基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析賈躍進(jìn)老師膏方調(diào)治慢性失眠經(jīng)驗

王瑞敏，劉 毅，劉 寧，李 菲，賈躍進(jìn)

失眠(insomnia)指以入睡困難、睡眠維持困難或早醒，并伴有如疲勞、注意力不足和情緒不穩(wěn)定等日間功能障礙為主要癥狀的疾病[1]，其患病率為10%～20%，而其中約50%為慢性失眠[2]。慢性失眠指病程>3個月的失眠[1]，通常被認(rèn)為是高血壓、糖尿病、抑郁癥、焦慮癥等軀體或精神疾病的危險因素，對人體有較大危害[3-4]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療失眠的藥物缺乏長期療效的證據(jù)，且長期應(yīng)用存在不良反應(yīng)，應(yīng)對慢性失眠尚無理想藥物[5-6]。膏方具有緩補慢調(diào)、治病求本的特點，擅于調(diào)治慢性疾病，且安全、有效，同時兼具較佳的口味，因此，適合慢性失眠病人的長期治療，而且通過研究名老中醫(yī)膏方調(diào)治慢性失眠的經(jīng)驗有利于傳承中醫(yī)思維、推廣適宜技術(shù)、指導(dǎo)臨床應(yīng)用、研究開發(fā)藥物。

賈躍進(jìn)老師是第六批全國名老中醫(yī)藥專家工作室指導(dǎo)老師，臨證40余年，尤其擅長治療失眠癥、抑郁癥等精神科疾病以及應(yīng)用膏方調(diào)治慢性病和亞健康狀態(tài)。鑒于膏方受中醫(yī)理論指導(dǎo)，其反映的信息具有大數(shù)據(jù)的特點，而其組方機制具有多成分、多靶點、多通路的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)特性，因此，本研究結(jié)合理論分析、數(shù)據(jù)挖掘及網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法分析賈躍進(jìn)老師膏方調(diào)治慢性失眠的經(jīng)驗，以反映其中體現(xiàn)的中醫(yī)思維、用藥規(guī)律與可能機制。

賈躍進(jìn)老師膏方調(diào)治慢性失眠的思路為：①開路為先，首重三辨。正式服用膏方之前，應(yīng)先服一段湯劑，名之“開路方”，其作用有三：一為利用湯劑，“湯者，蕩也”之性，較快祛除病邪，穩(wěn)定、緩和病情，使病人體質(zhì)易于接受膏方調(diào)治；二為調(diào)理脾胃功能，為病人更好地吸收膏方治療成分創(chuàng)造條件，賈躍進(jìn)老師常于脾虛濕盛病人服膏方前開一些健脾化濕藥材之故，逮為此也；三為因一料膏滋常需服用1～2個月，若病人藥后不適，或藥不對癥則難以更改，恐造成損失，此時則可以“開路方”摸索對證、觀察療效，以保周全。賈躍進(jìn)老師認(rèn)為“開路方”尤應(yīng)注重三辨，即辨病、辨證、辨體，以求能正確引導(dǎo)膏方的制定。使用膏方調(diào)治慢性失眠亦同理，首當(dāng)根據(jù)診斷標(biāo)準(zhǔn)診斷為慢性失眠，次當(dāng)辨明是何證，而對于體質(zhì)，久病失眠，勢必虛實夾雜，臨床慢性失眠病人常存在肝郁、脾虛、虛火、痰濕等體質(zhì)偏向，故賈躍進(jìn)老師多分別投以香砂六君子湯、丹梔逍遙散、柴芩溫膽湯等方加減以扶正祛邪、調(diào)理脾胃、糾正體質(zhì)。②顧護脾胃強調(diào)疏肝。中醫(yī)學(xué)在《黃帝內(nèi)經(jīng)》時期就構(gòu)建了失眠的疾病模型，如：“衛(wèi)氣不得入于陰，長留于陽，則陽氣滿，陽氣盛則陽蹻盛，不得入于陰則陰氣虛，故不目瞑[7]。”從營衛(wèi)、陰陽節(jié)律周期的角度進(jìn)行了闡釋；而“人以氣為主，一息不運則機緘窮，一毫不續(xù)則穹壤判”[8]，可見氣的運行直接調(diào)控著人體的生命活動，營衛(wèi)、陰陽亦如是，因此賈躍進(jìn)老師認(rèn)為“百病生于氣”，并在此基礎(chǔ)上將失眠的總病機“營衛(wèi)失和、陰陽不交”[9]，歸結(jié)于氣機失常，而進(jìn)一步具體到臟腑，則責(zé)之與氣機相關(guān)性較大的肝、脾(胃)兩樞機。從長期失眠的臨床發(fā)病原因來看，現(xiàn)代人多處于一定壓力之下，情志不舒者眾，加之嗜食辛辣肥甘，易傷脾胃，同時情志失?？芍赂斡舳M(jìn)一步侵犯脾胃，造成肝脾(胃)不調(diào)，“胃不和則臥不安”，從而失眠，而長期失眠病人的病機存在一定的變化和轉(zhuǎn)歸，主要是郁而化熱和易生痰濕等肝脾相關(guān)病理變化。膏滋中用藥較為滋膩，補益藥較多，因此在運用膏方時本就應(yīng)佐以理氣健脾之品，而調(diào)治慢性失眠則更應(yīng)強調(diào)，故賈躍進(jìn)老師常用二陳、四君之類方加減，另輔柴胡、香附、砂仁、枳實、黨參、黃芪、麥芽、萊菔子等加強健脾行氣，合歡皮、酸棗仁、首烏藤、遠(yuǎn)志等加強養(yǎng)心安神，并根據(jù)體質(zhì)偏向補充對應(yīng)補益藥，如是“方對證，藥對癥”，則可“陰平陽秘、精神乃治”。③時令相宜，搭配關(guān)鍵。中醫(yī)講究“人與天地相參”，認(rèn)為環(huán)境、時令、氣候等對人體的生理狀態(tài)是有影響的，人應(yīng)當(dāng)順應(yīng)自然，方能達(dá)到調(diào)治養(yǎng)生的目的。膏方在一年四季均可服用，而賈躍進(jìn)老師則提倡冬季使用。因冬季特點是氣候寒冷，陽氣閉藏，此時人體處于抑制、收縮、降低的生理狀態(tài)，正氣最易不足，寒邪卻盛極，最易生?。患又嗅t(yī)認(rèn)為“冬藏精”，該令進(jìn)補能使人體吸收營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)化的能量，最大限度藏于體內(nèi)；且冬至起九，是一年中陰氣極盛而陽氣始生的轉(zhuǎn)折點，即《易經(jīng)》所言“冬至一陽生”，在此時進(jìn)補有扶正固本、萌育元氣、養(yǎng)精蓄銳之功。對于慢性失眠病人亦是同理，“久病多虛”，冬季服用膏方可最大限度吸收藥物的治療成分，補益其虛損，顧護其脾胃，條暢其氣機，而使“正氣存內(nèi)、邪不可干”。此外，膏方組分為飲片類、細(xì)料類、膠類和糖類等，其中飲片類、細(xì)料類是發(fā)揮扶正補益、祛邪療疾、健脾開胃的主要成分，亦即通過“三辨”而確定的藥物組成；糖類往往是賦形、矯味的作用；而膠類則兼具前兩者的功能。而由于糖類、膠類成分比較固定，因此在數(shù)據(jù)挖掘驗案的過程中只分析飲片及細(xì)料類藥物。

1 資料與方法

1.1 數(shù)據(jù)挖掘分析

1.1.1 數(shù)據(jù)收集 收集2015年11月10日—2020年11月10日賈躍進(jìn)老師在山西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院治未病中心門診診斷為慢性失眠的膏方驗案。

1.1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)《精神障礙診斷與統(tǒng)計手冊》(DSM-5)[10]明確診斷為慢性失眠并單純口服中藥膏方治療的安全、有效驗案(通過癥狀、隨訪、治療前后體檢指標(biāo)和量表分析進(jìn)行判斷)。

1.1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 診斷、效果或安全性不明確以及資料缺失的病案；合并其他影響判斷的軀體及精神病者；干預(yù)方式非單純使用中藥膏方、使用中藥其他劑型或使用膏方方式非口服者。

1.1.3 數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化、錄入與挖掘 通過納入與排除標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選，以雙人雙錄入法錄入古今醫(yī)案云平臺V2.2.3提供的模板中，確保準(zhǔn)確后使用其數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化模塊并結(jié)合2015版《中華人民共和國藥典》[11]與第7版《中藥學(xué)》[12]對中藥進(jìn)行名稱規(guī)范，如：“潞黨參”規(guī)范為“黨參”，“仙靈脾”規(guī)范為“淫羊藿”，“醋香附”規(guī)范為“香附”，“酒萸肉”規(guī)范為“山萸肉”，“懷山藥”規(guī)范為“山藥”等。獲得標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)據(jù)后，使用數(shù)據(jù)挖掘模塊分別對其進(jìn)行藥物頻次、性味歸經(jīng)統(tǒng)計(其主要依據(jù)參考文獻(xiàn)[11-12])以及關(guān)聯(lián)分析、聚類分析和復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)分析，并綜合獲得核心組方。

1.2 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

1.2.1 藥物有效成分及對應(yīng)靶點篩選 利用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺(TCMSP，http：//tcmspw.com/tcmsp.php)分別檢索核心組方中各藥物成分，并限定口服生物利用度(oral bioavailability，OB)≥30%，血腦屏障(blood brain barrier，BBB)≥-0.3，類藥性(drug-likeness，DL)≥0.18，并匹配各成分靶點，對于無靶點記錄的有效成分則利用SwissTargetPrediction平臺(http：//www.swisstargetprediction.ch/)預(yù)測靶點，最終將靶點在UniProt數(shù)據(jù)庫(https：//www.uniprot.org/)中匹配基因名。

1.2.2 疾病靶點獲取 在Gene Expression Omnibus數(shù)據(jù)庫(GEO，https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/)、基因名片數(shù)據(jù)庫(GeneCards，https：//www.genecards.org/)、在線人類孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫(OMIM，https：//omim.org/#)、Therapeutic Target Database(TTD，http：//db.idrblab.net/ttd/)中分別檢索“insomnia”，得出失眠相關(guān)靶點，并將3個數(shù)據(jù)庫所得失眠相關(guān)靶點合并、去重，再利用Uniprot數(shù)據(jù)庫篩選。

1.2.3 藥物-疾病交集靶點獲取 將獲得的有效成分相關(guān)靶點與疾病相關(guān)靶點取交集，獲得核心藥物組合有效成分中直接與疾病相關(guān)的靶點。

1.2.4 疾病-藥物-成分-靶點及蛋白相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 以疾病、核心組方、藥物、有效成分和相關(guān)靶點為節(jié)點，其相互關(guān)系為邊，在CytoscapeV 3.8.0中構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)，并利用插件對藥物-疾病交集靶點進(jìn)行PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建、拓?fù)浞治龊途垲惙治觥?/p>

1.2.5 基因本體(gene ontology，GO)富集分析和京都基因和基因組百科全書(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG)通路富集分析 將所得到的藥物-疾病交集靶點導(dǎo)入Cytoscape的BiNGO、ClueGO插件，分別進(jìn)行GO和KEGG通路富集分析，然后將其可視化。

1.2.6 關(guān)鍵有效成分與關(guān)鍵靶點分子對接分析 選取1.2.4兩個網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點度較大的關(guān)鍵成分及關(guān)鍵靶點分別在Zinc(https：//zinc.docking.org/)、RCSB蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)(PDB)數(shù)據(jù)庫中(http：//www.rcsb.org/)獲取3D結(jié)構(gòu)，并使用Vina分子對接，將其中對接最好的組合使用Pymol可視化。

2 結(jié) 果

2.1 數(shù)據(jù)挖掘結(jié)果

2.1.1 藥物頻次及屬性統(tǒng)計 共收集到病案213例，按納入、排除標(biāo)準(zhǔn)篩選，獲得驗案122例。該122例驗案包含方劑138首，涉及中藥154味，其中藥物應(yīng)用頻率>40%的有18味(見表1)。將154味中藥進(jìn)行性味歸經(jīng)分析，結(jié)果以雷達(dá)圖表示(見圖1)，其中，中藥藥性分布主要為平、溫；藥味主要為甘、辛、苦；藥物的歸經(jīng)主要歸脾、肝、腎、肺經(jīng)。

表1 138首膏方藥物使用頻次頻率(頻率>40%，n=138)

圖1 138首膏方四氣、五味、歸經(jīng)頻次分布雷達(dá)圖

2.1.2 藥物關(guān)聯(lián)分析、聚類分析、復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)分析及核心組方確定 將138首處方利用云平臺數(shù)據(jù)分析，設(shè)置置信度≥0.80，支持度≥0.60，得到19組藥物關(guān)聯(lián)分析結(jié)果(見表2)；將藥物使用頻率>40%的18味中藥進(jìn)行聚類分析，同時設(shè)置距離類型為歐氏距離，聚類方法為最長距離法，將其分為3個聚類處方(見圖2)，C1：黃芪、當(dāng)歸、白芍、合歡皮、遠(yuǎn)志、香附、柴胡；C2：延胡索、懷牛膝；C3：黨參、半夏、莪術(shù)、薏苡仁、麥芽、山藥、陳皮、白術(shù)、茯苓；設(shè)置節(jié)點度≥150，進(jìn)行中藥-中藥復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)分析，得到由白術(shù)、茯苓、陳皮、山藥、麥芽、黃芪、莪術(shù)、香附、黨參9味中藥組成的核心組合(見圖3)。

表2 138首膏方藥物關(guān)聯(lián)分析

圖2 138首膏方藥物聚類分析

圖3 138首膏方核心藥物復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)分析

2.2 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果

2.2.1 有效成分和對應(yīng)靶點 通過檢索TCMSP數(shù)據(jù)庫，結(jié)合SwissTargetPrediction預(yù)測靶點，篩選出核心組方各藥物有效成分及相關(guān)靶點。經(jīng)去重、排除后，共獲得有效成分72種，重復(fù)成分5種，相關(guān)靶點476個。詳見表3。

表3 膏方核心處方部分成分相關(guān)信息

(續(xù)表)

2.2.2 疾病靶點 將GEO數(shù)據(jù)庫得到的數(shù)據(jù)集(編號：GSE122541)中的22個睡眠正常的基因表達(dá)樣本與22個睡眠剝奪的基因表達(dá)樣本用R語言進(jìn)行差異分析，共得到100個差異基因靶點，見圖4。將GeneCards數(shù)據(jù)庫中得到的2 563個失眠相關(guān)基因按照相關(guān)度大于中位數(shù)進(jìn)行篩選，獲得1 074個疾病靶點；此外，OMIM和TTD分別獲得295個、28個靶點。最終，共計獲得失眠靶點1 205個。

圖4 GEO數(shù)據(jù)集失眠障礙差異基因分析結(jié)果

2.2.3 藥物-疾病靶點交集結(jié)果 利用微生信平臺將獲得的藥物靶點與獲得的疾病靶點取交集，共獲得116個藥物與疾病直接相關(guān)的交集靶點。詳見圖5。

圖5 膏方核心處方藥物-疾病交集靶點

2.2.4 疾病-藥物-成分-靶點網(wǎng)絡(luò)和PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建結(jié)果 將數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape軟件，構(gòu)建疾病-核心組方-成分-交集靶點網(wǎng)絡(luò)(見圖6)。從該網(wǎng)絡(luò)篩選出Degree>50的12個關(guān)鍵有效成分。在Bisogenet中導(dǎo)入116個交集靶點構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)，然后通過CytoNCA插件得出PPI核心網(wǎng)絡(luò)(見圖7)，在此基礎(chǔ)上使用MCODE插件對核心網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行聚類，得出10個聚類網(wǎng)絡(luò)，選擇其中每個聚類網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點度較大的10個靶點作為關(guān)鍵靶點(見表4)。

圖6 疾病-核心組方-成分-交集靶點網(wǎng)絡(luò)

圖7 交集靶點蛋白互作(PPI)網(wǎng)絡(luò)篩選圖

表4 關(guān)鍵成分與關(guān)鍵靶點分子對接結(jié)果

2.2.5 GO富集分析和KEGG富集分析結(jié)果 將藥物-疾病的交集靶點導(dǎo)入BiNGO，并設(shè)置信水平為0.01，進(jìn)行GO富集分析(見圖8)，得到GO生物過程主要包括生物調(diào)節(jié)、對刺激的應(yīng)答、細(xì)胞過程、代謝過程、信號過程、節(jié)律過程、免疫系統(tǒng)過程等；GO分子功能包括結(jié)合、分子轉(zhuǎn)導(dǎo)活性、催化活性等；GO細(xì)胞成分以突觸、胞外區(qū)、細(xì)胞器等為主。再將交集靶點導(dǎo)入ClueGO，設(shè)定P≤0.05，最小聚類為4，К-score為0.4進(jìn)行KEGG通路富集分析(見圖9)，得到神經(jīng)活性配體-受體相互作用、血清素能突觸、多巴胺能突觸、雌激素信號通路、cAMP信號通路、TNF信號通路等。

圖8 交集靶點GO富集分析主要結(jié)果關(guān)聯(lián)圖

圖9 交集靶點KEGG關(guān)鍵通路圖

2.2.6 分子對接結(jié)果 關(guān)鍵靶點和關(guān)鍵成分分子對接結(jié)果大多≤-20.9 kJ/mol，提示關(guān)鍵成分與關(guān)鍵靶點多可能形成穩(wěn)定結(jié)構(gòu)(見表4)。其中對接最好的組合為AKT1與BZ1，其主要由疏水口袋與氫鍵結(jié)合(見圖10)。

圖10 AKT1與α-Amyrin分子對接構(gòu)象

3 討 論

從數(shù)據(jù)挖掘結(jié)果可得，調(diào)治慢性失眠的膏方中使用頻率最高的藥物為白術(shù)、茯苓、陳皮、山藥、麥芽、黃芪、莪術(shù)、香附、黨參等?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究認(rèn)為上述藥物具有神經(jīng)保護、鎮(zhèn)靜催眠、抗抑郁、抗焦慮等作用，且大多數(shù)具有保肝及調(diào)理胃腸道的功效[13-23]。根據(jù)藥性、藥味、歸經(jīng)分布規(guī)律分析，賈躍進(jìn)老師所開膏方用藥較平和，結(jié)合頻率來看則可見其用藥略偏溫，因慢性失眠病人多存在肝脾不和的情況，脾土虧虛，賈躍進(jìn)老師善用甘溫，其中甘味藥補益氣血、顧護脾胃、調(diào)和諸藥，而肝郁表現(xiàn)為全身氣機的失常，“氣有余便是火，氣不足便是寒”而寒熱均見，故投以辛、苦味藥，辛開苦降，通利樞機，通腑降氣，則氣機自和；藥物歸經(jīng)則集中在脾、肝、肺、腎、心、胃，因脾升胃降、肝升肺降、水火既濟，皆為全身氣機運轉(zhuǎn)之樞機，尤其是前兩者，更是服用膏方與調(diào)治慢性失眠所共同強調(diào)的臟腑，此處足見賈躍進(jìn)老師以調(diào)氣為先、重視肝脾、整體論治的思路。藥物關(guān)聯(lián)分析中篩選出的19對核心關(guān)聯(lián)組合是：白術(shù)、茯苓、陳皮、山藥、麥芽、黃芪、莪術(shù)、香附、黨參9味藥物的組合，其中香附為“氣中之血藥”，在行氣解郁的同時兼顧血分；莪術(shù)可破血行氣，為化瘀之要藥，有助香附行氣之功；陳皮、茯苓為二陳湯、溫膽湯、保和丸的成分，可健脾行氣、利濕安神；茯苓、白術(shù)是常用治療脾胃氣虛的藥對，四君子湯、逍遙散、參苓白術(shù)散、香砂六君子湯等類方均含此藥對；黨參補益氣血、健脾益肺，賈躍進(jìn)老師常以之代人參，黃芪則可遍補三焦，益衛(wèi)利水，二者可組成歸脾湯、補中益氣湯、十全大補湯等補益劑；山藥可通補脾胃肺腎，是薯蕷丸、六味地黃丸等的重要成分；麥芽則被認(rèn)為是“稟受春生之氣，脾胃藥而善舒肝”，故賈躍進(jìn)老師常佐以顧護脾胃并疏肝氣。綜合來看，賈躍進(jìn)老師膏方調(diào)治慢性失眠，師丹溪越鞠之法，以“健脾疏肝”為主線，兼顧氣、血、痰、郁，意在治病求本。在聚類分析所得的3個聚類處方中，C1主要包括逍遙散、柴胡疏肝散、當(dāng)歸補血湯等方的主要藥物及賈躍進(jìn)老師常用治療失眠藥對合歡皮、遠(yuǎn)志，體現(xiàn)其臨床以疏肝健脾為主旨，調(diào)治久病失眠氣血不足之法；C3方含半夏秫米湯(賈躍進(jìn)老師常法鞠通而易秫米為薏苡仁)、二陳湯、四君子湯、參苓白術(shù)散、理沖湯等方中的主要藥物及賈躍進(jìn)老師常用的疏肝健脾的佐使藥麥芽，反映其臨證循健脾理氣之主線，并治久病失眠而有瘀或及腎之證；C2聚類中的延胡索及懷牛膝是賈躍進(jìn)老師臨床常用佐藥，兩者可增益行氣活血之功，氣血沖和則萬病不生。復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)分析中所獲得的核心組方亦是關(guān)聯(lián)分析中的9味藥物。從數(shù)據(jù)挖掘可得出賈躍進(jìn)老師膏方調(diào)治慢性失眠的核心組方確為白術(shù)、茯苓、陳皮、山藥、麥芽、黃芪、莪術(shù)、香附、黨參9味，此9味涵蓋了賈躍進(jìn)老師膏方調(diào)治慢性失眠的主要方面，即強調(diào)肝脾、兼顧氣血、重在緩補。

根據(jù)藥物網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建，得出核心組方發(fā)揮作用的12個關(guān)鍵有效成分，其中SY1、SY6是兩種木脂素類成分，HQ8、HQ9皆為異黃酮類成分，橫斷面研究顯示，此兩類成分的攝入量與睡眠質(zhì)量之間存在顯著的正相關(guān)[24-25]；FL4、FL5為茯苓中的三萜類化合物，研究顯示茯苓中的此類物質(zhì)可發(fā)揮鎮(zhèn)靜作用[26]；D和E是存在于多種中藥材中的植物甾醇，前者在動物實驗中被驗證可上調(diào)谷胱甘肽、γ-氨基丁酸(GABA)水平，下調(diào)多巴胺(DA)、丙二醛、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、乙酰膽堿酯酶(AChE)水平從而調(diào)節(jié)精神癥狀、改善腦功能[27]，后者則可通過抑制TNF-α的炎癥反應(yīng)來發(fā)揮神經(jīng)保護作用[28]，實驗亦證實其可增加小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中的去甲腎上腺素(NE)、5-羥色胺(5-HT)等神經(jīng)遞質(zhì)從而表現(xiàn)抗抑郁活性[29]；EZ2是一種姜黃素衍生物，研究認(rèn)為其可通過降低氧化應(yīng)激而表現(xiàn)腦保護作用[30]；DS8被認(rèn)為存在AChE抑制作用[31]，而AChE抑制劑可改善睡眠狀況[32]；XF1屬香附中的揮發(fā)油類，動物實驗得出該類物質(zhì)可能通過調(diào)節(jié)膽堿能系統(tǒng)及5-HT水平而表現(xiàn)抗焦慮的作用[21]；BZ1為主要成分的混合物被研究證實具有治療抑郁的潛力[33]；B成分為主要活性成分的提取物則被實驗證實可通過抑制細(xì)胞外單胺(包括5-HT、NE和DA)的再攝取來增強中央單胺的信號傳導(dǎo)，從而表現(xiàn)抗抑郁作用[34]。

PPI網(wǎng)絡(luò)所得的核心靶點中，ESR1、AR分別編碼雌激素、雄激素受體，而性激素可對睡眠過程產(chǎn)生重要影響，雌激素和孕酮調(diào)控女性一生荷爾蒙周期相關(guān)的睡眠方式變化，雄激素則可影響晝夜節(jié)律的時相[35-36]；CREB1編碼磷酸化依賴性轉(zhuǎn)錄因子，可參與包括晝夜節(jié)律同步等多種細(xì)胞過程，并且與快速眼動(REM)睡眠在抑郁癥中的作用有關(guān)[37]；ADRB2編碼β腎上腺素能受體，該基因在清醒及睡眠剝奪時表達(dá)上調(diào)，其受體阻滯劑常會產(chǎn)生嗜睡等副作用[38-39]；AKT1編碼的AKT1激酶在神經(jīng)元細(xì)胞間通訊、神經(jīng)元存活和記憶形成中發(fā)揮作用[40]；MTNR1A編碼一種高親和力的褪黑激素(MT)受體，而MT是一種具有抗氧化、晝夜節(jié)律維持、睡眠調(diào)節(jié)和神經(jīng)元存活等作用的激素，其外源性補充劑則被證明可用作失眠的替代治療[41]；NR3C1編碼糖皮質(zhì)激素受體，相關(guān)報道根據(jù)觀察到的服用地塞米松病人存在睡眠障礙的副作用而認(rèn)為糖皮質(zhì)激素有促進(jìn)清醒的作用[42]；GSK3B編碼一種糖原合酶激酶，其可作為葡萄糖穩(wěn)態(tài)的負(fù)調(diào)節(jié)劑，參與能量代謝、炎癥等生理活動，而目前認(rèn)為睡眠障礙與這些生理活動都有關(guān)[43-44]；此外，炎性因子TNF被動物實驗證明其增強或抑制分別促進(jìn)和抑制睡眠，且在一些人類研究中亦有相同結(jié)論[45]；NTRK1編碼神經(jīng)營養(yǎng)性酪氨酸激酶受體，可與神經(jīng)營養(yǎng)因子結(jié)合，相關(guān)性研究表明其與抑郁、焦慮、睡眠障礙等癥狀存在相關(guān)性[46]。

目前，失眠的病理機制并不明確，但較公認(rèn)的為：神經(jīng)遞質(zhì)調(diào)節(jié)障礙(GABA、5-HT、DA、NE等)、信號傳導(dǎo)障礙(下丘腦-垂體-腎上腺軸，HPA軸)、代謝障礙(能量、脂質(zhì)、氨基酸及腸道微環(huán)境等)、內(nèi)分泌失調(diào)(生長激素、食欲素、性激素等)、免疫功能異常(炎癥)、遺傳(基因)及心理因素刺激等引起睡眠-喚醒節(jié)律紊亂[47-49]，由GO富集分析得到的主要生物過程對上述機制幾乎均有涉及，可見膏方核心組方參與多種機制、從多個途徑對慢性失眠進(jìn)行調(diào)治。KEGG通路分析主要結(jié)果中：神經(jīng)活性配體-受體相互作用、血清素能突觸、多巴胺能突觸、雌激素信號通路、TNF信號通路已在病理機制中概括；除此之外，cAMP的代謝產(chǎn)物腺苷通常被認(rèn)為是睡眠的平衡調(diào)節(jié)劑[50]。分子對接結(jié)果顯示，關(guān)鍵有效成分和關(guān)鍵靶點大多可結(jié)合成穩(wěn)定結(jié)構(gòu)，其中與各關(guān)鍵成分對接較好的靶點為AKT1、GSK3B和NTRK1，而BZ1(α-香樹素)、DS8(蒲公英賽醇)和D(豆甾醇)則是與關(guān)鍵靶點對接較好的成分，提示核心組方中的這些成分及靶點相對更可能是賈躍進(jìn)老師膏方調(diào)治慢性失眠的物質(zhì)基礎(chǔ)，即通過AKT1激酶、神經(jīng)營養(yǎng)因子、糖代謝調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮作用。

綜上所述，通過對賈躍進(jìn)老師膏方調(diào)治慢性失眠經(jīng)驗的總結(jié)以及結(jié)合數(shù)據(jù)挖掘方法分析賈躍進(jìn)老師的膏方驗案，可以得出其結(jié)合膏方特點從“肝脾”論治慢性失眠的調(diào)治思路以及包括白術(shù)、茯苓、陳皮、山藥、麥芽、黃芪、莪術(shù)、香附、黨參9味藥物在內(nèi)的核心組方；進(jìn)一步利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法初步預(yù)測其多成分、多靶點、多通路作用機制，得出所涉及的關(guān)鍵成分為α-香樹素、豆甾醇和蒲公英賽醇，關(guān)鍵靶點為AKT1、GSK3B和NTRK1，關(guān)鍵通路為神經(jīng)活性配體-受體相互作用、血清素能突觸、多巴胺能突觸等，該結(jié)論可為臨床應(yīng)用和進(jìn)一步研究提供參考。