非小細(xì)胞肺癌根治性放化療后血清外泌體來(lái)源的microRNA-4429水平與預(yù)后的關(guān)系

張瑩，陳軍梅，陳名濤，郭晶，吳曉冬，陳歡

1.華潤(rùn)武鋼總醫(yī)院,a 腫瘤科，b 中醫(yī)科，c 呼吸與危重癥科,武漢 430080；2.武漢泰康楚園康復(fù)醫(yī)院康復(fù)醫(yī)學(xué)中心；3.武漢工程大學(xué)社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)站檢驗(yàn)科

肺癌是較為常見(jiàn)的一種惡性腫瘤,在全世界范圍內(nèi)具有較高的發(fā)病率。其中非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)占到肺癌的80%以上[1-2]。血清外泌體來(lái)源的microRNA-4429是microRNA中的一員,參與較多疾病的發(fā)生,腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲等以及放療的敏感性等均與其有著密切的關(guān)系,因此部分醫(yī)學(xué)專(zhuān)家認(rèn)為microRNA-4429與NSCLC根治性放化療患者的預(yù)后有著較大的關(guān)聯(lián)[3-5],但相關(guān)的研究還比較少,尚未得到證實(shí)。本文旨在研究NSCLC根治性放化療后血清外泌體來(lái)源的microRNA-4429水平與患者預(yù)后的關(guān)系。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2015年10月至2020年10 月期間，華潤(rùn)武鋼總醫(yī)院收治的120例NSCLC根治性放化療患者治療前、治療后的血液標(biāo)本進(jìn)行研究。隨訪調(diào)查120例患者1年后的生存率為70.00% (84/120),根據(jù)隨訪調(diào)查患者1年后生存情況,分為觀察組(84例)、對(duì)照組(36例)。觀察組:男性45例,女性39例;年齡范圍45～70(61.4±1.5)歲;腫瘤分期[6]為Ⅲ期40例,Ⅳ期44例;分化程度為低分化35例、中高分化49例。對(duì)照組:男性20例,女性16例;年齡范圍45～69(60.9±1.5)歲;腫瘤分期為Ⅲ期17例,Ⅳ期19例;分化程度為低分化10 例、中高分化26例。2組一般資料對(duì)比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。本研究方案經(jīng)華潤(rùn)武鋼總醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn):(1)初次診斷為進(jìn)展期NSCLC患者;(2)患者均接受根治性放化療治療;(3)根治性放化療治療前均接受免疫治療或靶向治療;(4)患者及家屬對(duì)本次研究知情,且自愿簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)患者心、肝、腎功能存在異常及重大疾病者;(2)合并血液系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)功能疾病者;(3)轉(zhuǎn)移性肺癌;(4) 長(zhǎng)期服用糖皮質(zhì)激素類(lèi)藥物患者;(5)伴有全身感染性疾病患者。

1.3 根治性放化療治療方法 患者在治療前進(jìn)行常規(guī)檢查,確保患者的各項(xiàng)指標(biāo)符合治療標(biāo)準(zhǔn)。給予順鉑(75 mg/m2，通化茂祥制藥有限公司生產(chǎn))+長(zhǎng)春瑞濱(5 mg/m2，齊魯制藥有限公司生產(chǎn))化療。采用調(diào)強(qiáng)適型放療技術(shù)，根治性放療劑量為60～70 Gy，2 Gy/次。

1.4 實(shí)時(shí)熒光定量(PCR)技術(shù)檢測(cè)方法 采用PCR技術(shù)檢測(cè)方法檢測(cè)患者血清外泌體來(lái)源的microRNA-4429水平,分別提取120例NSCLC患者治療前及治療后1、3、6個(gè)月的血液標(biāo)本,置于肝素抗凝管中,在3 000 r/min離心操作10 min后取上層血清,使用PCR技術(shù)檢測(cè)血清microRNA-4429水平。按血清總RNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,在無(wú)菌無(wú)酶的環(huán)境下提取血清總RNA,使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)總RNA純度,將其反轉(zhuǎn)錄為cDNA,使用PCR儀擴(kuò)增,條件為94℃預(yù)變性5 min、95 ℃變性45 s、60 ℃退火45 s、72 ℃擴(kuò)增45 s,共進(jìn)行35個(gè)循環(huán),并采用2-Cr法計(jì)算MicroRNA-4429的相對(duì)表達(dá)水平。

1.5 觀察指標(biāo) (1)血清外泌體來(lái)源的mircroRNA 水平:治療前、治療1個(gè)月、治療3個(gè)月、治療6個(gè)月血清外泌體來(lái)源的mircroRNA水平變化情況;(2)microRNA-4429水平、生存預(yù)后的相關(guān)性;(3)分析預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)因素。

2 結(jié)果

2.1 microRNA-4429水平 2組患者在治療前及治療1個(gè)月后microRNA-4429水平對(duì)比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),治療后3、6個(gè)月觀察組microRNA-4429水平較對(duì)照組明顯升高(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 2組患者microRNA-4429水平比較

2.2 microRNA-4429水平與生存預(yù)后的關(guān)系 治療1個(gè)月后NSCLC患者生存預(yù)后ROC曲線下面積、最佳截?cái)帱c(diǎn)、靈敏度及特異度分別為0.58、0.49、59.12%、91.23%;治療3個(gè)月NSCLC患者生存預(yù)后ROC曲線下面積、最佳截?cái)帱c(diǎn)、靈敏度及特異度分別為0.61、0.62、90.05%、56.82%;治療6個(gè)月后NSCLC患者生存預(yù)后ROC曲線下面積、最佳截?cái)帱c(diǎn)、靈敏度及特異度分別為0.88、0.64、62.93%、98.24%。治療6個(gè)月診斷NSCLC生存預(yù)后效能明顯高于治療1個(gè)月及治療3個(gè)月(Z=3.587、2.608,P值均<0.05)。治療6個(gè)月NSCLC約登指數(shù)為最大值,因此將治療6個(gè)月NSCLC生存預(yù)后作為最佳截?cái)帱c(diǎn)將NSCLC患者分為高M(jìn)icroRNA組及低MicroRNA組,高microRNA組NSCLC患者生存預(yù)后的不良風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生率較低。

2.3 影響預(yù)后的危險(xiǎn)因素分析 將NSCLC生存預(yù)后作為因變量,將年齡、性別、吸煙史、腫瘤直徑、腫瘤分期、分化程度、靶向治療和microRNA-4429作為自變量,分別納入COX回歸分析,結(jié)果顯示分化程度、靶向治療和microRNA-4429均與NSCLC生存預(yù)后有相關(guān)性,是NSCLC患者生存預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 NSCLC患者生存預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)因素的COX回歸分析

3 討論

對(duì)NSCLC的治療,放療是其治療的主要手段,但并非所有患者對(duì)放療治療均具有較高的敏感度[7-8]。由于缺乏有效的早期診斷能力,大部分NSCLC患者在接受治療時(shí)已經(jīng)處于中晚期階段,化療的效果并不理想,患者的生存率比較低,在治療后常會(huì)出現(xiàn)復(fù)發(fā)以及轉(zhuǎn)移等風(fēng)險(xiǎn)[9-11]。研究表明,microRNA是一種內(nèi)源性非編碼序列,在真核生物中普遍存在,在癌癥細(xì)胞的增殖及分化中均有著重要的參與作用[12-14],microRNA-4299作為其中一員,同樣具有相應(yīng)的作用,但當(dāng)前關(guān)于microRNA-4299與NSCLC患者生存預(yù)后關(guān)系的研究還比較少。

本研究表明，治療3個(gè)月及6個(gè)月觀察組的microRNA-4299水平明顯高于對(duì)照組,且在ROC曲線分析及COX相關(guān)性分析中發(fā)現(xiàn),microRNA-4299水平與NSCLC患者生存預(yù)后效果存在線性關(guān)系,高microRNA組預(yù)后不良風(fēng)險(xiǎn)性低于低microRNA組。這主要是因?yàn)閙icroRNA-4299能夠有效調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移以及侵襲等過(guò)程,從而調(diào)節(jié)放化療對(duì)NSCLC患者的敏感性,因此能夠在一定程度上反映出患者放化療后的療效。此外，本次研究顯示分化程度、靶向治療以及microRNA-4299水平是影響NSCLC患者生存預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,與紀(jì)奇峰等[15]、龍濤等[16]的研究結(jié)果一致。

綜上所述,microRNA-4299表達(dá)水平高表明患者預(yù)后不良風(fēng)險(xiǎn)較低,且分化程度、靶向治療及microRNA-4299水平是NSCLC患者生存預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,能夠作為NSCLC患者生存預(yù)后效果的輔助評(píng)價(jià)指標(biāo)。