免疫性因素對(duì)常見(jiàn)血型意外抗體產(chǎn)生的影響探討

向 東，龔國(guó)琴，范亮峰，鄭皆煒，劉 曦，金 沙

血型意外抗體(unexpected antibodies of blood types)是指正常ABO血型中抗A、抗B之外的紅細(xì)胞血型抗體。ABO血型系統(tǒng)中抗體的產(chǎn)生遵循“蘭德斯坦納法則”，即缺乏A抗原必然產(chǎn)生抗A抗體，缺乏B抗原必然產(chǎn)生抗B抗體。然而，絕大多數(shù)血型抗體并不遵循這一法則，大部分缺乏某種血型抗原的個(gè)體并不產(chǎn)生相應(yīng)抗體，需要通過(guò)明顯的免疫刺激而產(chǎn)生，被稱(chēng)為“免疫抗體”，這些免疫刺激主要包括輸血和妊娠。少部分血型抗體似乎無(wú)需明顯的免疫刺激即可出現(xiàn)，被稱(chēng)為“天然抗體”。輸血與血型抗體的產(chǎn)生相關(guān)，據(jù)報(bào)道，每輸注10單位紅細(xì)胞，大約有0.4%的可能性使受血者產(chǎn)生意外抗體。妊娠也被認(rèn)為是血型抗體產(chǎn)生的重要原因之一，約1%的Rh陽(yáng)性孕婦體內(nèi)檢出意外抗體，較獻(xiàn)血者人群檢出率高約10倍。然而，“免疫抗體”與“天然抗體”并非截然分開(kāi)的兩種抗體。在臨床檢測(cè)中，常發(fā)現(xiàn)某些“免疫抗體”在沒(méi)有明顯免疫刺激的情況下出現(xiàn)，也發(fā)現(xiàn)妊娠中一些“天然抗體”的檢出率升高。作為主要的免疫刺激因素，輸血和妊娠產(chǎn)生的紅細(xì)胞抗體特異性分布也不盡相同。為研究常見(jiàn)血型抗體的產(chǎn)生規(guī)律，探討輸血、妊娠對(duì)不同抗體產(chǎn)生的影響差異，本研究對(duì)上海市血液中心檢出意外抗體的樣本資料進(jìn)行了回顧性分析。

1 資料與方法

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一般資料 選擇2013年3月至2022年2月于我中心進(jìn)行檢測(cè)的樣本，均由上海市及上海周邊城市醫(yī)院送檢。納入產(chǎn)生同種意外抗體者。排除直抗陽(yáng)性、自身抗體、藥物抗體(主要為抗CD38)、冷自身抗體(主要為抗I)、新生兒、無(wú)明確患者輸血和妊娠史、抗體檢出的例數(shù)≤10例及混合抗體(Kidd抗體與抗Wra抗體多伴隨其他抗體存在，未排除混合抗體)者。共1 920例符合條件入組，包含15種不同抗體特異性。根據(jù)輸血史和妊娠史，按抗體特異性將其分為4組：A組331例，有輸血史及妊娠史；B組231例，僅有輸血史；C組1 068例，僅有妊娠史；D組290例，無(wú)輸血、無(wú)妊娠史。其中有輸血史者分為多次輸血組326例和單次輸血組236例。

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試劑與儀器 實(shí)驗(yàn)中直抗均使用多特異性和單特異性抗IgG、單特異性抗C3試劑同時(shí)檢測(cè)，直抗試劑均購(gòu)自上海血液生物公司。定型試劑、抗人球蛋白試劑、酸放散試劑均購(gòu)自上海血液生物公司。毛細(xì)管離心機(jī)(BASO 2403)、微柱凝集卡(伯樂(lè)，奧森多及其配套設(shè)備)、試管離心機(jī)(日本久保田，KA2200型)、抗體鑒定細(xì)胞分別購(gòu)自Immucor公司、Sanquin公司、Reagent公司和上海血液生物公司產(chǎn)品。

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抗體檢測(cè)方法 所有患者血樣的意外抗體鑒定，除應(yīng)用試管鹽水法之外，可能單獨(dú)或聯(lián)合使用下列幾種非鹽水介質(zhì)方法，包括試管抗人球蛋白法、手工微柱凝集法、聚凝胺法(上海血液生物聚凝胺試劑)等。在對(duì)抗體反應(yīng)較弱的樣本檢測(cè)中，聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)增強(qiáng)方法被普遍應(yīng)用于試管抗人球蛋白試驗(yàn)及微柱凝集試驗(yàn)。在確定患者存在特異性意外抗體后，均檢測(cè)患者自身紅細(xì)胞的相應(yīng)抗原，相應(yīng)抗原為陰性方可確認(rèn)抗體特異性。

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統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 統(tǒng)計(jì)不同特異性抗體例數(shù)，應(yīng)用Microsoft 365 Excel中“CHISQ.TEST”進(jìn)行

χ

檢驗(yàn)。

P

<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

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1 920例血型意外抗體分布情況 入組1 920例抗體，其中Kidd系統(tǒng)抗體19例中有8例為混合抗體，抗Wra 18例中有9例為混合抗體，其余均為單獨(dú)抗體。1 920例血型意外抗體特異性及免疫史情況見(jiàn)表1。

表1 1 920例血型意外抗體特異性及免疫史情況()

組 別抗C抗Ce抗E抗Ec抗D抗DC抗Diago抗Duffy抗Kidd抗Lea抗Leb抗M抗Mur抗P1抗Wra合計(jì)A組3261605215106399227216331B組12410947711065321312231C組81523948121194731249435161191068D組1339831041378176081290合計(jì)136854715514631111419175226592121181920

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不同特異性抗體與輸血、妊娠的關(guān)系 輸血組中各抗體占比高低大致區(qū)分了常見(jiàn)的“免疫抗體”和“非免疫抗體”；而妊娠組數(shù)據(jù)呈現(xiàn)不同的分布模式?？梢?jiàn)輸血與妊娠對(duì)不同抗體的影響存在明顯差異。見(jiàn)圖1。

注：縱坐標(biāo)為減去D組數(shù)據(jù)后B組、C組在特定抗體中占比

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不同組間抗體產(chǎn)生頻率比較 B組抗E、抗Ec、抗Ce抗體檢出率高于D組，抗M、抗Lea抗體檢出率低于D組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

P

<0.05)。C組抗D、抗E抗體檢出率高于D組，抗M、抗Leb抗體檢出率低于D組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

P

<0.05)。見(jiàn)表2，3。

表2 D組與B組檢出抗體特異性及數(shù)量的比較[(%)]

抗 體D組(n=290)B組(n=231)χ2P抗M176(60.69) 21(9.09) 145.5840.000抗E39(13.45)109(47.19)71.9640.000抗Ec8(2.76)47(20.35)42.1230.000抗Ce3(1.03)24(10.39)22.9010.000抗Lea37(12.76)5(2.16)19.4710.000抗Kidd1(0.34)6(2.60)3.3690.066

續(xù)表2

抗 體D組(n=290)B組(n=231)χ2P抗P18(2.76)1(0.43)2.8410.092抗Mur0(0.00)3(1.30)1.8590.173抗Duffy4(1.38)0(0.00)1.6560.199抗D3(1.03)7(3.03)1.7640.184抗Leb8(2.76)3(1.30)0.7140.398抗Diago0(0.00)1(0.43)0.0130.909抗Wra1(0.34)2(0.87)0.0390.843抗C1(0.34)1(0.43)0.3040.581抗DC1(0.34)1(0.43)0.3040.581

表3 D組與C組檢出抗體特異性及數(shù)量的比較[(%)]

抗 體D組(n=290)C組(n=1068)χ2P抗M176(60.69)435(40.73)36.7110.000抗D3(1.03)121(11.33)29.1340.000抗E39(13.45)239(22.38)11.1710.001抗Leb8(2.76)9(0.84)5.3110.021抗P18(2.76)11(1.03)3.7670.052抗Mur0(0.00)16(1.50)3.2040.074抗DC1(0.34)19(1.78)2.3200.128抗Ec8(2.76)48(4.49)1.7380.187抗Duffy4(1.38)7(0.66)0.7230.395抗Diago0(0.00)4(0.37)0.1870.665抗Wra1(0.34)9(0.84)0.2420.623抗C1(0.34)8(0.75)0.1190.731抗Lea37(12.76)124(11.61)0.2880.592抗Ce3(1.03)15(1.40)0.0400.842抗Kidd1(0.34)3(0.28)0.1870.665

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輸血次數(shù)對(duì)不同特異性抗體產(chǎn)生的影響 多次輸血組抗Ce、抗Kidd、抗Ec抗體檢出率高于單次輸血組，抗DC、抗D抗體檢出率低于單次輸血組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

P

<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 輸血次數(shù)對(duì)不同特異性抗體產(chǎn)生的影響[(%)]

抗 體單次輸血組(n=236)多次輸血組(n=326)χ2P抗DC9(3.81)2(0.61)5.7330.017抗Ce13(5.51)37(11.35)5.7630.016抗Kidd2(0.85)13(3.99)5.1970.023抗Ec31(13.14)68(20.86)5.6270.018抗D14(5.93)8(2.45)4.4030.036抗Wra1(0.42)7(2.15)1.7800.180抗E124(52.54)145(44.48)3.5670.059抗Lea8(3.39)6(1.84)1.3530.245抗Duffy2(0.85)1(0.31)0.0790.778抗Leb3(1.27)2(0.61)0.1330.716抗C2(0.85)2(0.61)0.0330.855抗M21(8.90)27(8.28)0.0670.797抗P11(0.42)1(0.31)0.2380.626抗Mur2(0.85)3(0.92)0.1330.716抗Diago3(1.27)4(1.23)0.1150.735

2

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輸血、妊娠因素對(duì)意外抗體的影響 不同特異性意外抗體在A組與B組分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

χ

=15.400，

P

=0.350)，與C組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

χ

=287.000，

P

=0.000)。D組意外抗體特異性分布與B組和C組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

χ

=241.000，

P

=0.000；

χ

=81.000，

P

=0.000)。

3 討論

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1

本回顧性研究中涉及的意外抗體資料，均來(lái)自有明確輸血史和妊娠史的患者，就抗體特異性分布而言，結(jié)果與國(guó)內(nèi)相關(guān)報(bào)道基本一致；與國(guó)外相關(guān)報(bào)道比較，除了在Kell系統(tǒng)和Duffy系統(tǒng)中，因人群血型分布不同而存在差異外，其他血型系統(tǒng)抗體檢出率也基本一致。通過(guò)對(duì)本系列抗體的研究，發(fā)現(xiàn)輸血和妊娠這兩種主要的血型抗原免疫過(guò)程，與抗體檢出的相關(guān)性并不一致。

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本研究B組與D組數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，抗E、抗Ec、抗Ce抗體與輸血存在顯著關(guān)聯(lián)；抗M、抗Lea更傾向于在非輸血患者中產(chǎn)生，此結(jié)果與這些抗體的特點(diǎn)相符?？笵與抗DC的產(chǎn)生與輸血相關(guān)性較小。自2000年實(shí)施《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》以來(lái)，基本做到了RhD血型的同型輸注，臨床輸血造成Rh陰性患者產(chǎn)生抗D的機(jī)會(huì)極小。然而，通常被認(rèn)為是免疫抗體的Duffy、Diago系統(tǒng)抗體，并未表現(xiàn)出與輸血相關(guān)。這可能是由于Duffy系統(tǒng)和Diago抗體存在一定數(shù)量的“天然抗體”所致。

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本研究通過(guò)比較C組與D組數(shù)據(jù)，揭示了抗D與妊娠具有顯著關(guān)聯(lián)性，同時(shí)抗E是本系列數(shù)據(jù)中唯一在B組和C組中檢出率均顯著高于D組的抗體；而抗M、抗Leb傾向于在無(wú)輸血、無(wú)妊娠史的患者中產(chǎn)生。結(jié)合B組數(shù)據(jù)，抗M、Lewis系統(tǒng)抗體符合所謂“天然抗體”的特點(diǎn)，其產(chǎn)生不依賴(lài)于輸血、妊娠等明顯的血液免疫過(guò)程。雖然本研究中“天然抗體”在D組中的檢出率顯著高于B組和C組，然而不能認(rèn)為輸血、妊娠是這些抗體產(chǎn)生的抑制條件。合理的解釋是，由于B組和C組中免疫性抗體的存在，使這些“天然抗體”在B組和C組中的比例相對(duì)降低。

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本研究在比對(duì)多次輸血和單次輸血的差異時(shí)發(fā)現(xiàn)，抗E與多次輸血的關(guān)聯(lián)性較弱，而抗Ec、抗Ce與多次輸血關(guān)聯(lián)性較強(qiáng)。造成這一現(xiàn)象有兩種可能，其一是存在部分“天然”抗E抗體，降低了抗E與輸血的關(guān)聯(lián)性；另一種可能是抗Ec和抗Ce相對(duì)于抗E而言，需要更多次輸血才能產(chǎn)生。本研究結(jié)果顯示，抗D與抗DC均與單次輸血關(guān)聯(lián)性更強(qiáng)，推測(cè)其原因仍然與目前國(guó)內(nèi)輸血策略相關(guān)。Rh陰性患者僅輸注Rh陰性血液，因此輸血不成為形成抗D的條件，相反由于Rh陰性血液的相對(duì)缺少，多次輸血的Rh陰性患者相對(duì)較少。

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本研究結(jié)果顯示，不同特異性意外抗體在A組與B組分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

P

>0.05)，而與C組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

P

<0.05)，說(shuō)明輸血對(duì)意外抗體產(chǎn)生及分布的影響遠(yuǎn)大于妊娠。據(jù)此，對(duì)于意外抗體檢測(cè)或輸血安全而言，既往輸血史的意義遠(yuǎn)大于妊娠史。同時(shí)，D組與C組的差異性也顯示了妊娠對(duì)血型意外抗體的產(chǎn)生也有一定影響。

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本研究數(shù)據(jù)中，部分特異性抗體數(shù)量較少，一定程度上影響了統(tǒng)計(jì)結(jié)果的可靠性。另外，部分有臨床意義的抗體，如抗S、抗c、抗Tja等，因例數(shù)較少而未能納入分析。在1 399例有妊娠史的患者中，共有203例為初次妊娠的孕婦，且妊娠<30周者約130例。這部分患者并未經(jīng)歷一次完整的妊娠免疫，可能對(duì)妊娠免疫的計(jì)算有一定影響。

影響血型意外抗體產(chǎn)生的因素很多，例如HLA分型、疾病、治療、年齡等。本研究?jī)H就輸血和妊娠對(duì)抗體產(chǎn)生的影響進(jìn)行了分析，在提倡精準(zhǔn)醫(yī)療和循證醫(yī)學(xué)的背景下，研究血型意外抗體產(chǎn)生、分布及變化的規(guī)律，有助于安全輸血甚至疾病的診斷和治療。