茶多酚和鈣離子添加對(duì)茶樹(shù)葉片鉛吸收和亞細(xì)胞分布的影響

葛高飛，沈旭松，陳諾，王琴，許陽(yáng)

（1.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)生物技術(shù)中心，合肥 230036；2.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院，合肥 230036）

我國(guó)的茶葉生產(chǎn)歷史悠久，消費(fèi)者眾多，茶產(chǎn)業(yè)為我國(guó)創(chuàng)造了巨大的經(jīng)濟(jì)效益，在國(guó)民經(jīng)濟(jì)和國(guó)際貿(mào)易中一直占有重要地位。土壤是茶樹(shù)生長(zhǎng)的基礎(chǔ)，顯著影響茶葉的產(chǎn)量和品質(zhì)，優(yōu)質(zhì)安全的茶葉離不開(kāi)健康的土壤環(huán)境和合理的人為管理。近幾年，我國(guó)茶產(chǎn)業(yè)的發(fā)展迅速且平穩(wěn)，但茶葉的安全質(zhì)量問(wèn)題仍是制約其發(fā)展的瓶頸之一，其中茶葉和茶園土壤的重金屬污染現(xiàn)象一直存在且廣受關(guān)注。茶葉是我國(guó)的大宗農(nóng)產(chǎn)品之一，由于工業(yè)廢棄物排放及化肥農(nóng)藥使用的不當(dāng)，茶葉中的重金屬污染日趨加重，嚴(yán)重影響了茶樹(shù)生長(zhǎng)及茶葉品質(zhì)。目前我國(guó)尚未對(duì)茶園土壤中重金屬的種類和含量做過(guò)系統(tǒng)調(diào)查，但區(qū)域性的調(diào)查研究結(jié)果表明，重金屬鉛在茶葉中的超標(biāo)率較為普遍，目前茶葉中鉛的限量標(biāo)準(zhǔn)為5 mg·kg（GB 2762—2017）。

茶多酚在茶葉中的含量很高（18%～36%），且大部分溶于水，是茶園土壤多酚的主要來(lái)源。茶多酚可通過(guò)絡(luò)合作用與無(wú)機(jī)鹽類物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，降低無(wú)機(jī)元素的生物有效性。大量研究表明，茶多酚對(duì)生物的重金屬脅迫效應(yīng)具有緩解作用。有研究發(fā)現(xiàn)，在酸性條件下，Pb可以與茶多酚產(chǎn)生大量絡(luò)合物，從而降低鉛的生物有效性，緩解茶樹(shù)植株的鉛毒害癥狀。也有研究發(fā)現(xiàn)，添加外源鈣對(duì)處于逆境脅迫下的植物有重要緩解作用，通過(guò)鈣信使系統(tǒng)可提高植物對(duì)重金屬、干旱、高溫、低溫、鹽脅迫等逆境的抵抗能力。鈣離子可以增加細(xì)胞壁的穩(wěn)定性，降低細(xì)胞膜透性，從而降低重金屬對(duì)植物的毒害作用。雖然茶多酚與多數(shù)金屬離子均可產(chǎn)生沉淀狀態(tài)的絡(luò)合物，但其與Ca只有在pH 8.5 以上時(shí)才會(huì)產(chǎn)生大量絡(luò)合物。因此，茶園土壤中的鈣不會(huì)與茶多酚形成絡(luò)合物而降低其生物有效性。

為比較添加茶多酚與鈣對(duì)茶樹(shù)葉片鉛毒害的緩解效果，本研究通過(guò)水培試驗(yàn)，以舒茶早茶苗為材料，研究鉛脅迫下添加茶多酚和鈣對(duì)茶樹(shù)葉片鉛吸收和亞細(xì)胞分布的影響，研究結(jié)果可為茶多酚功能的合理利用提供理論基礎(chǔ)，同時(shí)也為茶樹(shù)鉛污染的診斷與防治提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

供試茶樹(shù)品種為舒茶早，采自安徽省黃山市苗木基地，為兩年生扦插苗。先將茶樹(shù)苗根系上的土壤用自來(lái)水沖洗干凈，再用超純水清洗3 次。將茶樹(shù)苗栽植于塑料盆缽（高30 cm、內(nèi)徑25 cm）中，用1/2 霍格蘭營(yíng)養(yǎng)液預(yù)培養(yǎng)1 周，再轉(zhuǎn)移至完全營(yíng)養(yǎng)液中，培養(yǎng)期間通氧泵連續(xù)通氣，每5 d 更換一次營(yíng)養(yǎng)液，調(diào)節(jié)pH 值至6.0，培養(yǎng)約兩個(gè)月，茶樹(shù)苗根部長(zhǎng)出部分白色吸收根后進(jìn)行試驗(yàn)處理。

選擇長(zhǎng)勢(shì)良好且生長(zhǎng)一致的茶樹(shù)植株，設(shè)置4 個(gè)處理，即對(duì)照（CK）、鉛處理（Pb，0.5 mmol·L鉛）、鉛+茶多酚處理（Pb+TP，0.5 mmol·L鉛+0.5 mmol·L茶多酚）和 鉛+鈣離子處理（Pb+Ca，0.5 mmol·L鉛+0.5 mmol·L鈣離子），鉛以硝酸鉛的形式加入，鈣源為分析純氯化鈣，每個(gè)試驗(yàn)處理3個(gè)盆缽，每個(gè)盆缽定植4株茶樹(shù)苗。培養(yǎng)處理30 d，期間用通氣泵連續(xù)通氣，每5 d更換一次營(yíng)養(yǎng)液，用0.1 mol·LHCl或NaOH 調(diào)節(jié)pH 值至6.0。茶樹(shù)苗收獲后，先用自來(lái)水沖洗整株茶苗，然后用超純水清洗干凈，吸水紙吸干表面水分，分別稱取質(zhì)量。取成熟葉（第4片真葉）鮮葉用于掃描和透射電鏡觀察，剩余成熟葉（第4～6片真葉）于-20 ℃下保存用于元素含量及亞細(xì)胞分布分析。

1.2 測(cè)定方法

1.2.1 茶樹(shù)葉片鉛和鈣含量的測(cè)定

稱取0.200 0 g 茶樹(shù)成熟葉片烘干樣，用HNO-HClO（4∶1）消解，先在90 ℃左右預(yù)煮1 h，然后在160 ℃下消煮至澄清，180 ℃趕酸至盡干（呈濕潤(rùn)狀態(tài)，無(wú)明顯液體殘留），用1%的稀HNO定容至25 mL容量瓶，溶液搖勻后過(guò)0.22 μm 的水系濾膜后待測(cè)。鉛和鈣的含量利用電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀（Thermo iCAP7400 DUO）測(cè)定，再計(jì)算得到茶樹(shù)葉片中鉛和鈣的含量。

1.2.2 茶樹(shù)葉片亞細(xì)胞組分分離及鉛的測(cè)定

茶樹(shù)葉片亞細(xì)胞各組分分離采用差速離心法。準(zhǔn)確稱取成熟葉鮮樣0.500 0 g，加入20 mL細(xì)胞組分提取液[0.25 mol·L蔗糖+50 mmol·LTris-HCl緩沖液（pH 7.5）+1 mmol·L二硫赤蘚糖醇]，研磨茶樹(shù)葉片并勻漿，冷凍離心機(jī)600 r·min下運(yùn)行5 min，沉淀為茶樹(shù)葉片細(xì)胞壁組分（F1）；上清液于2 000 r·min下運(yùn)行15 min，沉淀為茶樹(shù)葉片的細(xì)胞核和葉綠體組分（F2）；上清液于10 000 r·min下運(yùn)行20 min，沉淀為茶樹(shù)葉片線粒體組分（F3）；剩余上清液為茶樹(shù)葉片的細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和液泡等可溶性組分（F4）。勻漿和提取操作在冰盒內(nèi)進(jìn)行。茶葉葉片樣品及其各亞細(xì)胞組分采用HNO-HClO混合消化，鉛含量直接用電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（Thermo X SERIES 2）測(cè)定。

1.2.3 掃描電鏡分析

取鉛脅迫30 d 的茶樹(shù)苗，用自來(lái)水和超純水將茶樹(shù)植株沖洗干凈，切取完整的成熟葉片（第4 片真葉）中部（避開(kāi)葉脈）4 mm×4 mm，用磷酸緩沖液（0.1 mol·L）清洗干凈后，快速置于盛有5%戊二醛固定液的離心管中固定12 h，并用真空泵抽氣使茶樹(shù)葉片下沉到離心管底部（以保證葉片組織完全沒(méi)入戊二醛固定液中），期間加入1%的NaS溶液，使茶樹(shù)葉片組織中的鉛元素凝結(jié)。用磷酸緩沖液沖洗3 次，再分別使用50%、70%、80%、90%、95%和100%的酒精溶液逐級(jí)脫水，每次15 min。再經(jīng)100%丙酮置換2 次，每次15 min。二氧化碳臨界點(diǎn)干燥后鍍金，用Hitachi S4800型掃描電鏡在1.0 kV的加速電壓下觀察、拍照。

1.2.4 透射電鏡分析

取清洗干凈的茶樹(shù)苗，切取完整的成熟葉片（第4 片真葉）中部（避開(kāi)葉脈）2～3 cm，快速將茶樹(shù)葉片組織投入5%的戊二醛固定液（0.1 mol·L的磷酸緩沖溶液配制，pH 6.8）中，在4 ℃黑暗條件下固定18 h。固定后的葉片在0.1 mol·L磷酸緩沖溶液（pH 6.8）中清洗3 次，每次15 min。轉(zhuǎn)移茶樹(shù)葉片組織至1%的鋨酸（0.1 mol·L磷酸緩沖溶液配制，pH 6.8）中1.5 h，分別使用30%、50%、70%、80%、90%和95%的酒精溶液逐級(jí)脫水，每次15 min，再用100%的酒精脫水2次，每次10 min。經(jīng)100%的丙酮置換2 次，每次15 min。丙酮與包埋劑1∶1 比例滲透處理1 h，1∶3 比例滲透處理3 h，純包埋劑過(guò)夜，然后純包埋劑制作膠囊。膠囊置于70 ℃烘箱處理24 h，然后用超薄切片機(jī)切片（厚度100 nm），分別用醋酸雙氧鈾染色20 min、檸檬酸鉛染色15 min。茶樹(shù)葉片組織結(jié)構(gòu)的改變及鉛的分布特征觀察采用透射電鏡（Hitachi HT7700），在80 kV的加速電壓條件下完成。

1.3 數(shù)據(jù)處理

數(shù)值均為3 次重復(fù)的平均值，使用Excel 2017 制圖。應(yīng)用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析（Oneway ANOVA），采用LSD 法進(jìn)行多重比較，＜0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 添加劑對(duì)茶樹(shù)葉片鉛和鈣吸收的影響

如圖1 所示，鉛脅迫顯著增加了茶樹(shù)葉片對(duì)鉛元素的吸收。茶多酚添加后，茶樹(shù)葉片對(duì)鉛的吸收量顯著降低，Pb+TP 處理的鉛含量降為Pb處理的69.11%；添加鈣離子后，茶樹(shù)葉片對(duì)鉛的吸收無(wú)顯著變化。Pb處理顯著降低了茶樹(shù)葉片對(duì)鈣元素的吸收（圖2），與CK 相比，鈣含量降低了27.97%；添加茶多酚后茶樹(shù)葉片鈣含量較Pb 處理增加了11.10%，但仍顯著低于CK；鉛脅迫下加入鈣離子，顯著增加了茶樹(shù)葉片對(duì)鈣元素的吸收，Pb+Ca處理的鈣含量是Pb處理的1.35倍，鈣含量增加了34.57%；Pb+Ca處理與CK處理的茶樹(shù)葉片鈣含量無(wú)顯著差異。

圖1 不同處理的茶樹(shù)葉片鉛含量Figure 1 Lead content of different treatments in tea leaves

圖2 不同處理的茶樹(shù)葉片鈣含量Figure 2 Calcium content of different treatments in tea leaves

2.2 添加劑對(duì)茶樹(shù)葉片細(xì)胞形態(tài)的影響

利用掃描電鏡觀察茶樹(shù)葉片表面形態(tài)，結(jié)果如圖3 所示。與CK 相比，Pb 處理?xiàng)l件下的茶樹(shù)葉片表面和氣孔周邊有較多褶皺。Pb+TP 處理的葉片表面褶皺較Pb 處理少，氣孔周邊的褶皺較淺。Pb+Ca 處理的葉片表面光滑，氣孔周邊褶皺較淺，與CK處理的葉片表面形態(tài)較為相似。

圖3 茶樹(shù)葉片的掃描電鏡圖（×300倍）Figure 3 Scanning electron microscopy（SEM）of tea leaves（×300 times）

利用透射電鏡觀察茶樹(shù)葉片內(nèi)部細(xì)胞形態(tài)，具體如圖4 和圖5。CK 處理的茶樹(shù)葉片細(xì)胞內(nèi)部形態(tài)健康正常；Pb 處理的茶樹(shù)葉片細(xì)胞的液泡內(nèi)存在較多黑色物質(zhì)沉積，細(xì)胞器較小，部分細(xì)胞器消失；Pb+TP 處理的茶樹(shù)葉片細(xì)胞液泡內(nèi)也有物質(zhì)沉積，且細(xì)胞器呈萎縮狀態(tài)，但程度輕于Pb 處理；Pb+Ca 處理的茶樹(shù)葉片細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞器無(wú)明顯萎縮現(xiàn)象，液泡內(nèi)有少量的黑色物質(zhì)沉積，細(xì)胞壁較其他3 個(gè)處理更厚，細(xì)胞壁和細(xì)胞器邊緣有少量黑色物質(zhì)沉積，細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核顏色較深，細(xì)胞內(nèi)部整體形態(tài)與CK 處理較為相似。Pb 和Pb+TP 處理的細(xì)胞，因液泡內(nèi)黑色物質(zhì)沉積顯著，細(xì)胞器、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞壁的顏色相對(duì)較淺，觀察不到明顯的黑色物質(zhì)沉積。

圖4 茶樹(shù)葉片的單細(xì)胞透射電鏡圖（×1 000倍）Figure 4 Transmission electron microscope（TEM）of single cell in tea leaves（×1 000 times）

圖5 茶樹(shù)葉片的多細(xì)胞透射電鏡圖（×500倍）Figure 5 Transmission electron microscope（TEM）of multiple cells in tea leaves（×500 times）

2.3 添加劑對(duì)茶樹(shù)葉片亞細(xì)胞組分中鉛分布的影響

圖6 和圖7 是鉛在茶樹(shù)葉片亞細(xì)胞中的分布情況，從圖中可以看出，鉛在茶樹(shù)葉片亞細(xì)胞的分布情況與透射電鏡觀察的黑色物質(zhì)沉積規(guī)律一致，因此透射電鏡觀察到的黑色物質(zhì)即為鉛在茶樹(shù)葉片細(xì)胞內(nèi)的沉積。Pb 處理的鉛元素在茶樹(shù)葉片細(xì)胞壁中含量最高，其次是在細(xì)胞質(zhì)和液泡內(nèi)的可溶性部分中，細(xì)胞器中含量相對(duì)較低；F1 和F4 組分占總量的72.98%。添加茶多酚后，鉛元素在茶樹(shù)葉片細(xì)胞壁中的含量升高，但與Pb處理相比差異不顯著，鉛元素在細(xì)胞器中的含量顯著減少，在細(xì)胞質(zhì)和液泡中的可溶性鉛含量也顯著減少；F1 和F4 組分占總量的78.90%。鉛脅迫下添加鈣離子，鉛元素在茶樹(shù)葉片細(xì)胞壁中的含量顯著高于Pb 和Pb+TP 處理；鉛元素在線粒體中的含量有所增加，顯著高于Pb+TP 處理，與Pb 處理差異不顯著；鉛元素在細(xì)胞質(zhì)和液泡中的含量顯著低于Pb處理，但顯著高于Pb+TP處理；F1和F4組分占總量的74.43%。

圖6 不同處理的茶樹(shù)葉片鉛亞細(xì)胞分布Figure 6 The subcellular distribution of lead in tea leaves under lead stress

圖7 茶樹(shù)葉片鉛的亞細(xì)胞分布Figure 7 The subcellular distribution of lead in tea leaves

3 討論

鉛脅迫下，茶樹(shù)葉片對(duì)鉛的吸收顯著增加，對(duì)鈣的吸收顯著降低，說(shuō)明鉛脅迫對(duì)茶樹(shù)葉片吸收鈣具有一定的抑制作用，這與陳國(guó)梁等的研究結(jié)果一致。茶多酚加入后，茶樹(shù)葉片對(duì)鉛的吸收顯著降低，對(duì)鈣的吸收顯著增加。DUAN 等研究發(fā)現(xiàn)，土壤中添加茶多酚后，其與土壤中的鉛離子結(jié)合，使生物有效鉛轉(zhuǎn)化為有機(jī)鉛。周琪等的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，茶多酚可通過(guò)絡(luò)合作用來(lái)降低重金屬離子的生物毒性，提高細(xì)胞的生存率。茶多酚的加入使一部分鉛被絡(luò)合而鈍化，茶樹(shù)葉片吸收的鉛量顯著降低（圖1），鉛脅迫對(duì)鈣吸收的抑制作用減小，因此茶樹(shù)葉片吸收的鈣量相對(duì)增加。氯化鈣加入后，茶樹(shù)對(duì)鉛的吸收無(wú)顯著變化，但顯著增加了鈣的吸收。說(shuō)明鈣離子的加入并不能抑制茶樹(shù)對(duì)鉛的吸收，只是增加了茶樹(shù)葉片對(duì)鈣離子的吸收利用。這可能是因?yàn)閯傞_(kāi)始進(jìn)行Pb+Ca 處理時(shí)茶樹(shù)葉片對(duì)鉛和鈣元素的吸收存在競(jìng)爭(zhēng)機(jī)制，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，植物細(xì)胞中鈣含量增加，植物細(xì)胞對(duì)鉛的抗性增加，細(xì)胞壁對(duì)鉛的容納能力增加，因此鉛的吸收總量會(huì)緩慢增加，最終Pb+Ca處理的茶樹(shù)葉片鉛含量與Pb 處理差異不顯著。薛艷等的研究發(fā)現(xiàn)鈣離子通道抑制劑顯著抑制了蘆蒿根部對(duì)鎘的吸收，但對(duì)鉛的吸收無(wú)顯著的抑制作用，可能是因?yàn)樘J蒿對(duì)鎘的吸收通過(guò)鈣離子通道進(jìn)行，對(duì)鉛的吸收則不通過(guò)鈣離子通道進(jìn)行。這與本研究的結(jié)果一致，說(shuō)明茶樹(shù)葉片對(duì)鉛的吸收可能不是通過(guò)鈣離子通道進(jìn)行。

鉛在茶樹(shù)葉片中的亞細(xì)胞分布情況與透射電鏡觀察的茶樹(shù)葉片細(xì)胞內(nèi)黑色沉積的部位較為一致，表明鉛脅迫下鉛元素主要分布在細(xì)胞壁和以液泡為主的細(xì)胞液中，這一結(jié)果與已有報(bào)道一致。細(xì)胞壁是外界物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的初始屏障，細(xì)胞壁中的負(fù)電荷基團(tuán)與帶正電荷的重金屬離子絡(luò)合形成沉淀，減少了重金屬的運(yùn)移。此外，細(xì)胞壁中的大分子物質(zhì)（果膠、纖維素和木質(zhì)素等）也對(duì)重金屬離子具有較強(qiáng)的絡(luò)合作用，可減少重金屬離子的跨膜運(yùn)輸，降低細(xì)胞內(nèi)部重金屬離子的含量和濃度，保證了植物細(xì)胞能夠進(jìn)行正常的生理代謝。鉛離子的半徑較大，配位能力較弱，不易透過(guò)細(xì)胞壁和質(zhì)膜進(jìn)入細(xì)胞液，茶樹(shù)葉片細(xì)胞對(duì)鉛的吸收主要是通過(guò)細(xì)胞壁吸附和非共質(zhì)體沉積等方式，當(dāng)細(xì)胞壁的結(jié)合量達(dá)到飽和后鉛元素才開(kāi)始透過(guò)細(xì)胞壁和質(zhì)膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，并與細(xì)胞液中的有機(jī)酸絡(luò)合，以減輕重金屬鉛對(duì)植物葉片細(xì)胞的毒害，因此鉛脅迫下液泡內(nèi)有大量鉛沉積。趙騰飛等研究發(fā)現(xiàn)鉛脅迫使小麥幼苗細(xì)胞的膜透性顯著增加，外源鈣使細(xì)胞的膜透性相對(duì)降低，使鉛對(duì)小麥幼苗細(xì)胞的毒害作用有所緩解。肖細(xì)元等通過(guò)研究砷脅迫下蜈蚣草對(duì)鈣的吸收指出，鈣在細(xì)胞中的含量增多并主要分布在細(xì)胞壁中，其增加了細(xì)胞壁的穩(wěn)定性，維持了細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)和功能，提高了蜈蚣草對(duì)砷脅迫的耐受力。茶樹(shù)葉片細(xì)胞壁中鉛的含量表現(xiàn)為Pb+Ca處理＞Pb+TP處理＞Pb處理，而鉛在細(xì)胞質(zhì)和液泡中的含量表現(xiàn)為Pb 處理＞Pb+Ca 處理＞Pb+TP 處理。在鉛脅迫下，茶樹(shù)葉片細(xì)胞壁對(duì)鉛的吸納值飽和后，因膜透性增加，鉛進(jìn)入液泡中與有機(jī)酸絡(luò)合，以減輕鉛對(duì)細(xì)胞的毒害作用。茶多酚加入后，葉片中鈣含量顯著增加，細(xì)胞壁可以吸納較多的鉛元素，細(xì)胞膜透性相對(duì)降低，因而茶樹(shù)葉片細(xì)胞的液泡中鉛沉積減少。周琪等的研究也表明，抗氧化劑EGCG（茶多酚的主要成分）可以明顯緩解8種重金屬混合污染物對(duì)水生生物細(xì)胞的毒害作用。王萌等的研究表明，鈣肥能顯著提高毛桃果實(shí)內(nèi)的鈣含量，并增加果實(shí)細(xì)胞壁的強(qiáng)度。鉛脅迫下加入鈣離子，茶樹(shù)葉片鈣含量顯著高于Pb 和Pb+TP 處理，因?yàn)殁}離子使細(xì)胞壁強(qiáng)度增加，更多的鉛元素被固定在細(xì)胞壁中，細(xì)胞膜透性更低，鉛進(jìn)入細(xì)胞液的量減少，液泡內(nèi)的鉛沉積顯著減少。蔣藝等研究發(fā)現(xiàn)，添加外源鈣后，旱柳根和葉各亞細(xì)胞組分中的鎘含量均顯著降低，且細(xì)胞液中鎘的比例有所增加，而細(xì)胞壁和細(xì)胞器組分中鎘的比例有所下降。這與本研究的結(jié)果不一致，可能是因?yàn)橹仓陮?duì)鎘的吸收通過(guò)鈣離子通道進(jìn)行，對(duì)鉛的吸收則不通過(guò)鈣離子通道進(jìn)行，也可能歸因于植物品種、栽培環(huán)境及鈣水平的差異。

4 結(jié)論

（1）鉛脅迫顯著增加了茶樹(shù)葉片中鉛元素的含量，顯著降低了鈣元素的含量。鉛與茶多酚處理的茶樹(shù)葉片鉛元素含量顯著降低，鈣元素含量顯著增加；鉛與鈣離子處理對(duì)茶樹(shù)葉片鉛元素含量無(wú)顯著影響，但顯著增加了鈣元素的含量。

（2）鉛脅迫下，茶樹(shù)葉片表面和氣孔周圍褶皺增加，細(xì)胞內(nèi)部（主要在液泡中）鉛沉積顯著；茶多酚和鈣離子添加后茶樹(shù)葉片表面和氣孔周圍的褶皺程度減輕，鉛在細(xì)胞壁中的累積增加，在細(xì)胞質(zhì)和液泡內(nèi)的沉積減少。

（3）茶多酚主要通過(guò)鈍化鉛離子來(lái)減少鉛的吸收，降低鉛對(duì)茶樹(shù)葉片的毒害作用；鈣離子通過(guò)增加葉片對(duì)鈣的吸收，增強(qiáng)葉片細(xì)胞的強(qiáng)度和抗性，增加細(xì)胞壁對(duì)鉛的截留，減少鉛進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，降低鉛對(duì)茶樹(shù)葉片細(xì)胞的毒害作用。