高齡人群淋巴細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子的檢測(cè)分析

彭聰,王亮,肖漓,肖軍,張金花,程鵬,馬偉鳳,王天天,李春暉,湯玉萌

1.河北北方學(xué)院研究生學(xué)院,張家口 075000；2.中國人民解放軍總醫(yī)院第八醫(yī)學(xué)中心，a 老年醫(yī)學(xué)科，b 呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)部研究所 北京市器官移植與免疫調(diào)節(jié)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

既往研究[1]表明T淋巴細(xì)胞亞群在高齡與衰老過程中的改變最為明顯,T淋巴細(xì)胞亞群失調(diào)介導(dǎo)細(xì)胞免疫能力下降,這是導(dǎo)致高齡人群可能處于流行性疾病高風(fēng)險(xiǎn)的原因之一。增齡與衰老所致的免疫系統(tǒng)失衡是高齡人群的發(fā)病率、獲病率及病死率的顯著因素[2]。因此對(duì)高齡人群的免疫系統(tǒng)評(píng)價(jià)及分析對(duì)指導(dǎo)高齡人群診療及健康判斷十分重要。本研究對(duì)高齡人群淋巴細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子進(jìn)行檢測(cè)并分析,探討高齡人群的機(jī)體及免疫衰老情況。

1 材料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2021年12月27日至2022年3月24日于中國人民解放軍第八醫(yī)學(xué)中心老年科就診的145例患者病歷資料,年齡范圍40～97歲,年齡73.0(59.0,83.0)歲。依據(jù)年齡分為高齡組[88.00(85.00,91.00)歲]52例,其中男性32 例,女性20例;老年組[68.0(66.0,74.0)歲]52例,其中男性20例,女性32例;中年組[52.0(48.0,56.0)歲]41例,其中男性20例,女性21例。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)既往存在以骨性損害為特征的骨科疾病;(2)原發(fā)性免疫功能障礙性疾病,獲得性免疫功能缺陷性疾病、血液系統(tǒng)疾病、精神障礙疾病、3個(gè)月內(nèi)存在重型感染或異體輸血;(3)肺癌、肝癌等惡性腫瘤及主要臟器功能衰竭及器官移植患者;(4)1年內(nèi)服用免疫調(diào)節(jié)制劑及糖皮質(zhì)激素或其他激素補(bǔ)充治療的患者。本研究已通過中國人民解放軍總醫(yī)院第八醫(yī)學(xué)中心倫理審查委員會(huì)審查。

1.2 一般資料收集 包括既往病史(高血壓、糖尿病、冠心病、惡性腫瘤、骨折,急危重癥病史、輸血史、免疫功能缺陷等)、年齡、性別、身高、體重、體重指數(shù)(BMI)。

1.3 淋巴細(xì)胞亞群分析 將20 μL淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)試劑(CD3/CD8/CD45/CD4/CD16+56/CD19)加到絕對(duì)計(jì)數(shù)管的底部;采用反向移液法吸取50 μL充分混勻的EDTA抗凝全血,加入到絕對(duì)計(jì)數(shù)管底部;震蕩混勻后室溫避光孵育15 min;每管加入450 μL溶血素(FACS Lysing solution∶蒸餾水=1∶10),充分混勻后,室溫避光孵育15min;利用FACS Canto Plus流式細(xì)胞儀(美國BD)獲取和分析淋巴細(xì)胞亞群百分比和絕對(duì)數(shù)。

1.4 細(xì)胞因子分析 向樣品管中加入25 μL實(shí)驗(yàn)緩沖液;向樣品管中加入25 μL血漿;向樣品管中加入25 μL檢測(cè)抗體;向樣品管中加入25 μL捕獲微球抗體;室溫[(25±1)℃]避光震蕩孵育2 h(400～500 r/min);向樣品管中加入25 μL SA-PE;室溫[(25±1)℃]避光震蕩孵育0.5 h(400～500 r/min);向樣品管中加入500 μL洗滌緩沖液,渦旋數(shù)秒,300～500g離心5 min,緩慢傾倒出液體,倒扣于吸水紙上;根據(jù)FACS Canto Plus流式細(xì)胞儀(美國BD)需求,向每管中加入120 μL洗滌緩沖液;渦旋10 s將微球重懸后立即上機(jī)檢測(cè),檢測(cè)后數(shù)據(jù)導(dǎo)入LEGEND plex v8.0進(jìn)行分析獲取。

2 結(jié)果

2.1 3組人群一般情況比較 3組人群性別構(gòu)成比、身高、體重、BMI,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表1。

表1 3組人群的一般情況比較

2.2 3組人群淋巴細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子比較 使用單因素多元方差分析比較3組人群淋巴細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子,結(jié)果表示3組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),中年組與老年組之間除外(組間差異P=0.051)。其中高齡組中淋巴細(xì)胞亞群除自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)外,均低于老年組及中年組,且隨年齡增加進(jìn)行性下降。而細(xì)胞因子中CD4/CD8、白細(xì)胞介素(IL)-5、IL-6均據(jù)年齡進(jìn)行性高于其余2組。見表2。

表2 3組人群淋巴細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子的比較[M(P25,P75)]

2.3 高齡組人群淋巴細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子相關(guān)性分析 使用Pearson相關(guān)比較淋巴細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子各變量之間相關(guān)性,結(jié)果顯示CD4/CD8與細(xì)胞毒/抑制性T細(xì)胞百分比、NK細(xì)胞與總T細(xì)胞百分比、CD4/CD8與輔助性/誘導(dǎo)性T細(xì)胞百分比、IL-6與IL-10均具有相關(guān)性。見圖1。

圖1 高齡組淋巴細(xì)胞和細(xì)胞因子相關(guān)性分析

3 討論

本研究顯示,隨著年齡增加,尤其在高齡人群中,除NK細(xì)胞外,其余各淋巴細(xì)胞亞群數(shù)及百分比呈現(xiàn)出了進(jìn)行性下降趨勢(shì),這與國外相關(guān)研究[3]結(jié)果不一致,出現(xiàn)這一情況的機(jī)制暫不明確。但I(xiàn)L-6據(jù)年齡進(jìn)行性增加的結(jié)果與既往研究保持一致,IL-6具有調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、急性期反應(yīng)及造血功能,在機(jī)體抗感染免疫反應(yīng)中起重要作用,IL-6表達(dá)失調(diào)可引起許多疾病,故IL-6在較多疾病中都有預(yù)測(cè)與評(píng)價(jià)能力,而本研究觀察群體IL-6均隨年齡進(jìn)行性增加,提示高齡人群可能存在多種免疫系統(tǒng)高危因素。本研究還觀察到高齡人群CD4/CD8、IL-5均高于其余2組,CD4/CD8比值改變與機(jī)體免疫能力密切相關(guān),比值降低提示免疫功能低下,該個(gè)體多易出現(xiàn)感染或合并多重感染情況,而比值增加常提示存在免疫亢進(jìn)或排異反應(yīng)存在,故本文CD4/CD8增加提示高齡人群存在明確地免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)能力下降,并明顯伴隨免疫亢進(jìn),既往研究表明CD4/CD8比值異常增加能抑制CD8+T細(xì)胞的活化、增殖及分泌,且抑制效果與CD4/CD8比值顯著相關(guān)[4],CD8+T細(xì)胞在免疫系統(tǒng)中具有重要地位,CD8+T細(xì)胞功能及數(shù)量的改變影響了其消除細(xì)胞內(nèi)感染和惡性細(xì)胞的關(guān)鍵作用,降低其提供的保護(hù)性免疫。而IL-5的升高則提示高齡人群可能存在嗜酸/嗜堿性粒細(xì)胞的功能增強(qiáng)及數(shù)量上升,這也就解釋了高齡人群中過敏性疾病與呼吸道疾病發(fā)生率高于普通人群的部分原因[5-8]。并且在本次研究中還完善了淋巴細(xì)胞亞群及細(xì)胞因子的相關(guān)性分析,提示CD4/CD8與輔助性/誘導(dǎo)性T細(xì)胞、CD4/CD8與細(xì)胞毒/抑制性T細(xì)胞百分比、NK細(xì)胞與總T細(xì)胞百分比、IL-6與IL-10均具有相關(guān)性,其相關(guān)機(jī)制既往也具有相應(yīng)報(bào)道。

綜上所述,高齡所致免疫衰老造成了免疫系統(tǒng)各組分的功能及成分紊亂,進(jìn)一步影響了免疫能力,據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道免疫系統(tǒng)的衰老在驅(qū)動(dòng)全身衰老方面也具有因果關(guān)系,因此免疫調(diào)節(jié)也是延長健康時(shí)間、改善衰老的治療靶點(diǎn)[9]。