液相色譜法測(cè)定植物源性食品中滅蠅胺

楊飛帆，趙舒景

（上海市崇明食品藥品檢驗(yàn)所 崇明食品安全檢測(cè)中心，上海 202150）

滅蠅胺又名環(huán)丙氨嗪，可以誘使雙翅目幼蟲和蛹在形態(tài)上發(fā)生畸變，成蟲羽化不全或受抑制。其可用于控制動(dòng)物廄舍內(nèi)的蒼蠅以及防治黃瓜、茄子、四季豆、葉菜類和花卉上的美洲斑潛蠅等農(nóng)業(yè)害蟲，是一種高效低毒殺蟲劑[1]。

根據(jù)2021版國(guó)家食品安全監(jiān)督抽檢實(shí)施細(xì)則中的要求，對(duì)芹菜、豇豆、菜豆3類蔬菜有滅蠅胺項(xiàng)目的檢測(cè)要求。隨著檢測(cè)技術(shù)的日益發(fā)展，植物源性食品中滅蠅胺的檢測(cè)方法主要有高效液相色譜法[2-3]、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法[4-5]和量子點(diǎn)熒光探針法[6]。根據(jù)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2019）[7]的規(guī)定，蔬菜水果中的滅蠅胺均使用《蔬菜中滅蠅胺殘留量的測(cè)定 高效液相色譜法》（NY/T 1725—2009）[8]（以下簡(jiǎn)稱標(biāo)準(zhǔn)方法）進(jìn)行檢測(cè)，該方法樣品經(jīng)提取濃縮，經(jīng)SCX柱凈化，以達(dá)到檢測(cè)的效果，存在前處理復(fù)雜、有機(jī)溶劑使用量大等缺點(diǎn)。目前植物源性食品中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)的前處理方法有固相萃取[9]、QuECHERS[10]和GPC-GCMS[11]等。本研究是在標(biāo)準(zhǔn)方法的基礎(chǔ)上，通過不斷改進(jìn)前處理步驟、減少有機(jī)溶劑的使用量、優(yōu)化檢測(cè)條件等，達(dá)到滅蠅胺檢測(cè)的目的。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

基質(zhì)：豇豆（來源為市售產(chǎn)品，經(jīng)檢測(cè)后為滅蠅胺陰性樣品）。

試劑：乙腈；乙酸銨；甲醇（色譜純）；滅蠅胺標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 μg/mL），農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所。

1.2 儀器與設(shè)備

高效液相色譜Agilent 1260，配有紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器；電子天平梅特勒-托利多，精度0.01 g；高速勻漿機(jī)T18；高速離心機(jī)；渦旋儀；移液槍；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；氮吹儀；50 mL離心管； 150 mL梨行瓶；各類一次性用品（滴管、貯液器、 0.45 μm有機(jī)濾膜、2 mL注射管等）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 溶液配制

滅蠅胺標(biāo)準(zhǔn)工作使用液的配制：吸取100 μL滅蠅胺標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，得濃度為1 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)工作使用液。

1.3.2 線性分析

準(zhǔn)確吸取滅蠅胺標(biāo)準(zhǔn)工作使用液，用乙腈配制 成0 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、 200 ng/mL、400 ng/mL和800 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，注入HPLC，得到色譜圖，以保留時(shí)間定性。以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中目標(biāo)物的濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.3 樣品前處理

（1）提取與濃縮。準(zhǔn)確稱取勻漿試樣10 g于50 mL 離心管中，加入10 mL乙酸銨-乙腈溶液，高速勻漿2 min，取20 mL乙酸銨-乙腈溶液清洗均質(zhì)刀頭，洗液并入50 mL離心管中，用渦旋儀渦旋混勻1 min，用乙酸銨-乙腈溶液定容至50 mL。經(jīng)低溫高速離心機(jī)4500 r/min離心5 min，得到固液分離的狀態(tài)。

用移液槍準(zhǔn)確吸取10 mL上清提取液至150 mL梨形瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至只含水溶液的狀態(tài)（冷凝裝置無液滴滴下），水浴溫度為40 ℃。取下后加入2 mL鹽酸溶液，待凈化。

（2）凈化。依次用5 mL甲醇、水淋洗活化強(qiáng)陽(yáng)離子交換萃取柱（SCX），當(dāng)液面到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，立即將帶凈化的溶液轉(zhuǎn)移至SCX柱中，再用 5 mL鹽酸溶液分兩次清洗150 mL梨形瓶中殘留物，并全部轉(zhuǎn)至SCX柱中。然后依次用5 mL水、甲醇淋洗SCX柱，棄去所有流出液并將SCX柱抽干。將SCX柱置于另一潔凈的150 mL梨形瓶上，SCX柱上加貯液器，加入15 mL氨水-甲醇溶液進(jìn)行洗脫。收集洗脫液，并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，水浴溫度 40 ℃，濃縮至近干，氮吹儀吹干，最后用2 mL乙腈-水溶液復(fù)溶，過0.45 μm有機(jī)微孔濾膜，上液相色譜 檢測(cè)。

1.3.4 液相色譜檢測(cè)條件

色譜柱：NH2柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng) 相：乙腈-水溶液（98+2）；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣體積：30 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：215 nm；柱溫：35 ℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 目標(biāo)物提取方式的選擇

農(nóng)藥殘留目標(biāo)物的提取前處理有很多種方式，可選擇直接渦旋混勻、超聲提取、振蕩提取以及均質(zhì)提取等方式。本法選擇均質(zhì)提取的方式，通過使用陽(yáng)性樣品對(duì)比實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，均質(zhì)提取法樣品提取更完全。

2.2 樣品定容方式的選擇

標(biāo)準(zhǔn)方法中是稱取20 g樣品，使用100 mL的比色管定容，并采用布氏漏斗過濾的方式獲得提取液。方法存在樣品量大、提取溶劑用量大和固液分離方法煩瑣等缺點(diǎn)。本法采用的是稱取10 g樣品，用 50 mL離心管定容，采用離心機(jī)進(jìn)行固液分離，減少了樣品和提取溶劑的用量，簡(jiǎn)化了分離方法，提高了分離效率。

2.3 色譜柱的選擇

色譜檢測(cè)過程中，一般有兩類色譜柱可進(jìn)行選擇，即正相色譜柱和反相色譜柱。流動(dòng)相極性大于色譜柱的為反相色譜，最常見的為C18柱，常用于分離極性化合物。反之為正相色譜，常用于分離弱極性的化合物，滅蠅胺為弱極性化合物，所以選擇正相色譜柱NH2柱進(jìn)行檢測(cè)。

2.4 流動(dòng)相的選擇

反相色譜柱的使用與正相色譜柱相反，水相比例不宜太大，否則會(huì)影響分離效果。標(biāo)準(zhǔn)方法中推薦使用乙腈-水（97+3），實(shí)際實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)以豇豆為基質(zhì)時(shí)，存在雜峰與目標(biāo)峰的分離度達(dá)不到檢測(cè)要求，影響檢測(cè)效果。通過增加有機(jī)相比例，調(diào)整乙腈-水（98+2），結(jié)果顯示分離度完全能達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求，分離效果優(yōu)于原比例。同時(shí)，乙腈-水（98+2）溶液需要提前配制，若將水溶液和乙腈溶液按照2∶98的比例在線混合，會(huì)出現(xiàn)因水相占比太低，產(chǎn)生混合不均勻的情況，從而導(dǎo)致目標(biāo)物的出峰時(shí)間存在一定的漂移，影響結(jié)果的判定。豇豆中滅蠅胺色譜圖見圖1。

圖1 豇豆中滅蠅胺色譜圖

2.5 進(jìn)樣體積的選擇

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)進(jìn)樣量為10 μL時(shí)，檢出限濃度的響應(yīng)極小，再加上基質(zhì)的干擾，很難達(dá)到準(zhǔn)確檢測(cè)的目的。通過增加進(jìn)樣量至30 μL，可以使信噪比完全達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。

2.6 線性相關(guān)性

當(dāng)滅蠅胺濃度為0～800 ng/mL，具有良好的相關(guān)性，線性相關(guān)系數(shù)r＞0.9999，線性回歸方程為y=345.73713x-0.291771。

2.7 回收率和精密度

通過豇豆樣品加標(biāo)回收來考察方法的準(zhǔn)確度，通過同水平加標(biāo)的6個(gè)平行樣品間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）來考察方法的精密度。稱取18份豇豆樣品進(jìn)行3水平（檢出限0.02 mg/kg、方法定量限0.06 mg/kg、最高限量0.5 mg/kg）加標(biāo)測(cè)定。通過標(biāo)準(zhǔn)系列方程讀取測(cè)定濃度結(jié)果，計(jì)算樣品本底值、加標(biāo)回收率以及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差?；厥章屎途芏冉Y(jié)果見表1。

由表1可知，滅蠅胺加標(biāo)回收率為75.0%～ 112.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于20%，其回收率和精密度均符合檢測(cè)要求，說明本方法具有良好的準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性。

表1 加標(biāo)回收率和精密度結(jié)果（n=6）

3 結(jié)論

本研究在標(biāo)準(zhǔn)方法的基礎(chǔ)上，對(duì)豇豆中滅蠅胺殘留檢測(cè)的前處理方法進(jìn)行優(yōu)化，使操作更加簡(jiǎn)單、高效，減少樣品和提取溶劑的用量。滅蠅胺在濃度0～800 ng/mL，均具有良好的相關(guān)性，且其回收率、精密度等均可達(dá)到項(xiàng)目檢測(cè)要求，對(duì)其他植物源性食品中滅蠅胺的檢測(cè)也有一定的參考 價(jià)值。