反相高效液相色譜法測定加味四妙丸中迷迭香酸的含量

痛風(fēng)是指人體內(nèi)嘌呤代謝紊亂或尿酸排泄減少， 從而導(dǎo)致尿酸在人體內(nèi)關(guān)節(jié)等處沉積而引起的一組臨床綜合征， 長期的高血尿酸是引發(fā)痛風(fēng)的必要條件

。高血尿酸是痛風(fēng)最重要的生化基礎(chǔ)，也是誘發(fā)痛風(fēng)發(fā)生和發(fā)展的最危險(xiǎn)因素，因此控制血尿酸水平是治療和預(yù)防痛風(fēng)發(fā)生的關(guān)鍵，治療痛風(fēng)應(yīng)從降低血尿酸濃度入手， 通過藥物降低血中尿酸的含量，是預(yù)防痛風(fēng)發(fā)生的有效方法

。

“四妙丸”原方出自清代張秉成的《成方便讀》，是以朱丹溪的“二妙丸”為基礎(chǔ)，加牛膝、薏苡仁兩味藥材而成

，同時(shí)四妙丸被《中華人民共和國藥典》所收載

，具有清熱利濕的功效，用于濕熱下注所致痹癥的治療，癥見足膝紅腫、筋骨疼痛。在中醫(yī)臨床上常以四妙丸為基本方治療痛風(fēng)

。

“加味四妙丸”是在四妙丸基礎(chǔ)上加夏枯草、白術(shù)等藥物而成，方中重用夏枯草，其有效成分為迷迭香酸。現(xiàn)代研究表明

，人體攝入嘌呤類物質(zhì)后，需要在黃嘌呤氧化酶的作用下生成尿酸，而迷迭香酸是黃嘌呤氧化酶抑制劑，可抑制尿酸的生成。迷迭香酸廣泛存在于各類植物中，尤以唇形科植物中含量較高

。《中華人民共和國藥典》規(guī)定夏枯草藥材中迷迭香酸的含量不得低于0.2%

。有研究表明，不同產(chǎn)地夏枯草藥材中迷迭香酸的含量可達(dá)0.2%～2.3%

。本文采用反相高效液相色譜法建立加味四妙丸中迷迭香酸的含量測定方法，期望能有效控制加味四妙丸的內(nèi)在質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-10ATVP 高效液相色譜儀（日本島津）；SPD-10AVP 紫外吸收檢測器（日本島津）；SS420X 型色譜工作站（美國科學(xué)系統(tǒng)公司）；AUW120D 型電子天平（日本島津）。

1.2 試藥

迷迭香酸對(duì)照品（批號(hào)：111871-201203，中國食品藥品檢定研究院）；甲醇（美國飛世爾公司），乙腈（美國飛世爾公司）；水為蒸餾水；其他試劑均為分析純；加味四妙丸及加味四妙丸陰性樣品（吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院制劑室，批號(hào)：20211001、20211006、20211007、20211000）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

堅(jiān)持把培育和引進(jìn)創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)人才作為支撐綠色發(fā)展戰(zhàn)略的關(guān)鍵舉措來抓，真正把人才作為創(chuàng)新發(fā)展的核心要素和破解發(fā)展難題的“金鑰匙”，以人才創(chuàng)新驅(qū)動(dòng)新舊動(dòng)能轉(zhuǎn)換。

2.2 溶液的制備

取加味四妙丸（批號(hào)：20211001）樣品，制備6 份供試品溶液，分別按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件檢測，計(jì)算迷迭香酸含量，結(jié)果顯示，平均含量為469.2 mg/袋，RSD 為1.60%。

沒有人會(huì)否認(rèn)，支撐一座城市持續(xù)向前發(fā)展的動(dòng)力是人才，而人才的培養(yǎng)要依靠教育。廣州之所以有如此強(qiáng)勁的發(fā)展動(dòng)力和發(fā)展態(tài)勢，就在于高品質(zhì)、有活力的教育為城市發(fā)展提供了一批又一批高素質(zhì)的人才。

取加味四妙丸（批號(hào)：20211001，迷迭香酸含量為46.8 mg/g）樣品0.1 g，精密稱定，共計(jì)6 份，分別精密加入迷迭香酸對(duì)照品5.0 mg，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測定，計(jì)算回收率，測定結(jié)果見表2。結(jié)果顯示，平均回收率為96.14%，RSD 為0.55%。

聽覺型學(xué)習(xí)風(fēng)格：學(xué)習(xí)者通過口語及口頭講解來學(xué)習(xí)，通過大聲朗讀或小聲閱讀來幫助記憶，尤其在學(xué)習(xí)新知識(shí)的時(shí)候。

由圖3可見，隨著再生混凝土中鋼纖維摻量的增加，劈裂抗拉強(qiáng)度也隨之增長，劈裂抗拉強(qiáng)度比基體混凝土增長得更多。其原因可能是在劈裂抗拉時(shí)，鋼纖維受到豎向和橫向兩個(gè)方向的力，因此其劈裂抗拉強(qiáng)度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于普通混凝土的劈裂抗拉強(qiáng)度和鋼纖維再生混凝土的軸心抗拉強(qiáng)度。

2.3 專屬性考察

分別精密吸取“2.2.1”項(xiàng)的對(duì)照品溶液、“2.2.2”項(xiàng)的供試品溶液、“2.2.3”項(xiàng)的陰性對(duì)照溶液，按“2.1”項(xiàng)的色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1～3。結(jié)果顯示，對(duì)照品及供試品溶液色譜圖中迷迭香酸色譜峰的理論塔板數(shù)均＞3000， 陰性對(duì)照溶液色譜圖在迷迭香酸對(duì)照品相應(yīng)保留時(shí)間（18.985 min）處無吸收峰，表明處方中其他成分無干擾，專屬性好。

《知識(shí)產(chǎn)權(quán)基本法》立法目的與基本原則研究........................................................................張 鵬 趙煒楠 12.45

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取迷迭香酸對(duì)照品，加甲醇制成每1 毫升含0.1008 mg 的溶液，精密吸取此溶液2、4、8、10、12、16、18 μl，注入色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下的方法測定，結(jié)果見表1。以迷迭香酸進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y），繪制其標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示，迷迭香酸在0.2016～1.8144 μg 范圍內(nèi)， 峰面積積分值與迷迭香酸的進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=1 574 327.28X-30 084.83，相關(guān)系數(shù)r=0.9999。

2.5 精密度試驗(yàn)

取供試品溶液，精密吸取10 μl，連續(xù)進(jìn)樣6 次，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件檢測，結(jié)果顯示，迷迭香酸峰面積的RSD 為0.43 %，表明儀器系統(tǒng)精密度良好。

Apollo C

（4.60 mm×250 mm，5 μm）色譜柱，流動(dòng)相：甲醇-0.1%三氟醋酸溶液（42∶58）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：330 nm；柱溫：35℃。理論板數(shù)按迷迭香酸峰計(jì)算不得低于3000。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，精密吸取10 μl，分別于放置0、4、8、12、18、24 h 進(jìn)樣，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件檢測，結(jié)果顯示，迷迭香酸峰面積的RSD 為0.55%，表明供試品溶液在24 h 內(nèi)能保持較好的穩(wěn)定性。

2.2.2 供試品溶液的制備 取加味四妙丸適量，研細(xì)，取0.2～0.3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇100 ml，稱定重量，超聲處理（功率120 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取迷迭香酸對(duì)照品適量，精密稱定， 加甲醇制成每1 毫升含0.1 mg 的溶液，即得。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 取處方缺少夏枯草的加味四妙丸陰性樣品0.2～0.3 g，精密稱定，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備，即得陰性對(duì)照溶液。

2.9 方法耐用性考察

不同廠家的色譜柱存在性能上的差異， 為考察此方法的通用性及可行性， 分別取三個(gè)不同品牌的C

色譜柱進(jìn)行了比較，結(jié)果見表3。結(jié)果顯示，所選用的三種色譜柱均符合含量測定方法適用性的要求，色譜峰峰形對(duì)稱、尖銳，檢測峰與雜質(zhì)峰的分離度較好，且理論板數(shù)不低于2000， 說明該方法具有較好的耐用性。

2.10 樣品含量測定及含量限度的確定

取3 批加味四妙丸，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測定，計(jì)算迷迭香酸含量，結(jié)果見表4。結(jié)果顯示，3 批樣品的平均含量為468.2 mg/袋，RSD 為0.74%。

3 討論

國內(nèi)外在應(yīng)用民間草藥治療痛風(fēng)和高尿酸血癥方面均有著悠久的歷史，從中草藥等天然來源中尋找治療高尿酸血癥的藥物， 是目前藥學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。迷迭香酸在自然界植物中的分布較廣，是一種天然抗氧化劑，具有抗炎、抗病毒、抗菌、護(hù)肝等多方面的藥效藥理作用，且毒性較低

。尚雁君等

首次在體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)迷迭香酸具有黃嘌呤氧化酶抑制劑的作用，可顯著抑制尿酸的生成。而迷迭香酸是中藥夏枯草的主要有效成分之一，大量臨床及藥理研究文獻(xiàn)報(bào)道夏枯草及四妙丸可用于痛風(fēng)的治療

。

本文含量測定采用的方法為《中華人民共和國藥典》中“夏枯草”含量測定項(xiàng)下的方法，為迷迭香酸的經(jīng)典測定方法

，實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行了方法耐用性考察，包括最大吸收波長的考察及流動(dòng)相的考察。取迷迭香酸對(duì)照品溶液，在200～400 nm 波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果迷迭香酸在330 nm 波長處有最大吸收且無干擾， 故選定330 nm 作為含量測定檢測波長； 流動(dòng)相曾考察了乙腈-0.1%磷酸水溶液（梯度洗脫）、甲醇-乙腈-0.5%醋酸銨水溶液（1∶11∶88）、甲醇-0.1%三氟醋酸溶液（42∶58）三個(gè)流動(dòng)相系統(tǒng)

，結(jié)果顯示在甲醇-0.1%三氟醋酸溶液（42∶58）系統(tǒng)中，樣品分離度符合要求，故擬定流動(dòng)相為甲醇-0.1%三氟醋酸溶液（42∶58）。采用甲醇作為供試品溶液的提取溶劑，提取率高，且方法簡便易行。

基準(zhǔn)站和流動(dòng)站是工程項(xiàng)目測量的基礎(chǔ)性工作站，其選擇的科學(xué)性、合理性等直接關(guān)系著整個(gè)測量過程。因此，建議采取有效措施，精準(zhǔn)選擇工作站：(1)在測量中心選擇基準(zhǔn)站位置，保持各區(qū)域的距離基本相同；(2)工作站上空區(qū)域盡可能減少大面積的遮擋物，避免產(chǎn)生多路徑效應(yīng)，進(jìn)而影響信號(hào)的接收與傳輸；(3)工作站區(qū)域內(nèi)盡量避開大型障礙區(qū)、大面積水環(huán)境、電視及網(wǎng)絡(luò)等的信號(hào)設(shè)施、高壓線等可能產(chǎn)生磁場信號(hào)干擾等；(4)工作站區(qū)域內(nèi)盡可能保持視野開闊，地勢盡量較高，避免衛(wèi)星信號(hào)和數(shù)據(jù)鏈傳輸受到影響。

綜上所述， 本文建立的加味四妙丸中有效成分迷迭香酸的含量測定方法簡便、快速，可作為藥品的質(zhì)量控制指標(biāo)。

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