慢性心力衰竭患者血清FT3、miR-182、miR-126 表達(dá)及與心衰嚴(yán)重程度、近期預(yù)后的關(guān)聯(lián)性

李文靜，張志國，田豐

（河南中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，河南 鄭州 450003）

慢性心力衰竭 （Chronic heart failure，CHF）是各種心血管疾病的最終結(jié)果，在其進(jìn)展過程中，典型表現(xiàn)是心肌間質(zhì)纖維化及心肌重構(gòu)，預(yù)后較差[1]。隨著近年來社會老齡化趨勢加快，CHF 患病率呈持續(xù)升高趨勢[2]。 相關(guān)研究表明，腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)、甲狀腺激素水平與CHF 進(jìn)展關(guān)系密切[3]。 游離三碘甲狀腺原氨酸(FT3)與心功能密切相關(guān)， 是臨床評價心血管疾病預(yù)后的關(guān)鍵預(yù)測因子[4]。 此外，miR-182、miR-126 等多種微小RNA（miRNAs）在心衰時表達(dá)水平異常，可能參與心衰、心臟病理性肥大的發(fā)生發(fā)展[5]。 目前有關(guān)FT3、miRNAs 的報道多集中在評估CHF 患者心功能方面，鮮見與預(yù)后關(guān)系的相關(guān)報道。 基于此，本研究通過分析CHF 患者血清FT3、miR-182、miR-126 表達(dá)及其與心衰嚴(yán)重程度、近期預(yù)后的關(guān)聯(lián)性，旨在為臨床完善檢測及預(yù)后評估提供參考。 現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016 年8 月至2019 年8 月我院96 例CHF 患者作為病例組， 同期72 例健康體檢者為健康組。病例組納入標(biāo)準(zhǔn)：符合CHF 診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；美國紐約心臟病學(xué)會（NYHA）分級Ⅱ～Ⅳ級；病程＞3 個月；入組前無急性心肌梗死、肺栓塞、心源性呼吸困難等疾病。 排除標(biāo)準(zhǔn)：伴自身免疫性疾病、出血性疾病、心房顫動、感染性疾病、惡性腫瘤疾病者；伴肝腎功能缺陷者；繼發(fā)性心包炎、活動性心內(nèi)膜炎等的CHF 患者；入組前服用影響甲狀腺激素水平藥物者。 病例組NYHA 分級Ⅱ級28例，Ⅲ級36 例，Ⅳ級32 例。 兩組年齡、性別、體質(zhì)量指數(shù)、飲酒史、吸煙史、合并癥、空腹血糖等一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。見表1。

表1 兩組一般資料對比

1.2 方法 晨空腹以非抗凝真空管取肘靜脈血4 mL，加溫（37 ℃）促凝，離心15 min（半徑8 cm，轉(zhuǎn)速3500 r/min）取血清。 以上海炫美生物科技有限公司三碘甲狀腺原氨酸(FT3)化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫試劑盒測FT3。 常規(guī)進(jìn)行RNA 提取、 參考RTPCR kit 說明書完成逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)、常規(guī)進(jìn)行PCR 產(chǎn)物電泳及染色， 并應(yīng)用凝膠成像系統(tǒng)對miR-182、miR-126 及內(nèi)參基因U6 進(jìn)行灰度值分析，2-△△Ct法計(jì)算miR-182、miR-126 相對表達(dá)量。Trizol 試劑由美國Invitrogen 公司提供，其他儀器及系統(tǒng)包括定量PCR 儀（美國ABI 公司，7500 型）、逆轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)（美國GIBICOL 公司提供）。 操作均由資深?？漆t(yī)師按試劑盒說明書步驟規(guī)范完成。

1.3 觀察指標(biāo) （1）對比兩組血清FT3、miR-182、miR-126、NT-proBNP、LVEF 水平。 （2）對比不同心功能分級患者血清FT3、miR-182、miR-126、NTproBNP、LVEF 水平。 （3）隨訪3 個月，對比不同預(yù)后患者血清FT3、miR-182、miR-126、NT-proBNP水平。 （4）分析CHF 患者血清FT3、miR-182、miR-126 水平與NT-proBNP、LVEF 水平的相關(guān)性。 （5）ROC 曲線分析血清FT3、miR-182、miR-126 單一預(yù)測患者預(yù)后出現(xiàn)不良心血管事件的價值。 （6）ROC 曲線分析血清FT3、miR-182、miR-126 聯(lián)合預(yù)測患者預(yù)后出現(xiàn)不良心血管事件的價值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)分析軟件，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（±s）表示，兩組間比較采用t 檢驗(yàn)； 多組間比較采用單因素方差分析，多重比較采用LSD-t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率表示，兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)。 Pearson 分析法進(jìn)行相關(guān)性分析。 ROC 曲線分析血清FT3、miR-182、miR-126預(yù)測患者預(yù)后出現(xiàn)不良心血管事件風(fēng)險。 P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清FT3、miR-182、miR-126、NT-proBNP、LVEF 水 平 病 例 組 血 清FT3、miR-126 及LVEF 水平低于健康組，血清miR-182、NT-proBNP水平高于健康組（P＜0.05）。 見表2。

表2 兩組血清FT3、miR-182、miR-126、NT-proBNP、LVEF 水平比較（±s）

表2 兩組血清FT3、miR-182、miR-126、NT-proBNP、LVEF 水平比較（±s）

組別 n FT3（nmol/L） miR-182 miR-126 NT-proBNP（ng/L） LVEF（%）病例組健康組t 值P 值96 72 5.23±1.19 6.96±2.04 6.895＜0.001 10.15±2.82 1.63±0.58 25.222＜0.001 0.74±0.13 1.02±0.17 12.100＜0.001 2631.96±419.84 124.47±52.28 50.349＜0.001 48.37±4.62 61.35±6.20 15.553＜0.001

2.2 不同心功能分級患者血清各指標(biāo)、NT-proBNP、LVEF 水平 隨患者心功能分級的增加， 血清FT3、miR-126 及LVEF 水平逐漸降低， 血清miR-182、NT-proBNP 水平逐漸增高（P＜0.05）。 見表3。

表3 不同心功能分級患者血清各指標(biāo)、NT-proBNP、LVEF 水平比較（±s）

表3 不同心功能分級患者血清各指標(biāo)、NT-proBNP、LVEF 水平比較（±s）

注：與Ⅱ級比較，①P＜0.05；與Ⅲ級比較，②P＜0.05。

組別 n FT3（nmol/L） miR-182 miR-126 NT-proBNP（ng/L） LVEF（%）Ⅳ級Ⅲ級Ⅱ級F 值P 值32 36 28 3.97±1.30①②5.28±1.51①6.61±2.18 18.602＜0.001 14.18±3.09①②10.39±2.45①5.24±1.32 100.613＜0.001 0.58±0.09①②0.71±0.12①0.96±0.17 66.833＜0.001 4398.94±476.42①②2457.61±382.73①836.72±174.35 684.922＜0.001 42.94±3.68①②47.25±4.17①56.02±5.03 71.380＜0.001

2.3 不同預(yù)后患者血清各指標(biāo)、NT-proBNP 水平出現(xiàn)不良心血管事件患者血清FT3、miR-126 水平低于未出現(xiàn)者，血清miR-182、NT-proBNP 水平高于未出現(xiàn)者（P＜0.05）。 見表4。

表4 不同預(yù)后患者血清各指標(biāo)、NT-proBNP 水平比較（±s）

表4 不同預(yù)后患者血清各指標(biāo)、NT-proBNP 水平比較（±s）

組別 n FT3（nmol/L） miR-182 miR-126 NT-proBNP（ng/L）出現(xiàn)不良心血管事件未出現(xiàn)不良心血管事件t 值P 值30 66 4.35±1.04 5.63±1.32 4.687＜0.001 12.77±3.09 8.96±1.84 7.525＜0.001 0.59±0.11 0.81±0.14 7.599＜0.001 3392.98±482.36 2286.04±376.28 12.204＜0.001

2.4 慢性心力衰竭患者血清各指標(biāo)水平與NTproBNP、LVEF 水平的相關(guān)性 患者血清FT3、miR-126 水平與NT-proBNP 表達(dá)呈負(fù)相關(guān)， 與LVEF水平呈正相關(guān)， 血清miR-182 水平與NT-proBNP表達(dá)呈正相關(guān)，與LVEF 水平呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。見表5。

表5 慢性心力衰竭患者血清各指標(biāo)水平與NT-proBNP、LVEF 水平的相關(guān)性

2.5 血清各指標(biāo)單一預(yù)測患者預(yù)后出現(xiàn)不良心血管事件的ROC 曲線 血清各指標(biāo)預(yù)測患者預(yù)后出現(xiàn)不良心血管事件的AUC 均較高，尤以血清miR-182 最高。 見表6、圖1。

表6 血清各指標(biāo)單一預(yù)測患者預(yù)后出現(xiàn)不良心血管事件的ROC 曲線

圖1 血清各指標(biāo)單一預(yù)測ROC 曲線

2.6 血清各指標(biāo)聯(lián)合預(yù)測患者預(yù)后出現(xiàn)不良心血管事件的ROC 曲線 將血清FT3、miR-182、miR-126 采取聯(lián)合預(yù)測顯示，應(yīng)用血清各指標(biāo)聯(lián)合預(yù)測慢性心力衰竭患者預(yù)后出現(xiàn)不良心血管事件的AUC 為0.882，95%CI 為0.800～0.939， 當(dāng)血清FT3截 斷 值≤4.71 nmol/L，miR-182 截 斷 值＞10.81，miR-126 截斷值≤0.76 時， 聯(lián)合預(yù)測的敏感度為76.67%、特異度為92.42%。 見圖2。

3 討論

CHF 致殘率、病死率高，嚴(yán)重危害患者健康安全，已發(fā)展成全球性公共衛(wèi)生問題之一[7]。 已有研究發(fā)現(xiàn)，CHF 患者普遍存在血清NT-proBNP 水平異常升高現(xiàn)象， 同時伴LVEF 降低， 二者可作為CHF 臨床診斷、預(yù)后評估的重要指標(biāo)[8]。 本研究結(jié)果顯示，病例組血清NT-proBNP 水平高于健康組，LVEF 水平低于健康組（P＜0.05），與上述研究結(jié)果一致。 但CHF 患者多合并糖尿病、高血壓等，病情復(fù)雜，因此，有必要聯(lián)合其他相關(guān)指標(biāo)評估預(yù)后。

甲狀腺激素是人體重要內(nèi)分泌激素， 不僅參與調(diào)節(jié)機(jī)體代謝功能， 且對心血管系統(tǒng)有重要調(diào)節(jié)作用，如：甲狀腺激素可通過提升Ca2+-ATP 酶、Na+-K+-ATP 酶生物活性，促進(jìn)心肌收縮，刺激心肌細(xì)胞蛋白質(zhì)合成[9-10]。 本研究發(fā)現(xiàn)，CHF 患者血清FT3 顯著低于健康群體（P＜0.05），說明CHF 患者可能存在甲狀腺功能異常，與學(xué)者王翠艷等[11]研究結(jié)果近似。 FT3 是甲狀腺分泌主要活性物質(zhì)之一，對蛋白質(zhì)合成、能量產(chǎn)生、體溫調(diào)節(jié)具有極重要作用[12]。 CHF 患者外周血FT3 水平降低，加重心肌收縮功能減退，繼而促進(jìn)病情進(jìn)展，推測可能與心肌能量代謝異常致心臟射血功能障礙有關(guān)。 國外一項(xiàng)多因素分析顯示，F(xiàn)T3 水平降低是CHF 發(fā)病發(fā)展的獨(dú)立危險因素[13]。 本研究顯示，隨心功能惡化血清FT3、LVEF 水平逐漸降低，NT-proBNP 水平逐漸增高，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)血清FT3 與NT-proBNP 表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，與LVEF 水平呈正相關(guān)，且出現(xiàn)不良心血管事件患者血清FT3 水平升高更顯著（P＜0.05）， 說明血清FT3 水平與CHF 患者病情程度及預(yù)后關(guān)系密切。 FT3 影響CHF 患者病情的機(jī)制可能是：（1）FT3 能直接介導(dǎo)心肌蛋白生成，造成生理性肥厚，刺激心肌收縮，且通過影響α 肌球蛋白重鏈基因表達(dá)改變心肌舒張速率[14]；（2）調(diào)節(jié)心臟前后負(fù)荷，減小外周血管阻力，增加心輸出量，動物試驗(yàn)中予以FT3 可提高心輸出量， 降低冠脈阻力[15]；（3）FT3 能降低循環(huán)血去甲腎上腺水平，提升心肌細(xì)胞膜中鳥嘌呤核苷酸調(diào)節(jié)蛋白G 含量，增加腎上腺素β 受體敏感性[16]。

miRNAs 普遍存在于組織細(xì)胞內(nèi)，且與細(xì)胞肥大、心肌發(fā)育、組織纖維化等有關(guān)，其中部分miRNAs 在外周血表達(dá)可為試驗(yàn)檢測提供依據(jù)。 近年研究顯示，miR-126 可通過調(diào)控血管內(nèi)皮生長因子、 血管細(xì)胞黏附分子等基因表達(dá)， 介導(dǎo)血管發(fā)育、血管炎癥反應(yīng)等生理、病理過程[17]；miR-182 在脂代謝、糖代謝調(diào)控方面發(fā)揮重要作用，其表達(dá)紊亂與動脈粥樣硬化、糖尿病發(fā)生等有關(guān)。 病理檢測發(fā)現(xiàn)，心功能降低的主要結(jié)構(gòu)異常是心血管重構(gòu)，推測miR-182、miR-126 可能通過介導(dǎo)血管異常新生等過程參與心衰發(fā)生過程。 本研究結(jié)果顯示，病例組血清miR-126 水平低于健康組，miR-182 水平高于健康組（P＜0.05），與上述推測一致。 但有研究顯示， 急性心肌梗死 （Acute myocardial infarction，AMI）患者miR-126 表達(dá)量呈升高趨勢[18-19]。本研究與此不符， 分析可能是miR-126 主要參與血管新生及損傷修復(fù)，AMI 患者發(fā)病之初miR-126 基因響應(yīng)參與血管損傷修復(fù)， 而CHF 患者處于心功能失代償階段，miR-126 調(diào)控機(jī)制較弱。 進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)， 血清miR-126 水平與NT-proBNP水平呈負(fù)相關(guān)，與LVEF 水平呈正相關(guān)，血清miR-182 水平與NT-proBNP 水平呈正相關(guān)， 與LVEF水平呈負(fù)相關(guān) （P＜0.05）， 且血清FT3、miR-182、miR-126 聯(lián)合評價預(yù)后不良心血管事件發(fā)生的AUC 值最大（0.882），證實(shí)血清miR-182、miR-126水平與CHF 發(fā)病發(fā)展關(guān)系密切， 聯(lián)合檢測可為臨床評估預(yù)后提供參考。

綜上可知，CHF 患者血清FT3、miR-126 水平降低，miR-182 水平升高，且均與心衰嚴(yán)重程度、近期預(yù)后關(guān)系密切， 聯(lián)合檢測可為評估近期不良心血管事件發(fā)生風(fēng)險提供參考。