β-七葉皂苷鈉輔助溶栓治療對(duì)急性腦梗死病人血清miR-155與miR-181c表達(dá)的影響

秦樹(shù)巧，黑丹丹

急性腦梗死是一種常見(jiàn)的高致死率、高致殘率的腦血管疾病，發(fā)病機(jī)制為腦組織相關(guān)動(dòng)脈血流驟然減少或停止，導(dǎo)致腦組織缺氧缺血損傷，腦組織壞死[1]。急性腦梗死通常是由腦部供血?jiǎng)用}出現(xiàn)血栓和動(dòng)脈粥樣硬化，造成管腔狹窄閉塞、局部腦供血不足[2]，主要臨床表現(xiàn)為起病突然、頭暈、惡心、嘔吐、半身不遂、耳鳴、眩暈、吞咽困難、雙側(cè)或上下肢體比重異常、語(yǔ)言表達(dá)不清等[3]。目前臨床治療急性腦梗死主要采用超早期溶栓，常用的藥物主要是纖溶酶原激活劑(recombinant tissue plasminogen activator，rt-PA)、尿激酶等[4]。正確及時(shí)的治療方案可降低急性腦梗死病人致殘率和致死率，加快康復(fù)并提高預(yù)后。rt-PA半衰期短，需長(zhǎng)時(shí)間大劑量給藥，降低病人給藥耐受性可能帶來(lái)副作用，同時(shí)尿激酶不具有蛋白結(jié)合特異性，對(duì)纖維蛋白和全身循環(huán)纖溶酶原均有激活作用，大劑量使用可能帶來(lái)全身性抗凝和溶栓等出血并發(fā)癥，因此，不論是rt-PA還是尿激酶，單獨(dú)使用療效不理想[5]。β-七葉皂苷鈉能有效保護(hù)一氧化氮等引起的腦水腫，具有抗?jié)B出、抗炎、抗腫脹及改善血液循環(huán)、增加靜脈張力、恢復(fù)毛細(xì)血管通透性、糾正腦功能、促進(jìn)淋巴回流，消退腫脹的作用。有研究顯示，β-七葉皂苷鈉對(duì)腦水腫、其他原因所致腫脹具有顯著的療效[6]。微小RNA(miRNA)是一種廣泛存在于各類生物中的高度保守的內(nèi)源性非編碼RNA。miRNA與mRNA結(jié)合可阻斷蛋白編碼基因的表達(dá)，參與各種生理過(guò)程，如炎癥反應(yīng)、分化、代謝、免疫、凋亡等，其中外周血miRNA可反映腦組織miRNA水平，因此，miRNA可作為急性腦梗死的新型診斷標(biāo)志物[7-8]。本研究觀察β-七葉皂苷鈉輔助溶栓治療對(duì)急性腦梗死病人血清miR-155與miR-181c表達(dá)的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年4月—2019年4月在我院收治的106例急性腦梗死病人，按隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組和觀察組。觀察組53例，男28例，女25例；年齡60～75(66.34±5.73)歲；病程3～19(12.14±2.10)d。對(duì)照組53例，男27例，女26例；年齡60～76(66.52±5.74)歲；病程4～20(12.35±2.50)d。兩組一般資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) 首次發(fā)病；經(jīng)頭顱CT或MRI檢查診斷為腦梗死[9]；意識(shí)清楚，神經(jīng)功能缺損未繼續(xù)進(jìn)展，生命體征穩(wěn)定；簽署知情同意書(shū)。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 短暫性腦缺血發(fā)作、腦栓塞、腔隙性腦梗死、顱內(nèi)出血病史；嚴(yán)重感染及合并嚴(yán)重心、肝、腎疾病、顱腦外傷和腫瘤；伴有運(yùn)動(dòng)功能障礙；出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥和不良事件、病情迅速惡化，應(yīng)及時(shí)中止研究；2周內(nèi)進(jìn)行過(guò)外科手術(shù)和服用抗凝藥物；伴有神經(jīng)系統(tǒng)疾病或癲癇；妊娠或哺乳期女性等。

1.3 治療方法 兩組均給予常規(guī)治療，包括營(yíng)養(yǎng)支持、擴(kuò)張腦血管、活血化瘀、抗血小板等。對(duì)照組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上聯(lián)合尿激酶(麗珠制藥廠生產(chǎn))靜脈注射，1×104～2×104U/kg，15%的藥物總量在5 min內(nèi)靜脈注射完成，余下藥物以0.12×104～0.20×104U/kg尿激酶等滲鹽水靜脈注射1 h。觀察組在對(duì)照組基礎(chǔ)上給予β-七葉皂苷鈉(山東綠葉制藥公司生產(chǎn))，β-七葉皂苷鈉0.04 mg/mL等滲鹽水靜脈注射，每次20 mg，每日2次。兩組均治療2周。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 神經(jīng)功能缺損情況 參照美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院卒中量表(NIHSS)評(píng)分[10]進(jìn)行評(píng)定。

1.4.2 血清miR-155、miR-181c表達(dá) 于治療前后抽取肘靜脈血5 mL，保存于EDTA抗凝管中，靜置于4 ℃低溫1 h后，以3 000 r/min離心15 min，取上清液，-80 ℃冷藏保存待檢。操作步驟參照文獻(xiàn)[8]：取上層血清加入血清裂解液裂解細(xì)胞，提取血清總RNA(RNA試劑盒，由賽默飛世爾中國(guó)公司提供)，并測(cè)定總RNA濃度(采用紫外分光光度法)，樣品A260 A280≥1.80視為合格；總RNA逆轉(zhuǎn)錄：逆轉(zhuǎn)錄的單鏈模板cDNA(逆轉(zhuǎn)錄試劑盒由賽默飛世爾中國(guó)公司提供)；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)：使用試劑盒進(jìn)行操作，條件為95 ℃ 5 min，95 ℃ 40 s，60 ℃ 20 s，72 ℃ 15 s，連續(xù)循環(huán)40次，采用2-△△Ct分別計(jì)算血清miR-155、miR-181c相對(duì)表達(dá)量。

1.4.3 不良反應(yīng) 治療2周后，觀察兩組不良反應(yīng)發(fā)生情況，包括腦出血、皮下出血、消化道出血。

2 結(jié) 果

2.1 兩組治療前后NIHSS評(píng)分比較 治療前，兩組NIHSS評(píng)分比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療2周后，兩組NIHSS評(píng)分較治療前均降低，且觀察組低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表1。

表1 兩組NIHSS評(píng)分比較(±s) 單位：分

2.2 兩組治療前后血清miR-155、miR-181c比較 治療前，兩組血清miR-155、miR-181c比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療2周后，兩組血清miR-155、miR-181c含量較治療前均降低，且觀察組低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表2。

2.3 兩組不良反應(yīng)發(fā)生率比較 治療2周后，對(duì)照組發(fā)生腦出血4例，皮下出血2例，消化道出血2例；觀察組發(fā)生腦出血1例，皮下出血1例，消化道出血1例。兩組不良反應(yīng)發(fā)生率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.028)。詳見(jiàn)表3。

表3 兩組不良反應(yīng)發(fā)生率比較 單位：例(%)

3 討 論

急性腦梗死多由于血管狹窄或被栓子等阻塞，導(dǎo)致腦組織局部供血氧不足，從而引發(fā)多細(xì)胞因子相互作用，發(fā)生腦組織壞死等不良結(jié)果，導(dǎo)致病人肢體不隨大腦支配、意識(shí)障礙甚至昏迷[11]。有研究顯示，腦梗死發(fā)生率呈逐年升高趨勢(shì)，具有高致殘率、高致死率的特點(diǎn)，成為我國(guó)老年人殘疾、死亡的主要原因之一[12]。臨床治療急性腦梗死多采用短期溶栓、長(zhǎng)期降壓、營(yíng)養(yǎng)血管的方式。血栓溶解療法是指應(yīng)用外源性激活物激活體內(nèi)溶解系統(tǒng)以溶解血管內(nèi)血栓，疏通血管，從而搶救因血管阻塞受累的組織，保護(hù)腦缺血組織，縮小梗死面積，減少缺損腦功能，緩解病情。80%以上的急性腦梗死發(fā)生時(shí)腦動(dòng)脈被血栓堵塞，溶解血栓能可逆性恢復(fù)腦組織血氧供給，因此溶栓是重要的治療方法之一；尿激酶是一種價(jià)格相對(duì)較低，且安全性較好的溶栓藥物，為病人普遍接受，尿激酶單獨(dú)使用存在不良反應(yīng)[13-14]。

七葉皂苷鈉是由植物中提取出來(lái)的，屬于一種三萜皂苷，β-七葉皂苷鈉是其活性成分，具有抗?jié)B出、抗炎、抗腫脹等藥理作用，可改善血液循環(huán)，增加靜脈張力，恢復(fù)毛細(xì)血管通透性，糾正腦功能，并促進(jìn)淋巴回流，消退腫脹，因其具有臨床療效好、不良反應(yīng)少的特點(diǎn)，臨床上廣泛用于各種腫脹及神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療。β-七葉皂苷鈉可減輕毛細(xì)血管通透性，穩(wěn)定細(xì)胞膜，對(duì)抗炎性介質(zhì)如磷酸組胺和緩激肽等，清除自由基，從而治療腦血管疾病[15]。腦梗死發(fā)生時(shí)，由于腦組織損傷刺激炎性因子釋放增加，易引起腦缺血后再灌注損傷和神經(jīng)功能細(xì)胞缺損[16]。

miRNA屬于一類高度保守的單鏈RNA，可促進(jìn)神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育，在機(jī)體各組織中均高度表達(dá)，參與細(xì)胞分化、細(xì)胞免疫等生理過(guò)程，并發(fā)揮重要的作用[17]。有研究顯示，外周血中某些miRNA含量可反映腦組織miRNA水平，miR-155與miR-181c是與腦梗死密切相關(guān)的miRNA亞型[18]。本研究采用β-七葉皂苷鈉輔助尿激酶溶栓治療急性腦梗死，觀察其對(duì)病人血清miR-155與miR-181c表達(dá)的影響。結(jié)果顯示，治療2周后，兩組NIHSS評(píng)分較治療前均降低(P<0.05)，且觀察組低于對(duì)照組(P<0.05)，提示β-七葉皂苷鈉輔助尿激酶溶栓能有效改善急性腦梗死病人神經(jīng)功能缺損情況，可能是由于β-七葉皂苷鈉通過(guò)穩(wěn)定細(xì)胞膜，清除自由基，減輕毛細(xì)血管通透性，從而改善血液循環(huán)，糾正腦功能，減輕神經(jīng)功能缺損情況。同時(shí)結(jié)果顯示，治療2周后，對(duì)照組發(fā)生血清miR-155、miR-181c含量較治療前均降低(P<0.05)，且觀察組低于對(duì)照組(P<0.05)，提示β-七葉皂苷鈉輔助尿激酶溶栓治療急性腦梗死，可降低病人血清miR-155、miR-181c含量，原因可能是炎性因子表達(dá)降低影響血清因子miR-155、miR-181c表達(dá)。王興萍[19]研究顯示，miR-155參與動(dòng)脈斑塊破裂和腦血栓形成，因此急性腦梗死病人外周血miR-155表達(dá)高于健康人。miR-181c與線粒體功能和神經(jīng)元損傷密切相關(guān)，高水平miR-181c導(dǎo)致線粒體功能紊亂，影響線粒體為神經(jīng)元提供能量，因而損傷神經(jīng)元[8]。本研究觀察組miR-181c水平低于對(duì)照組，可能是由于神經(jīng)功能改善負(fù)反饋調(diào)節(jié)miR-181c表達(dá)。治療2周后，對(duì)照組發(fā)生腦出血4例，皮下出血2例，消化道出血2例；觀察組發(fā)生腦出血1例，皮下出血1例，消化道出血1例。兩組不良反應(yīng)發(fā)生率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.028)。提示β-七葉皂苷鈉輔助尿激酶溶栓治療急性腦梗死能降低不良反應(yīng)發(fā)生，本研究將兩藥聯(lián)合使用起到了增效減毒的效果。

綜上所述，采用β-七葉皂苷鈉輔助尿激酶溶栓治療急性腦梗死可改善病人神經(jīng)功能缺損情況，降低miR-155、miR-181c含量，緩解炎癥反應(yīng)，減少不良反應(yīng)發(fā)生。