PD-1、PD-L1在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤組織中的差異性表達(dá)及其與臨床病理及預(yù)后的關(guān)系

張芳芳 張曉麗 冀烜靜 王戰(zhàn)芳 徐麗偉

彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(diffuse large B cell lympoma，DLBCL)屬于常見的淋巴瘤，具有高度異質(zhì)性，臨床特征、形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)和細(xì)胞遺傳學(xué)特征均不同[1]。程序性死亡受體-1(PD-1)及程序性死亡配體(PD-L1)信號(hào)通路是腫瘤免疫逃避的重要途徑，PD-1可以介導(dǎo)細(xì)胞凋亡，與PD-L1結(jié)合可以誘導(dǎo)效應(yīng)T細(xì)胞凋亡以及抑制T細(xì)胞活化，形成腫瘤生長(zhǎng)局部或全身微環(huán)境，造成腫瘤細(xì)胞獲得免疫逃逸[2]。有研究證實(shí)表達(dá)PD-1、PD-L1的DLBCL患者的療效及生存率均偏低[3]。本研究旨在探討PD-1、PD-L1在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤組織中的差異性表達(dá)及其與臨床病理及預(yù)后的關(guān)系。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月至2020年1月本院收治彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者60例，年齡18～87歲，平均(64.23±8.14)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合 2016 年WHO惡性淋巴瘤分類診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，經(jīng)病理診斷為彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤； ②行手術(shù)切除患者，且手術(shù)前未行放、化療治療；③臨床資料完整； ④患者簽署自愿受試同意書及知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：① 合并腦血管疾?。虎诤喜⑵渌麗盒阅[瘤患者；③合并其他器官嚴(yán)重性病變患者。

1.2 免疫組化法檢測(cè)PD-1、PD-L1表達(dá)

4%中性甲醛固定標(biāo)本，經(jīng)脫水、石蠟包埋，切片后分別進(jìn)行HE及免疫組化染色，光鏡顯微鏡下觀察組織形態(tài)學(xué)特征。采用PV600二步法，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，用已知陽性組織作為陽性對(duì)照。結(jié)果判定：PD-1陽性染色定位于細(xì)胞質(zhì)，呈黃色或棕黃色，當(dāng)著色細(xì)胞≥5%時(shí)可定義為陽性。PD-L1陽性染色定位于細(xì)胞膜，呈黃色或棕黃色，當(dāng)著色細(xì)胞≥5%時(shí)定義為陽性。

1.3 隨訪及預(yù)后評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

采用門診隨訪或電話隨訪的方式，隨訪截止日期為2021年5月1號(hào)。根據(jù)世界衛(wèi)生組織制定的療效標(biāo)準(zhǔn)[5]，記錄患者術(shù)后1年的近期療效

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 PD-1表達(dá)與DLBCL臨床病理特征的關(guān)系

腫瘤細(xì)胞中PD-1表達(dá)與患者的年齡、性別、CD5、HANs分型、EBER、CD30無相關(guān)性(P>0.05)。微環(huán)境細(xì)胞中PD-1表達(dá)與患者年齡、性別、CD5、EBER無相關(guān)性(P>0.05)，與Non-GCB 型、CD30相關(guān)，其中Non-GCB 型、CD30陰性患者中微環(huán)境細(xì)胞中PD-1陽性表達(dá)率顯著高于GCB 型、CD30陽性患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 PD-1表達(dá)與DLBCL臨床病理特征的關(guān)系/例

2.2 PD-L1表達(dá)與DLBCL臨床病理特征的關(guān)系

腫瘤細(xì)胞中PD-L1表達(dá)與患者的年齡、性別、CD5、HANs分型、EBER、CD30無相關(guān)性(P>0.05)，微環(huán)境細(xì)胞中PD-L1表達(dá)與患者年齡、性別、HANs分型、CD30無相關(guān)性(P<0.05)，與CD5陰性、EBER相關(guān)，其中CD5陰性、EBER陰性患者中微環(huán)境細(xì)胞中PD-L1陽性表達(dá)率顯著高于CD5陽性、EBER陽性患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 PD-L1表達(dá)與DLBCL臨床病理特征的關(guān)系/例

2.3 微環(huán)境細(xì)胞中PD-1、PD-L1表達(dá)與DLBCL患者療效的關(guān)系

PD-1、PD-L1陰性表達(dá)患者的治療總有效率明顯高于PD-1、PD-L1陽性表達(dá)患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 PD-1、PD-L1表達(dá)與DLBCL患者療效的關(guān)系/例

2.4 微環(huán)境細(xì)胞中PD-1和PD-L1表達(dá)與DLBCL患者預(yù)后生存率的關(guān)系

DLBCL患者組織中PD-1陽性表達(dá)者3年預(yù)后生存率為66.67%(8/12)，明顯低于陰性表達(dá)者89.58%(43/48)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.954，P<0.05)；PD-L1陽性患者3年預(yù)后生存率為63.16%(12/19)，明顯低于陰性表達(dá)者87.80%(36/41)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.929，P<0.05)。

3 討論

DLBCL屬于常見的非霍奇金淋巴瘤類型，是一種高度惡性侵襲性淋巴瘤，其在形態(tài)學(xué)、細(xì)胞學(xué)、免疫組織化學(xué)表型、化療敏感性及預(yù)后等方面均表現(xiàn)出異質(zhì)性[6]。目前，免疫缺陷是DLBCL的危險(xiǎn)因素，腫瘤浸潤(rùn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞作為腫瘤微環(huán)境細(xì)胞的重要組成部分，腫瘤微環(huán)境可以通過破壞癌細(xì)胞或抑制其生長(zhǎng)來抑制腫瘤生長(zhǎng)，也可以通過建立促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的條件來促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展[7]。近期，免疫治療已成為腫瘤領(lǐng)域中最有前景的治療措施，腫瘤免疫治療是指通過機(jī)體自身的免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)抗腫瘤免疫能力，從而達(dá)到抑制和殺傷腫瘤細(xì)胞的目的[8-9]。

PD-1是B7受體家族成員，是活化T細(xì)胞和B細(xì)胞表面的抑制性信號(hào)受體，PD-1和PD-L1結(jié)合后可成為重要的免疫檢查點(diǎn)，在腫瘤的免疫逃避及抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用[10]。具體機(jī)制是PD-1在T細(xì)胞激活后活化于T細(xì)胞表面，與其配體結(jié)合后引起SHP1、SHP-2募集及下游信號(hào)分子去磷酸化，從而導(dǎo)致細(xì)胞因子減少，導(dǎo)致T細(xì)胞增殖受到抑制，正常的免疫平衡被打破[11-12]。有研究證實(shí)，PD-L1信號(hào)通路可通過抑制T細(xì)胞功能，從而抑制腫瘤免疫應(yīng)答，多種實(shí)體腫瘤均出現(xiàn)PD-L1表達(dá)上調(diào)的現(xiàn)象[13-14]。已有研究證實(shí)PD-1/PD-L1抑制劑在淋巴瘤中療效顯著[15]。然而有研究指出DLBCL患者中PD-1表達(dá)水平與患者預(yù)后密切相關(guān)，而PD-L1表達(dá)與患者的預(yù)后無相關(guān)性[16]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Non-GCB 型、CD30陰性患者中微環(huán)境細(xì)胞中PD-1陽性表達(dá)率顯著高于GCB 型、CD30陽性；CD5陰性、EBER陰性患者中微環(huán)境細(xì)胞中PD-1陽性表達(dá)率顯著高于CD5陽性、EBER陽性患者。GCB亞型和Non-GCB亞型分別來源于正常生發(fā)中心B細(xì)胞與活化的外周血記憶B細(xì)胞，有研究證實(shí)GCB亞型5年生存率明顯高于Non-GCB亞型[16]。這與Non-GCB亞型患者PD-L1陽性表達(dá)率顯著高于GCB亞型的結(jié)果一致。PD-1、PD-L1陰性表達(dá)患者的總有效率及3年預(yù)后生存率明顯高于PD-1、PD-L1陽性表達(dá)患者，這與已有的研究報(bào)道一致[17]。

本試驗(yàn)作為回顧性研究，存在一定的局限性，首先是樣本量相對(duì)較少，可能導(dǎo)致最終結(jié)果出現(xiàn)偏倚，其次本試驗(yàn)使用的部分組織存儲(chǔ)時(shí)間較長(zhǎng)，可能存在蛋白部分降解的情況。因此，還需要更加擴(kuò)大樣本量、提高各項(xiàng)檢測(cè)技術(shù)等來驗(yàn)證結(jié)果。

綜上所述，PD-1、PD-L1表達(dá)與彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者HANs分型、CD30、EBER表達(dá)等臨床病理特征以及預(yù)后具有相關(guān)性，可將其作為疾病病情以及預(yù)后的重要生物學(xué)指標(biāo)。