痛、發(fā)熱、有術(shù)后并發(fā)癥、復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移的患者血清miR-934和miR-498水平顯著高于其他患者，提示miR-934和miR-498的高表達(dá)可能與PHC 患者的預(yù)后有關(guān)。本研究不足之處在于，受限于樣本采集的難度以及資源限制，納入的樣本量較少，隨訪的時間較短；另外對患者一般資料的收集過程中，對其生活習(xí)慣、基礎(chǔ)疾病以及家族病史的相關(guān)資料收集不夠齊全，因此更加確切的研究揭露還有待擴大樣本量進(jìn)行多中心、前瞻性的研究以進(jìn)一步證實。

綜上所述，miR-934、miR-498聯(lián)合檢測的診斷陽性率高于單獨檢測，且miR-934、miR-498水平與患者術(shù)后恢復(fù)情況存在相關(guān)性，可作為PHC的診斷和預(yù)后指標(biāo)，值得臨床醫(yī)師參考借鑒。