rhIL-2聯(lián)合冷凍療法對子宮頸炎合并HPV感染患者免疫功能、氧化應(yīng)激的影響

張裕龍 張裕斌 姜俊敏

HPV 作為雙鏈DNA 病毒，是誘發(fā)女性子宮頸癌及癌前病變的主要危險因素，主要表現(xiàn)為白帶異常、性交痛等，且極易復(fù)發(fā)，對患者身心健康及生活質(zhì)量產(chǎn)生嚴(yán)重影響[1]。目前，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療HPV尚未完全明確。冷凍療法作為臨床常見手段，其主要利用制冷劑快速產(chǎn)生的低溫對宮頸病變組織局部的血液循環(huán)產(chǎn)生阻滯，從而促進組織修復(fù)。而西藥作為臨床主要治療手段，其療效表現(xiàn)不一[2-3]。注射用重組人白介素-2（rhIL-2）作為常用藥物可有效促進淋巴細胞生長、分化，具有良好抗病毒感染作用，在改善HPV 感染方面發(fā)揮顯著效果。但有研究指出，單一治療方案雖可有效改善患者癥狀，但仍有部分患者難以達到預(yù)期療效，為進一步提高治療效果，多考慮聯(lián)合治療方案[4-5]。本研究通過rhIL-2 結(jié)合冷凍療法治療HPV 感染患者，研究其對氧化應(yīng)激、炎癥因子水平的影響，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020 年1-12 月泰和縣中醫(yī)院收治的97 例子宮頸炎合并HPV 感染患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合文獻[6]《HPV 感染疾病相關(guān)問題專家共識（2017）》中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，陰道B 超、細胞學(xué)及病理活檢等檢查確診為子宮頸炎合并HPV 感染；（2）存在接觸性出血、白帶異常等癥狀；（3）高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）為陽性。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）心腎等器質(zhì)性功能不全；（2）合并子宮頸異常出血、子宮頸上皮內(nèi)瘤變；（3）合并子宮內(nèi)膜或子宮頸惡性病變；（4）妊娠期、哺乳期婦女；（5）合并免疫缺陷類疾??；（6）近1 個月接受過相關(guān)治療；（7）對本研究藥物存在禁忌證。使用隨機數(shù)字表法將患者分為對照組48 例和觀察組49 例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，嚴(yán)格遵循倫理原則，患者及其家屬知情同意。

1.2 方法 對照組采用單純冷凍療法（ErbokoCA多功能冷凍治療儀）治療，于月經(jīng)周期結(jié)束后3 d接受治療。根據(jù)病變范圍及深度確定不同型號的探頭，探頭消毒，將探頭面覆蓋病灶，通電制冷后接觸宮頸，使用CO2氣體冷凍病灶組織表面。治療時需將冷凍探頭接觸子宮頸2 次，3 min/次，間隔5 min 施以解凍，1 次/月。觀察組給予冷凍療法聯(lián)合rhIL-2（生產(chǎn)廠家：北京四環(huán)生物制藥有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字S10970017，規(guī)格：20 萬IU）治療，將100 萬U 注射用rhIL-2 結(jié)合2 mL 滅菌注射用水，經(jīng)皮下注射給藥，1～2 次/周。冷凍療法同對照組。兩組均連續(xù)治療2 個月。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1 比較兩組治療前后臨床體征評分 包括陰道分泌物異常、子宮頸炎癥深度、子宮頸炎癥面積。陰道分泌物異常：陰道分泌物白帶正常顏色為白色、透明且無異味，而子宮頸炎患者的白帶為有顏色或有異味。子宮頸炎癥深度：根據(jù)患者炎癥沿闊韌帶底部蔓延深度判斷子宮頸炎癥深度。子宮頸炎癥面積：根據(jù)患者炎癥沿子宮骶韌帶擴展范圍判斷子宮頸炎癥面積。根據(jù)患者臨床特征的嚴(yán)重程度進行打分，每項評分的范圍為0～5 分，評分越低，說明癥狀越輕，表示患者經(jīng)治療后不良體征的改善情況越好，治療效果越好。

1.3.2 比較兩組疾病轉(zhuǎn)歸情況 包括HPV-DNA 載量和轉(zhuǎn)陰情況。HPV-DNA 載量測定：以無菌棉拭子于子宮頸管內(nèi)旋轉(zhuǎn)停留幾秒后取出，以1 mL 無菌生理鹽水洗脫，提取細胞總RNA，對其含量、純度進行檢測，逆轉(zhuǎn)錄處理后獲得cDNA，使用Primer 5.0 軟件設(shè)計引物，采用2-△△Ct方法計算，內(nèi)參U6。設(shè)置反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件：25 ℃ 10 min，40 ℃60 min，85 ℃ 5 min；設(shè)置擴增條件：94 ℃ 20 s、72 ℃30 s、60 ℃ 30 s，35個循環(huán)。RLU/CO 是HPV 檢測中的判斷標(biāo)準(zhǔn)。如果檢測樣本中RLU/CO≥1.0，則為宮頸的人乳頭瘤病毒感染為陽性，通常RLU/CO 的值越高，則表示感染的越嚴(yán)重。如果RLU/CO<1.0，則為宮頸的人乳頭瘤病毒感染為陰性。

1.3.3 比較兩組免疫功能指標(biāo) 分別于兩組治療前后采集空腹外周靜脈血5 mL，常溫靜置，高速離心（轉(zhuǎn)速：3 000 r/min，半徑：12 cm）10 min，分離上清，采用雙抗體夾心ELISA 法測定血清IgA、IgG、IgM 水平，設(shè)置酶標(biāo)板為空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔，每孔內(nèi)均加入50 μL 稀釋液，后依次加入樣品稀釋液、標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣片各50 μL，輕晃均勻，酶標(biāo)板覆膜，室溫孵育2 h。棄孔內(nèi)液體，甩干，清洗反應(yīng)板。加入IgA、IgG、IgM 檢測液100 μL/孔，覆膜，常溫孵育60 min，棄液體，甩干、洗滌反應(yīng)板，加入100 μL/孔底物溶液，遮光顯色0.5 h，加入終止液，輕彈酶標(biāo)板終止反應(yīng)。酶標(biāo)儀（型號iMark，Bio-RAD 公司）450 nm 處測定吸光值，由高資歷檢驗醫(yī)生嚴(yán)格遵循試劑說明書進行操作。

1.3.4 比較兩組超氧化物歧化酶（SOD）水平 分別采集兩組治療前后空腹外周靜脈血5 mL，常溫靜置，高速離心（轉(zhuǎn)速：3 000 r/min，半徑：12 cm）10 min，分離上清，采用黃嘌呤氧化酶法測定，取聚苯乙烯試管，將其分為測量管、對照管。提取樣品后，于上清中加蒸餾水，體積是上清的10 倍，將樣品配制為濃度1%。加1.0 mL 試劑盒內(nèi)試劑于測量管、對照管，在試劑1、2、3、4 內(nèi)各加入0.1 mL，然后測量管加入樣品50 μL，在對照管內(nèi)加50 μL 蒸餾水，待加樣后，利用旋渦混勻器混勻，恒溫水浴箱內(nèi)放置40 min。顯色：加入2 mL 顯色劑于對照管、測量管內(nèi)，室溫放置10 min。在波長550 nm，1 cm 光徑條件下比色，根據(jù)分光光度計算。

1.3.5 比較兩組治療前后丙二醛（MDA）水平 采用硫代巴比妥酸法測定，取用聚苯乙烯試管，將其分為標(biāo)準(zhǔn)管、標(biāo)準(zhǔn)空白管及測量管、測量空白管，分別在標(biāo)準(zhǔn)管中加入10 nmol/L 四乙氧基丙烷0.1 mL與試劑盒試劑，加0.1 mL 無水乙醇、試劑于標(biāo)準(zhǔn)空白管，加入0.1 mL 肌肉組織勻漿上清液、試劑于測量管，測量空白管加肌肉組織勻漿0.1 mL 的上清液與試劑，充分混勻，標(biāo)準(zhǔn)管、標(biāo)準(zhǔn)空白管、測量管均置入3 mL 的硫代巴比妥酸與1 mL 的雙蒸水，依次加入3 mL 硫代巴比妥酸與50%冰醋酸1 mL 于測量空白管內(nèi)?；靹?，保鮮薄膜扎緊試管口，留一針孔，95 ℃水浴40 min，使用后流水進行冷卻，高速離心10 min，分離上清，加入比色皿內(nèi)待檢，使用蒸餾水調(diào)零分光光度計算出MDA 值。

1.3.6 比較兩組療效 治療后評估兩組臨床療效，顯效：子宮頸光滑、陰道分泌物恢復(fù)正常，兩組子宮頸糜爛面積縮小≥80%；有效：陰道分泌物減少，子宮頸糜爛面積縮小≥50%；無效：陰道分泌物未減少甚至增加，子宮頸癥狀無明顯變化甚至加重?？傆行?顯效+有效。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 20.0 軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料用（±s）表示，比較采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用χ2檢驗。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 兩組一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性，見表1。

表1 兩組一般資料比較

2.2 兩組臨床體征評分比較 治療前，兩組陰道分泌物異常、子宮頸炎癥深度、子宮頸炎癥面積評分比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；治療后，觀察組陰道分泌物異常、子宮頸炎癥深度、子宮頸炎癥面積評分均低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

表2 兩組臨床體征改善評分比較[分，（±s）]

表2 兩組臨床體征改善評分比較[分，（±s）]

2.3 兩組疾病轉(zhuǎn)歸情況比較 治療前，兩組HPVDNA 載量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。治療后，觀察組HPV-DNA 載量低于對照組，HPV 轉(zhuǎn)陰率高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

表3 兩組疾病轉(zhuǎn)歸情況比較

2.4 兩組免疫功能比較 治療前，兩組IgA、IgG、IgM 水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；治療后，觀察組IgA、IgG、IgM 水平均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表4。

表4 兩組免疫功能比較[g/L，（±s）]

表4 兩組免疫功能比較[g/L，（±s）]

2.5 兩組氧化應(yīng)激指標(biāo)比較 治療前，兩組氧化應(yīng)激指標(biāo)水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；治療后，觀察組SOD 水平高于對照組、MDA 水平低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表5。

表5 兩組氧化應(yīng)激指標(biāo)比較（±s）

表5 兩組氧化應(yīng)激指標(biāo)比較（±s）

2.6 兩組療效比較 觀察組治療總有效率為93.88%，高于對照組的77.08%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=5.538，P<0.05），見表6。

表6 兩組療效比較[例（%）]

3 討論

有研究指出，HPV 感染與化學(xué)刺激、病毒感染或?qū)m頸損傷等因素具有緊密關(guān)聯(lián)，其發(fā)病率相對較高；另外，機體發(fā)生HPV 感染后侵犯炎癥組織，從而引發(fā)子宮頸疾病[7-8]。目前，臨床尚無可根治HPV 感染的手段，多以藥物為主要原則，但單一使用療效欠佳，故尋求合理的診療對策對改善預(yù)后具有重要意義[9-10]。

冷凍療法利用溫度變化對病變組織血液循環(huán)產(chǎn)生阻滯，繼而破壞病變組織細胞，達到治療目的[11]。有研究指出，對子宮頸炎合并HPV 感染患者給予冷凍療法，可在降低神經(jīng)敏感性、不適感的同時達到收縮血管止血的目的[12-13]。rhIL-2 作為趨化細胞因子，在誘導(dǎo)細胞毒性T 細胞、自然殺傷細胞等活性增加清除機體內(nèi)腫瘤細胞的同時增強抗病毒、抗菌感染作用；另外，rhIL-2 具備免疫調(diào)節(jié)作用，可監(jiān)視機體免疫狀態(tài)，加速機體免疫力提升[14-15]。有研究指出，rhIL-2 可促進宮頸糜爛上皮的修復(fù)，控制疾病進展，加速疾病轉(zhuǎn)歸[16-17]。本文研究結(jié)果顯示，采用rhIL-2 聯(lián)合冷凍療法治療，子宮頸炎合并HPV 感染患者臨床體征評分、HPV-DNA 載量降低，提示聯(lián)合治療可顯著提升臨床療效，有效改善HPV-DNA 載量，提高HPV 轉(zhuǎn)陰率。分析其原因可能與rhIL-2 對病毒感染產(chǎn)生的抵抗作用有關(guān)，可抑制病毒、細菌感染，可由此證實藥物聯(lián)合治療方案的可行性。

本研究指出，rhIL-2 聯(lián)合冷凍療法治療子宮頸炎合并HPV 感染，患者IgA、IgG、IgM、SOD 水平升高，MDA 水平降低，且聯(lián)合療效優(yōu)于單純冷凍療法治療，可改善機體免疫能力，減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)，對促進疾病轉(zhuǎn)歸具有重要意義。分析其原因或與rhIL-2 改善巨噬細胞或漿細胞的活性激活相關(guān)。由此推測機體免疫及氧化應(yīng)激可能參與宮頸HPV 感染進展，并發(fā)揮重要作用。作為體液免疫功能指標(biāo)，IgA、IgG、IgM 水平變化與機體免疫狀態(tài)存在相關(guān)性[17-18]。有研究指出，免疫功能改善對降低HPV感染復(fù)發(fā)風(fēng)險具有重要裨益。rhIL-2 聯(lián)合冷凍療法治療子宮頸炎合并HPV 感染過程中能增強細胞免疫，從而使患者IgA、IgG、IgM 水平升高[19]。研究指出，HPV 感染致使機體處于高氧化應(yīng)激狀態(tài)，造成氧化-抗氧化防御失衡，從而影響各種疾病的發(fā)生、發(fā)展[20]。SOD、MDA 作為臨床常用氧化應(yīng)激指標(biāo)，臨床可通過測定其水平變化對機體氧化應(yīng)激程度做出直觀反應(yīng)。其中SOD 可清除機體內(nèi)氧自由基，MDA 在反映機體脂質(zhì)過氧化程度的同時對氧自由基水平做出反映。SOD 水平升高，可以起到防止細胞和組織受到氧化性損傷的作用；MDA 水平的下降，可以提高抗氧化酶的活性，減少組織細胞自由基生成增加及失控的可能[21-22]。

綜上所述，rhIL-2 聯(lián)合冷凍療法治療子宮頸炎合并HPV 感染，改善患者癥狀體征，提升機體免疫力，減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)，降低病毒載量。分析其機制可能與調(diào)節(jié)免疫功能及氧化應(yīng)激指標(biāo)水平相關(guān)，值得臨床推薦與應(yīng)用。雖研究認為給予子宮頸炎合并HPV 感染患者rhIL-2 聯(lián)合冷凍療法聯(lián)合治療效果顯著，但本文研究中未對遠期預(yù)后進行分析，致使研究存在不足，需進一步研究評估。