食源性抗炎活性肽的研究進(jìn)展

傅麗娟，邢路娟，張萬(wàn)剛

（南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院 國(guó)家肉品質(zhì)量安全與工程技術(shù)研究中心 南京 210095）

炎癥是一種免疫應(yīng)激反應(yīng)，是機(jī)體對(duì)外界刺激、感染、內(nèi)源組織損傷等做出的保護(hù)性反應(yīng)，廣泛發(fā)生于機(jī)體的細(xì)胞、組織和器官等[1]。根據(jù)發(fā)生程度和持續(xù)時(shí)間的不同，炎癥可分為急性炎癥和慢性炎癥反應(yīng)。急性炎癥持續(xù)時(shí)間較短，如局部組織損傷導(dǎo)致的發(fā)炎、發(fā)熱、紅腫等。慢性炎癥持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，炎癥因子的分泌異常會(huì)對(duì)組織器官造成長(zhǎng)期的影響。當(dāng)機(jī)體發(fā)生炎癥時(shí)，具有免疫應(yīng)答反應(yīng)的細(xì)胞產(chǎn)生異常水平的細(xì)胞因子并在組織損傷部位激活和募集，使內(nèi)皮組織及器官產(chǎn)生炎癥損傷[2]。具有免疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子包括白細(xì)胞介素類（Interleuki，IL）、腫瘤壞死因子-α（Tumor necrosis factor，TNF-α）、干擾素-γ（Interferon-γ，IFN-γ）及趨化因子等[3]。白細(xì)胞介素素類包括促炎因子和抗炎因子，其中促炎因子包括IL-1、IL-2、IL-6、IL-12 等，抗炎因子包括IL-4、IL-10 等。由炎癥引發(fā)的組織損傷和免疫功能紊亂與慢性炎癥疾病，如Ⅱ型糖尿病、炎癥性腸病、關(guān)節(jié)炎、動(dòng)脈粥樣硬化和其它心血管疾病等的發(fā)生密切相關(guān)[4]。

目前預(yù)防和治療炎癥的方法主要是抑制細(xì)胞免疫反應(yīng)，減少促炎細(xì)胞因子分泌，干預(yù)炎癥信號(hào)通路等[5]。臨床上常用的抗炎藥物存在一定的副作用，長(zhǎng)期使用可能會(huì)導(dǎo)致心血管疾病和消化道出血等[6]。食源性生物活性肽可有效降低炎癥因子分泌，進(jìn)而起到緩解機(jī)體炎癥損傷的作用。例如，大豆酶解得到的三肽VPY 能夠顯著降低結(jié)腸腺癌細(xì)胞（Colorectal adenocarcinoma cell，Caco-2）和人髓系單核細(xì)胞 （Human myeloid leukemia mononuclear cells，THP-1） 中IL-6、IL-17、IL-1β、IFN-γ 促炎性細(xì)胞因子的分泌，同時(shí)下調(diào)由葡聚糖硫酸鈉（Dextran sodium sulfate，DSS）誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸組織中TNF-α、IL-1β、IFN-γ 的基因表達(dá)，進(jìn)而起到緩解結(jié)腸組織炎癥的效果[7]。小米醇溶蛋白來(lái)源的活性肽IALLIPF 能夠改善結(jié)腸炎小鼠的臨床癥狀，降低結(jié)腸組織中的髓過(guò)氧化物酶（Myeloperoxidase，MPO） 活性及TNF-α 和IL-6的含量，在結(jié)腸炎小鼠模型中表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗炎活性[8]。綜上可知，國(guó)內(nèi)外學(xué)者開展了諸多關(guān)于食源性蛋白質(zhì)水解物和活性肽抗炎作用的研究，為開發(fā)新型安全抗炎藥物及預(yù)防食源性預(yù)防炎癥的發(fā)生提供了新的方向。

在炎癥調(diào)節(jié)機(jī)制方面，Janus 激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子（Janus kinase signal transduction and transcription activator，JAK-STAT）)、絲裂原活化蛋 白 激 酶 （Mitogen activated protein kinase，MAPK）和核轉(zhuǎn)錄因子κB（Nuclear factor kappa B，NF-κB）是細(xì)胞內(nèi)參與炎癥反應(yīng)的重要信號(hào)通路[9-10]。目前，關(guān)于抗炎活性肽對(duì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)大多與MAPK 和NF-κB 通路相關(guān)，如玉米蛋白水解物[5]、酪蛋白水解多肽[11]、乳清蛋白水解物[12]等均可參與NF-κB 信號(hào)的調(diào)節(jié)。大豆酶解得到的谷?；耐ㄟ^(guò)介導(dǎo)鈣離子敏感受體的磷酸化，阻斷NF-κB 和MAPK 通路激活，抑制細(xì)胞炎性反應(yīng)[13]。細(xì)胞信號(hào)通路介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的發(fā)生及預(yù)防是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，相關(guān)調(diào)控機(jī)制的挖掘和研究將為開發(fā)抗炎活性肽類功能營(yíng)養(yǎng)分子提供理論保障。結(jié)合以上研究背景，本文對(duì)抗炎活性肽的來(lái)源及其抗炎作用進(jìn)行綜述，以期為開發(fā)食源性抗炎活性多肽的產(chǎn)品及探明抗炎分子機(jī)制提供理論參考。

1 抗炎活性肽的來(lái)源

食物中的蛋白質(zhì)是人體生長(zhǎng)發(fā)育所需的重要營(yíng)養(yǎng)來(lái)源，研究發(fā)現(xiàn)食物蛋白經(jīng)消化水解后產(chǎn)生的多肽同樣具有生理調(diào)節(jié)活性[14]。食品加工中的發(fā)酵成熟、內(nèi)源酶降解或外源酶輔助水解及胃腸消化過(guò)程均可促進(jìn)蛋白質(zhì)降解成為多肽，多肽從源蛋白中釋放進(jìn)而發(fā)揮特殊的生理調(diào)節(jié)活性。眾多的研究證明，從大豆[15]、玉米[16]、雞蛋[17]和魚類[18]等蛋白質(zhì)中水解得到的生物活性肽均與炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)密切相關(guān)。

1.1 動(dòng)物源抗炎活性肽

動(dòng)物源抗炎活性肽主要來(lái)自乳蛋白、禽蛋白、肉制品中的蛋白質(zhì)、海洋生物蛋白等。Qian 等[19]采用酶解法制備牡蠣生物活性肽，經(jīng)分離純化得到的TRYP 肽可抑制脂多糖（Lipopolysaceharide，LPS）誘導(dǎo)的小鼠單核巨噬細(xì)胞（Mouse leukemia cells of monocyte macrophage，RAW264.7） 中TNF-α、IL-1β、IL-6 和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（Inducible nitric oxide synthase，iNOS）的表達(dá)。三文魚副產(chǎn)物來(lái)源的三肽PAY 可抑制LPS 誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞中NO、TNF-α、IL-6 和IL-1β 的生成[18]。Ma 等[12]從牛乳清蛋白中酶解得到的多肽組分DQWL 能抑制LPS 誘導(dǎo)的RAW264.7 中IL-1β、環(huán)氧合酶-2 （Cyclooxygenase-2，COX-2）和TNF-α 的表達(dá)。

此外，一些食品加工的副產(chǎn)物也是良好的抗炎肽來(lái)源，其中畜禽肉制品加工過(guò)程中的副產(chǎn)物如畜禽類動(dòng)物的肌肉、骨、血液、腦、結(jié)蹄組織和上皮組織等，可作為一種最廣泛易得的優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)資源。Yang 等[20]從雞軟骨水解物中分離得到組分CCH-I 和CCH-II 可不同程度地降低骨關(guān)節(jié)炎大鼠血液中IL-1β、IL-8 和TNF-α 的分泌。

1.2 植物源抗炎活性肽

大豆、小麥、燕麥、玉米、油菜籽等植物蛋白被水解后均可產(chǎn)生抗炎活性多肽。Chen 等[21]從菜豆豆奶中提取的多肽γ-E-S-（Me）C、γ-EL 及LLV可抑制Caco-2 細(xì)胞中IL-8、TNF-α、IL-1β 和IL-6 等促炎細(xì)胞因子的表達(dá)。Lunasin 肽是一種從大豆蛋白中經(jīng)水解得到的生物活性肽，在抗炎癥活性調(diào)節(jié)方面，Lunasin 可抑制NO 和前列腺素E2（Prostaglandin E2，PGE2）的產(chǎn)生，降低COX-2 和iNOS 的mRNA 表達(dá)，在RAW264.7 細(xì)胞中表現(xiàn)出抗炎作用[15]。在玉米來(lái)源的生物活性肽研究中，玉米多肽具有清除細(xì)胞活性氧自由基的功能，同時(shí)還可以顯著降低DSS 所誘導(dǎo)的結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織中MPO 的活性及TNF-α 和IL-6 的含量，減輕結(jié)腸組織損傷和炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)[16]。

2 抗炎活性多肽制備方法

2.1 酶解法

酶解法是制備生物活性肽的常用方法，具有生產(chǎn)條件溫和、成本低、獲得產(chǎn)品安全性高等特點(diǎn)[22]。酶解法制備抗炎活性肽的關(guān)鍵是酶的種類和酶解條件。目前，常見的用于制備活性多肽的酶包括：胃蛋白酶、胰蛋白酶、堿性蛋白酶、無(wú)花果蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶等。由于不同酶的酶切位點(diǎn)不同，水解后得到的肽段種類有較大差異，因此選擇合適的酶及控制酶解條件十分關(guān)鍵。單一酶水解制備抗炎肽或同一酶水解混合底物時(shí)酶解效果會(huì)受到限制，不同底物或混合底物需要選擇適當(dāng)?shù)膹?fù)合酶進(jìn)行酶解以獲得目的產(chǎn)物。

于笛等[23]從5 種單一酶（木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶、胰蛋白酶及堿性蛋白酶）中選取3 種水解度較高的蛋白酶進(jìn)行雙酶分段水解實(shí)試驗(yàn)，比較雙酶組合后的水解效果。結(jié)果顯示，胰蛋白酶與堿性蛋白酶分段水解燕麥麩蛋白后其產(chǎn)物水解度最高，對(duì)酶解產(chǎn)物進(jìn)行抗炎活性研究發(fā)現(xiàn)質(zhì)量濃度在50～200 μg/mL 范圍內(nèi)，燕麥麩皮肽能顯著下調(diào)LPS 誘導(dǎo)的胞外細(xì)胞因子分泌水平，且呈現(xiàn)量效關(guān)系。袁強(qiáng)等[24]利用堿性蛋白酶及風(fēng)味蛋白酶組合水解菜籽粕制備菜籽多肽，經(jīng)分離純化得到的TL 肽段能有效抑制LPS 誘導(dǎo)下的RAW264.7 細(xì)胞中NO 和PGE2的含量，同時(shí)降低細(xì)胞iNOS 和COX-2 的表達(dá)量。Qian 等[19]采用胃蛋白酶、胰蛋白酶水解制備牡蠣軟組織肽，其中TRYP-2 肽段可選擇性抑制LPS 刺激后RAW264.7促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6 和iNOS 的表達(dá)水平。

2.2 微生物發(fā)酵法

微生物發(fā)酵法是運(yùn)用微生物產(chǎn)生的胞外酶水解蛋白質(zhì)，具有效率高、成本低、繁殖快、產(chǎn)量高等優(yōu)勢(shì)[25]。由于微生物中酶的種類十分豐富，可以滿足多種酶解過(guò)程的需要。目前采用的發(fā)酵菌株主要有枯草芽孢桿菌[25]、黑曲霉[26]、米曲霉[27]等。Aguilar-Toalá 等[28]從發(fā)酵牛奶中獲得的生物活性肽具有抗炎、抗溶血、抗氧化、抗突變和抗菌活性，通過(guò)對(duì)比不同分子質(zhì)量多肽的活性發(fā)現(xiàn)，分子質(zhì)量小于3 ku 的多肽在抑制炎癥熱誘導(dǎo)的蛋白變性方面具有更強(qiáng)的活性。陳宇歡[29]從發(fā)酵酸奶模擬胃腸道消化產(chǎn)物中分離的肽組分NBM 和LKBM 能夠降低炎癥狀態(tài)下Caco-2 內(nèi)促炎癥因子的表達(dá)，并提高抗炎癥因子IL-10 的表達(dá)。

除了酶解和發(fā)酵法外，酸堿處理、加熱、超聲波等方法也可以用來(lái)輔助提取多肽。梁秋芳[16]利用超聲波輔助酶解技術(shù)提取玉米中的生物活性肽，發(fā)現(xiàn)超聲波預(yù)處理可大幅度改變多肽分子質(zhì)量分布，其中200～1 000 u 和1 000～3 000 u 分子質(zhì)量段多肽含量達(dá)到63.31%和17.69%，相對(duì)于傳統(tǒng)酶解的產(chǎn)率分別增加了11.84%和21.29%。以上方法制備的玉米活性肽可顯著降低TNF-α 誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞（Human umbilical vein endothelial cell line，EA.hy926） 中黏附因子-1 表達(dá)，同時(shí)降低結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織中的MPO 活性及TNF-α 和IL-6 的分泌。在病理學(xué)觀察中，玉米活性肽可顯著改善結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織的形態(tài)學(xué)特征，減輕結(jié)腸組織損傷及炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，對(duì)腸道健康起到潛在的保護(hù)作用。Iskandar 等[30]發(fā)現(xiàn)經(jīng)高壓處理后，乳清蛋白的消化率和多肽的釋放量均得到顯著提升；在抗炎活性方面，乳清蛋白生物活性肽可顯著降低上皮細(xì)胞IL-8 的分泌并提升細(xì)胞總活力。

3 抗炎活性肽研究方法

3.1 食品源性抗炎活性肽的體外研究

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)為研究食源性多肽的功能性提供了經(jīng)濟(jì)、快速和可重復(fù)的方法。常用于體外抗炎活性研究的細(xì)胞類型有：RAW264.7、Caco-2、EA.hy926、血管內(nèi)皮細(xì)胞（Endothelial cells，ECs）、小鼠胰島β 細(xì)胞 （Mouse insulinoma beta cell，MIN-6）、小鼠脂肪前體細(xì)胞 （3T3 F442A Adipocytes，3T3-F442A）、THP-1、小鼠脂肪細(xì)胞（3T3-L1 preadipocyte，3T3-L1）、結(jié)腸癌細(xì)胞（Human colon cancer cells，HT-29）等。生物活性肽在細(xì)胞中的抗炎研究詳見表1。

表1 生物活性肽在細(xì)胞中的抗炎活性研究Table 1 Anti-inflammatory activity of bioactive peptides in cells models

Suttisuwan 等[38]從鏈球菌中分離、純化和鑒定了分子質(zhì)量小于3 ku 的多肽，其顯著降低LPS 誘導(dǎo)的RAW264.7 中iNOS、IL-6、TNF-α 和COX-2的表達(dá)。Majumder 等[39]發(fā)現(xiàn)來(lái)自卵鐵蛋白的生物活性肽IRW 和IQW 在ECs 中表現(xiàn)出抗炎作用，其中IRW 孵育可顯著抑制LPS 誘導(dǎo)ECs 中IL-8的分泌以及ICAM-1 和VCAM-1 的表達(dá)。Sun 等[40]研究發(fā)現(xiàn)玉米來(lái)源的多肽可緩解LPS 刺激MIN-6后釋放的IL-6 水平。此外，大豆來(lái)源的三肽VPY[7]和PLV[36]均表現(xiàn)出良好的抗炎活性。VPY 可抑制LPS 誘導(dǎo)的THP-1 細(xì)胞中TNF-α 的分 泌。在RAW264.7 和3T3-L1 細(xì)胞共培養(yǎng)體系中，PLV 可抑制體系中TNF-α、IL-6 和MCP-1 的釋放。

3.2 食源性抗炎活性肽的動(dòng)物體內(nèi)研究

生物活性肽的體內(nèi)試驗(yàn)主要采用化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)的炎癥性動(dòng)物疾病模型，使用的化學(xué)誘導(dǎo)劑包括：DSS、2，4，6-三硝基苯磺酸、噁唑酮、乙酸、碘乙酰胺等[41]；此外，細(xì)菌誘導(dǎo)或基因工程等方式也可以用于建立動(dòng)物疾病模型。目前，常用的模型動(dòng)物包括：巴比西小鼠（Bagg's albino，BALB/c）、免疫缺陷型小鼠 （Non-obese diabetes-scid，NODSCID）、雄性SD 大鼠（Sprague dawley，SD）、自發(fā)性高血壓大鼠（Spontaneous hypertension rat，SHR）、基因缺陷小鼠（Apolipoprotein e-deficient mice，ApoE）等。生物活性肽的體內(nèi)研究詳見表2。

表2 生物活性肽在動(dòng)物模型中的抗炎活性研究Table 2 Anti-inflammatory activity of bioactive peptides in animal models

Zhang 等[33]在DSS 誘導(dǎo)的雌性BALB/c 小鼠結(jié)腸炎模型中發(fā)現(xiàn)，γ-EV 和γ-EC 的飲食干預(yù)可降低結(jié)腸組織中IL-6、TNF-α、IL-1β、INF-γ、IL-17 的表達(dá)，同時(shí)增加了抗炎因子IL-10 的表達(dá)。源自牡蠣的肽QCQCAVDGGL 可通過(guò)增加脾臟T 淋巴細(xì)胞活性抑制CD4+/CD8+的分泌，降低血清免疫

球蛋白E（IgE）的濃度，對(duì)小鼠結(jié)腸炎具有緩解效果[19]。在小鼠結(jié)腸炎淋巴細(xì)胞的研究中，源自酪蛋白的糖巨肽（Glycomacropeptide，GMP）具有促進(jìn)抗炎細(xì)胞因子如IL-4 和IL-10 分泌的效果，同時(shí)GMP 可下調(diào)由T 細(xì)胞轉(zhuǎn)移而引起的IFN-γ 的分泌[42]。從大豆中水解得到的活性多肽VPY 可降低小鼠結(jié)腸炎癥水平，其中TNF-α、IFN-γ 和IL-1β的分泌均得到有效緩解[7]。大豆源Lunasin 可抑制由氣道炎癥誘導(dǎo)的雌性BALB/c 小鼠的炎癥浸潤(rùn)、Th2 細(xì)胞因子的表達(dá)和杯狀細(xì)胞的發(fā)生[13]。此外，Lunasin 還可降低Wistar 雄性大鼠T 淋巴細(xì)胞活化標(biāo)志物CD69+和CD25+的表達(dá)，減少膜液中IL-12、TNF-β 的分泌，增加IL-4、IL-10 的分泌，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫微環(huán)境的功能[44]。

4 食源性抗炎活性肽的氨基酸組成

氨基酸組成、疏水性、C 末端和N 末端的殘基類型等都會(huì)影響肽的生物活性[45]。通過(guò)分析抗炎活性肽序列發(fā)現(xiàn)，在肽鏈N 端和C 端帶正電荷和疏水性氨基酸對(duì)其抗炎活性具有促進(jìn)作用[46]。目前發(fā)現(xiàn)的許多抗炎活性肽都含有帶正電荷的氨基酸，如精氨酸（Arg）和賴氨酸（Lys）。在金槍魚汁液[47]和莧菜蛋白[48]中鑒定出了PRRTRMMNGGR、GPR，其C 末端均含有Arg，并且在LPS 誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞炎癥模型中表現(xiàn)出抗炎活性。在大豆蛋白生物活性肽的研究中，5～10 ku 的活性組分可有效抑制RAW264.7 中前列腺素D2和NO的產(chǎn)生，從中分離出的5 個(gè)肽段（QQQQQGGSQSQ、QEPQESQQ、QQQQQG、GSQSQSQKG、PETMQQQQQQ）中都富含谷氨酰胺（Gln）[49]。此外，IQW 和QEPVL 肽段中包含至少一個(gè)Gln 殘基[11，35]，因此推測(cè)Gln 可能對(duì)其抗炎活性具有重要作用。疏水性氨基酸有助于抗炎活性的發(fā)揮，如IPP、VPP[34]、IRW、IQW[35]和PLV[36]，其N 端氨基酸均具有較高的疏水性。除IPP 和VPP 外，其它抗炎活性肽中的脯氨酸（Pro）存在比例較高，如VPY[7]、PAY[18]和PLV[36]。疏水性氨基酸的存在可增強(qiáng)肽與細(xì)胞膜之間的相互作用，有助于生物活性肽參與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路的調(diào)節(jié)，從而發(fā)揮抗炎功能[50]。

5 食源性抗炎活性肽參與的信號(hào)調(diào)節(jié)通路

炎癥相關(guān)的調(diào)節(jié)通路主要包括NF-κB、MAPK 等分子途徑[51]。NF-κB 蛋白家族可調(diào)控炎癥、氧化應(yīng)激、免疫反應(yīng)等細(xì)胞代謝過(guò)程。NF-κB的過(guò)度激活會(huì)引發(fā)機(jī)體自身的免疫反應(yīng)、慢性炎癥以及惡性腫瘤等風(fēng)險(xiǎn)。炎癥反應(yīng)初期細(xì)胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-12、iNOS、COX-2）的表達(dá)均都受NF-κB 的調(diào)控[3]。NF-κB 一般以二聚體方式在胞漿內(nèi)存在，其中p50/p65 是NF-κB 的主要存在形式。p50 和p65 可自由地遷移到細(xì)胞核中并激活與炎癥、生長(zhǎng)控制、細(xì)胞黏附和凋亡有關(guān)的基因[52]。p50 的同二聚體是轉(zhuǎn)錄抑制因子，而p65/p50 的異二聚體是轉(zhuǎn)錄激活因子。核因子抑制蛋白（Inhibitor of NF-κB，IκB）可通過(guò)結(jié)合p65 來(lái)抑制NF-κB。此外，NF-κB 通路可通過(guò)IκB 絲氨酸磷酸化、IκB 酪氨酸磷酸化方式被激活[53]。MAPK 是生物體內(nèi)重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，廣泛參與機(jī)體生長(zhǎng)、分裂、分化、凋亡等生理過(guò)程。生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子、外界刺激等因素均可激活MAPK 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)代謝途徑。MAPK 通路的基本組成是三級(jí)激酶模式，包括MAPK 激酶激酶、MAPK 激酶和MAPK，這3 種激酶能依次激活和逐級(jí)磷酸化，共同調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、應(yīng)激、炎癥反應(yīng)等多種重要的細(xì)胞生理、病理過(guò)程[54]。MAPK 家族成員包括c-Jun 氨基末端激酶 （c-Jun N-terminal kinase，JNK）、p38 及細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（Extracellular regulated protein kinases，ERK），其中ERK 激酶能誘導(dǎo)NF-κB 活化。另外，與炎癥相關(guān)的調(diào)節(jié)通路如干擾素基因刺激因子 （Stimulator of interferon genes，STING），在外源病原菌入侵后可發(fā)揮炎癥調(diào)節(jié)功能，其表達(dá)的上調(diào)或過(guò)度活化與免疫性疾病密切相關(guān)[55]。

Liang 等[5]從玉米蛋白水解物中提取的生物活性肽能有效抑制EA.hy926 中ROS 的產(chǎn)生，阻止NF-κB 信號(hào)通路激活并抑制TNF-γ 的下調(diào)和p65 磷酸化過(guò)程。Chakrabarti 等[34]發(fā)現(xiàn)酪蛋白來(lái)源IPP 或VPP 可提升細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積聚，促進(jìn)過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ 和脂聯(lián)素的上調(diào)。同時(shí)IPP 和VPP 可通過(guò)抑制IκB 磷酸化來(lái)抑制NF-κB通路激活，發(fā)揮有效的抗炎作用。γ-EC 和γ-EV可通過(guò)變構(gòu)激活鈣敏感受體觸發(fā)細(xì)胞JNK 和Iκ-Bα 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，進(jìn)而調(diào)節(jié)NF-κB 和MAPK 信號(hào)通路級(jí)聯(lián)反應(yīng)，對(duì)腸道細(xì)胞的炎癥發(fā)揮調(diào)節(jié)作用[43]。在分化成熟的脂肪細(xì)胞中，γ-EV 同樣介導(dǎo)鈣敏感蛋白的激活，抑制由TNF-α 引發(fā)的脂肪細(xì)胞炎癥MCP-1 和IL-8 細(xì)胞因子的分泌，同時(shí)提升脂聯(lián)素水平，對(duì)脂肪細(xì)胞炎癥發(fā)揮調(diào)節(jié)作用[56]。炎癥刺激因子LPS 是細(xì)胞膜受體CD14 和TLR-4激活劑，具有活化NF-κB 誘導(dǎo)炎癥的作用。乳清蛋白生物活性肽能夠抑制LPS 引起的細(xì)胞中TNF-α、IL-8 分泌，然而對(duì)TNF-α 和IL-1β 誘導(dǎo)的IL-8 分泌無(wú)顯著影響。在調(diào)控通路方面，乳清蛋白生物活性肽雖不能下調(diào)TLR4 受體的表達(dá)，但可能通過(guò)抑制LPS 與TLR4 受體的結(jié)合進(jìn)而阻斷NF-κB 通路，發(fā)揮緩解炎癥的作用[30]。此外，從小麥麩質(zhì)水解物中分離出的pEL 參與了IκBα 降解和MAPK 磷酸化過(guò)程，進(jìn)而緩解由LPS 刺激引起的RAW264.7 中NO、TNF-α 和IL-6 的產(chǎn)生[32]。綜合以上研究發(fā)現(xiàn)，食源性抗炎活性肽主要通過(guò)參與NF-κB 和MAPK 途徑介導(dǎo)細(xì)胞炎癥過(guò)程，其主要的抗炎過(guò)程可見圖1。

6 結(jié)語(yǔ)

隨著對(duì)生物活性肽研究的不斷深入，抗炎生物活性肽也越來(lái)越得到關(guān)注。抗炎活性肽可通過(guò)介導(dǎo)炎癥通路受體蛋白參與細(xì)胞因子的分泌及炎癥介質(zhì)的合成，進(jìn)而發(fā)揮重要的生理調(diào)節(jié)功能。在細(xì)胞模型中，抗炎肽可緩解由外源刺激引起的免疫細(xì)胞、上皮細(xì)胞促炎因子的釋放，提升細(xì)胞活力。在動(dòng)物模型中，抗炎肽具有緩解結(jié)腸炎、免疫系統(tǒng)功能等作用。作為潛在的抗炎活性物質(zhì)，目前對(duì)生物活性肽的炎癥機(jī)制研究主要集中于NF-κB和MAPK 等信號(hào)通路的調(diào)節(jié)，深入挖掘抗炎肽的結(jié)構(gòu)與抗炎通路蛋白的相互作用，可為炎癥預(yù)防提供新的思路。在慢性疾病的預(yù)防方面，抗炎活性肽的動(dòng)物模型與人體內(nèi)的生理調(diào)節(jié)功能還有較大的差距，進(jìn)一步展開生物活性肽的體內(nèi)代謝及疾病模型研究，是抗炎活性肽開發(fā)的重要方向。