超聲造影定量參數(shù)聯(lián)合血清miR-211檢驗對甲狀腺結(jié)節(jié)鑒別診斷的價值*

王暢, 王宏偉, 馬釗, 熊輝

南陽市第一人民醫(yī)院 1超聲醫(yī)學科， 2甲狀腺乳腺外科(河南南陽 473000)

甲狀腺結(jié)節(jié)是一種臨床常見病，近年來檢出率呈逐年增長趨勢，有調(diào)查顯示[1]，普通人群中4%～7%可能會觸診甲狀腺結(jié)節(jié)，影像學檢查發(fā)現(xiàn)甲狀腺結(jié)節(jié)發(fā)病率更是高達30%～67%。該病腫塊位于甲狀腺內(nèi)，且伴隨吞咽在甲狀腺內(nèi)隨之上下移動，多因多種病因而引發(fā)，常見于女性[2]。盡管大部分甲狀腺結(jié)節(jié)屬于良性，但仍有20%左右的概率是惡性腫瘤[3]。因此，甲狀腺結(jié)節(jié)診治的關(guān)鍵是鑒別良惡性，鑒別診斷方法的準確性及高效性極為重要[4]。常規(guī)超聲作為鑒別甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性的有效手段，可通過觀察結(jié)節(jié)的回聲、邊緣、形態(tài)等方面進行評估，但許多患者在接受檢查時常受本身主觀及儀器因素的影響，而導致診斷結(jié)果存在誤差[5]。近年來，超聲造影(contrast-enhanced ultrasound，CEUS)在鑒別甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性方面發(fā)揮越來越重要的作用，其定量分析可避免由受檢者本身主觀原因及儀器條件帶來的誤差[6]。miRNA是一種含19～23個堿基的非編碼的小分子RNA，它能夠從轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)基因表達，如降解mRNA、抑制蛋白翻譯等[7]。有不少研究發(fā)現(xiàn)，miR-211能調(diào)控多種腫瘤細胞的遷移能力，在不同的細胞類型中，miR-211通過調(diào)控不同的靶基因，來發(fā)揮相應的作用[8-9]。miR-211在甲狀腺結(jié)節(jié)中的研究較少，因此，本研究對CEUS檢查與血清miR-211水平在甲狀腺結(jié)節(jié)中的鑒別診斷價值進行了探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年3月至2021年3月在本院進行檢查的260例甲狀腺結(jié)節(jié)患者為研究對象，男88例，女172例，平均年齡為(51.78±8.13)歲。納入標準：(1)首次發(fā)病并確診，未經(jīng)治療；(2)所有受試者均通過病理檢查，以病理結(jié)果為診斷金標準；(3)患者及家屬均知情同意；(4)均接受CEUS檢查。排除標準：(1)合并亞臨床甲狀腺功能減退及臨床甲狀腺功能減退者；(2)合并其他內(nèi)分泌及自身免疫性疾病患者；(3)身體狀況較差的患者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準通過(編號：2020-LW-09)。

1.2 研究方法

1.2.1 常規(guī)超聲與CEUS檢查 常規(guī)超聲檢查：患者平臥，頸后部適度墊枕，充分暴露頸前部甲狀腺區(qū)域；使用常規(guī)二維超聲獲得結(jié)節(jié)所在部位、大小、形態(tài)、數(shù)量、邊界及內(nèi)部回聲等信息，并留取圖像。CEUS檢查：采用PHILIPS iU22超聲診斷儀，L9-3探頭及頻率5～10 MHz進行CEUS檢查。造影劑選用SonoVue(意大利Bracco公司)，使用時取25 mg溶解于5 mL生理鹽水，即為造影劑溶液，推注造影劑溶液(每次用量為1.5 mL)至肘部淺靜脈，同時按下計時鍵，持續(xù)采集至少120 s的動態(tài)圖像，并存儲于硬盤中。

圖像分析：采用TOMTEC公司的SonoLiver CAP軟件勾畫正常甲狀腺組織及結(jié)節(jié)邊緣、中心顯像最強區(qū)的感興趣區(qū)，繪制時間強度曲線并獲取CEUS定量參數(shù)，包括達峰時間(TTP)、平均渡越時間(MTT)、上升時間(RT)及曲線下面積(AUCCEUS)。

1.2.2 血清標本采集 所有患者均于入院第2天清晨空腹狀態(tài)下抽血，每例5 mL，3 000 r/min離心10 min后，將血清吸至潔凈的離心管中，再離心10 min，完全除去血細胞成分后置于-80℃低溫冰箱保存。

1.2.3 qRT-PCR法檢測血清miR-211水平 按照RNA提取試劑盒(北京天根生化科技有限公司)說明書提取血清中總RNA，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(德國Qiagen公司)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。使用特異性引物和SYBR Prellix Ex TaqTM實時PCR試劑盒(德國Qiagen公司)進行PCR擴增，反應條件為：94℃預變性5 min，94℃ 30 s變性、55℃ 30 s退火、72℃ 90 s延伸，共40個循環(huán)。以U6作為miR-211表達的內(nèi)參，根據(jù)公式2-ΔΔCt計算miR-211的表達水平。引物序列見表1。

2 結(jié)果

2.1 病理和影像結(jié)果 由病理結(jié)果得到，有44例患者檢測到甲狀腺結(jié)節(jié)惡性，為惡性組；有216例患者僅檢測到甲狀腺結(jié)節(jié)良性，為良性組。甲狀腺良惡性結(jié)節(jié)超聲圖見圖1、2。

注：男性，57歲，左側(cè)甲狀腺結(jié)節(jié)。A：常規(guī)超聲檢查顯示結(jié)節(jié)大小約7 mm，一點低回聲，邊緣不規(guī)則；B：CEUS檢查顯示無強化，形態(tài)不規(guī)則

注：女性，41歲，右側(cè)甲狀腺結(jié)節(jié)。A：常規(guī)超聲檢查顯示結(jié)節(jié)大小約8.6 mm，明顯低回聲，邊緣不規(guī)則，有點狀回聲灶；B：CEUS檢查顯示低增強、邊界不清、形態(tài)不規(guī)則和異質(zhì)性增強，為甲狀腺乳頭狀癌

2.2 兩組間CEUS定量參數(shù)比較 兩組CEUS定量參數(shù)TTP、RT比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；惡性組患者CEUS定量參數(shù)MTT、AUCCEUS均明顯少于良性組(P<0.05)。見表2及圖3、4。

表2 甲狀腺良惡性結(jié)節(jié)CEUS定量參數(shù)比較

注：女性，46歲，左側(cè)甲狀腺結(jié)節(jié)，MTT為50.88 s，AUCCEUS為1 723.59 %s

注：女性，53歲，右側(cè)甲狀腺結(jié)節(jié)，MTT為31.05 s，AUCCEUS為941.63 %s

2.3 兩組間血清miR-211水平比較 惡性組患者血清miR-211水平明顯高于良性組(P<0.05)。見表3。

表3 血清miR-211水平比較

2.4 CEUS定量參數(shù)、miR-211單獨及二者聯(lián)合檢測對甲狀腺結(jié)節(jié)的鑒別診斷 ROC預測CEUS定量參數(shù)(MTT、AUCCEUS)、血清miR-211水平對甲狀腺結(jié)節(jié)的鑒別診斷價值，結(jié)果顯示，CEUS定量參數(shù)MTT對甲狀腺結(jié)節(jié)鑒別診斷的AUCROC為0.786，敏感度為70.5%，特異度為79.6%，95%CI為0.701～0.871；CEUS定量參數(shù)AUCCEUS對甲狀腺結(jié)節(jié)鑒別診斷的AUCROC為0.840，敏感度為79.5%，特異度為80.6%，95%CI為0.772～0.908；血清miR-211水平對甲狀腺結(jié)節(jié)鑒別診斷的AUCROC為0.751，敏感度為88.9%，特異度為59.1%，95%CI為0.659～0.843；CEUS定量參數(shù)(MTT、AUCCEUS)與miR-211聯(lián)合鑒別診斷甲狀腺結(jié)節(jié)的AUCROC為0.928，敏感度為77.8%，特異度為95.4%，95%CI為0.886～0.970。見表4、圖5。

表4 CEUS定量參數(shù)與血清miR-211水平對甲狀腺結(jié)節(jié)的鑒別診斷價值

圖5 CEUS定量參數(shù)與血清miR-211水平鑒別診斷甲狀腺結(jié)節(jié)的ROC曲線

3 討論

甲狀腺結(jié)節(jié)是由遺傳、環(huán)境等多因素導致的甲狀腺內(nèi)出現(xiàn)一個或多個異常的團塊結(jié)構(gòu)，是臨床最常見的甲狀腺疾病[10]。甲狀腺結(jié)節(jié)可單發(fā)、可多發(fā)，多發(fā)結(jié)節(jié)的發(fā)病率較高。且大多數(shù)患者無自覺癥狀，因此，甲狀腺結(jié)節(jié)的觸診漏診率較高，多由健康體檢超聲檢查發(fā)現(xiàn)[11]。有調(diào)查顯示[12]，近年來，隨著社會環(huán)境、生活習慣及飲食結(jié)構(gòu)的變化，甲狀腺結(jié)節(jié)的患病率逐年上升，我國甲狀腺結(jié)節(jié)平均檢出率明顯升高。雙功超聲掃查普遍應用于臨床工作中甲狀腺結(jié)節(jié)的早期篩查與良惡性結(jié)節(jié)的鑒別診斷[13]。但常規(guī)超聲圖像中良性結(jié)節(jié)與惡性結(jié)節(jié)存在一定程度的相似性，對于良惡性結(jié)節(jié)的鑒別存在一定局限性[14]。因此，尋找新的鑒別診斷指標十分關(guān)鍵。

近年來，隨著造影劑SonoVue的發(fā)展并在CEUS檢查中廣泛應用，臨床醫(yī)生更容易觀察到甲狀腺結(jié)節(jié)內(nèi)血管分布及血流灌注情況，可作為常規(guī)超聲的輔助診斷[15]。CEUS操作方便、無輻射，可通過對比增強顯像，實時動態(tài)觀察甲狀腺周圍微循環(huán)情況，較常規(guī)超聲能更直觀的反映腫瘤血管的走行和分布，同時CEUS定量參數(shù)能客觀評估甲狀腺結(jié)節(jié)的良惡性[16]。施燕蕓等[17]研究結(jié)果表明，觀察CEUS定量參數(shù)AUCCEUS有利于區(qū)別甲狀腺良惡性結(jié)節(jié)，CEUS可彌補常規(guī)超聲的不足為甲狀腺良惡性結(jié)節(jié)的診斷提供更多有利信息。本研究結(jié)果顯示，惡性組患者CEUS定量參數(shù)MTT、AUCCEUS均明顯低于良性組，與施燕蕓等[17]研究相似，提示CEUS定量參數(shù)MTT、AUCCEUS與甲狀腺結(jié)節(jié)的良惡性有一定關(guān)系。進一步采用CEUS定量參數(shù)MTT、AUCCEUS的數(shù)據(jù)進行ROC分析，結(jié)果顯示，CEUS定量參數(shù)MTT、AUCCEUS對甲狀腺結(jié)節(jié)鑒別診斷的AUCROC分別為0.786、0.840，敏感度分別為70.5%、79.5%，特異度為分別為79.6%、80.6%，提示檢測CEUS定量參數(shù)MTT、AUCCEUS能夠在一定程度上為甲狀腺結(jié)節(jié)進行鑒別診斷提供依據(jù)。

miR-211是miRNA家族中位于人類染色體Xp11.3位置的成員，miR-211分子結(jié)構(gòu)較短，穩(wěn)定性較高，能夠識別轉(zhuǎn)移位點的惡性腫瘤組織的來源[18]。大量研究均發(fā)現(xiàn)，miR-211在許多實體惡性腫瘤中存在異常表達，如在乳腺癌、胃癌、原發(fā)性肝細胞肝癌及卵巢癌等惡性腫瘤組織中為高表達，即miR-211發(fā)揮促癌基因的功能[19-21]。但也有研究表明，miR-211在宮頸癌及腦膠質(zhì)瘤等惡性腫瘤中呈低表達，即發(fā)揮抑癌基因的功能[22-23]。研究表明miR-211在不同組織及疾病中發(fā)揮不同作用，而其在甲狀腺結(jié)節(jié)中的研究較少。因此，本研究對miR-211在甲狀腺結(jié)節(jié)中的表達及其鑒別診斷價值進行了探究，結(jié)果顯示，惡性組甲狀腺結(jié)節(jié)患者血清中miR-211水平顯著高于良性組患者血清中表達，猜測血清miR-211水平可能能部分反映甲狀腺結(jié)節(jié)的良惡性。另ROC結(jié)果顯示，血清miR-211水平對甲狀腺結(jié)節(jié)鑒別診斷的AUCROC為0.751，敏感度為88.9%，特異度為59.1%；miR-211與CEUS定量參數(shù)MTT、AUCCEUS聯(lián)合鑒別診斷甲狀腺結(jié)節(jié)的AUCROC為0.928，敏感度為77.8%，特異度為95.4%。提示血清miR-211水平能夠作為甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性鑒別診斷的生物學指標，且CEUS定量參數(shù)MTT、AUCCEUS與miR-211水平聯(lián)合診斷的AUCROC和特異度相對較高，對甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性的鑒別具有良好的診斷價值，更有利于為甲狀腺結(jié)節(jié)的鑒別診斷提供依據(jù)。

綜上所述，CEUS定量參數(shù)MTT在惡性組明顯縮短，AUCCEUS在惡性組明顯減少，miR-211在惡性組顯著高表達，CEUS定量參數(shù)MTT、AUCCEUS聯(lián)合miR-211對甲狀腺結(jié)節(jié)的良惡性鑒別具有更好的診斷價值。

利益相關(guān)聲明：本研究不存在有關(guān)的利益沖突。

作者貢獻說明：王暢負責提出研究選題、設計方案、獲取經(jīng)費、技術(shù)或材料支持，實施研究過程，采集整理數(shù)據(jù)，起草論文；王宏偉給予指導性支持；馬釗負責配合整理數(shù)據(jù)、完善分析數(shù)據(jù)、整理文獻；熊輝負責修改論文。