獼猴桃組織培養(yǎng)繁殖苗木

劉永利

（朝陽縣臺(tái)子鎮(zhèn)林業(yè)站，遼寧 朝陽 122625）

獼猴桃的繁殖方式多種多樣，有實(shí)生繁殖、嫁接繁殖、扦插繁殖等。這3種方式比較常見且容易操作，需要的硬件條件也不高。組織培養(yǎng)雖然相對(duì)要復(fù)雜一些，上手難度較大，但是如果遇到不能量產(chǎn)的稀有品種，采用此種方法卻能夠取得巨大的效果，所以了解其過程以及繁殖方法十分必要。

表1 常用消毒滅菌劑及效果比較

從理論上講，植物的每一個(gè)細(xì)胞都具有成長(zhǎng)為一個(gè)完整植株的功能。因此，植物組織培養(yǎng)是一種十分重要的繁殖技術(shù)。

獼猴桃組織也同其他植物組織一樣，具有無限增殖和產(chǎn)生不定芽及不定根的能力，在適宜的培養(yǎng)條件下，用一部分組織可以培養(yǎng)出許多植株，并能保持原有植物的種性，特別是對(duì)于數(shù)量稀少的優(yōu)良品種和砧木，采用組織培養(yǎng)來進(jìn)行工廠化育苗具有重要意義。

1 材料及材料消毒

1.1 材料

組織培養(yǎng)的材料可以選用獼猴桃的莖段、莖尖、腋芽、葉片、葉梗、下胚軸、胚乳、幼胚、原生質(zhì)體等。在國(guó)外也有用根、果實(shí)組織（幼果果皮附近的組織）作接種材料的。常用的組織培養(yǎng)材料為獼猴桃莖段、莖尖和腋芽。

1.2 滅菌消毒

因各個(gè)器官組織的特性不同，需要無菌操作所用消毒藥品、濃度，具體操作方法、處理時(shí)間等也有所差異。常用消毒滅菌劑有多種，效果不盡相同，在實(shí)踐中應(yīng)根據(jù)材料摸索試驗(yàn)，采用既能達(dá)到消毒滅菌目的，又不損傷材料的藥劑。

2 基本培養(yǎng)基

基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，但培養(yǎng)材料不同，其組分也有所變化。蔗糖和瓊脂的用量可根據(jù)不同需要進(jìn)行調(diào)整，培養(yǎng)基的酸堿度調(diào)至pH5.8。配好培養(yǎng)基，分裝于玻璃容器內(nèi)，在120℃高壓蒸氣下滅菌30分鐘后備用。

圖1 繼代培養(yǎng)切莖

3 外植體接種與培養(yǎng)

外植體選取健壯的當(dāng)年生嫩枝上的莖段、莖尖或腋芽。將外植體用自來水沖洗2小時(shí)，用75%乙醇漂30秒鐘，用0.1%氯化汞溶液滅菌5～8分鐘，倒凈滅菌液，用無菌水沖洗3～4次。如果是莖段接種，則用消毒解剖刀刮去表皮，露出綠色皮層，再縱劈成2～4片，并剪成0.5～1.0厘米長(zhǎng)的小段，小段不能帶有節(jié)部，接種在試管中的培養(yǎng)基上，每管2～4小段（試管為30毫米×160毫米）。

表2 MS培養(yǎng)基的基本組分 毫克/升

如果是莖尖或腋芽培養(yǎng)，每個(gè)試管的培養(yǎng)基上接種一個(gè)芽。莖尖應(yīng)剝?nèi)ッ患叭~片，留下黃綠色帶有1～2個(gè)葉原基的小葉片作培養(yǎng)材料。

上述外植體接種的基本培養(yǎng)基為MS，蔗糖濃度2%，pH5.8，添加玉米素0.1～30毫克/升、6-BA（6-芐基腺嘌呤）0.1～5毫克/升、IBA（吲哚丁酸）0.1～5毫克/升和NAA（萘乙酸）0.1～5毫克/升。接種后將試管放在培養(yǎng)室的培養(yǎng)架上，培養(yǎng)溫度25±1℃，光強(qiáng)度1000勒克斯，每日照光12小時(shí)。

4 繼代培養(yǎng)

外植體培養(yǎng)一周后會(huì)產(chǎn)生愈傷組織，一個(gè)月可見到分化出來的小植株。待莖長(zhǎng)到1～3厘米，即可進(jìn)行繼代培養(yǎng)。采用切斷法，將其剪成約1厘米長(zhǎng)莖段，接種到新的培養(yǎng)基中。以后每隔約30天進(jìn)行一次繼代培養(yǎng)，每次的莖段增殖量為3～4倍。反復(fù)進(jìn)行，直到所需繁殖數(shù)量。根據(jù)成都生物所的試驗(yàn)，待試管苗伸長(zhǎng)到4～5厘米時(shí)進(jìn)行剪切，每次切成4段，每隔60天切一次，一年可切6次，即1個(gè)芽的繁殖系數(shù)為4的6次方，即4096株。

5 誘導(dǎo)生根

試管內(nèi)繼代培養(yǎng)的小植株長(zhǎng)到2厘米左右時(shí)，從基部切下，用吲哚丁酸（IBA）20～30毫克/升液浸泡2小時(shí)，再轉(zhuǎn)接在生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根。生根培養(yǎng)基的成分為MS培養(yǎng)基的大量元素減半，包括激素和蔗糖也要減半，其他成分不變。轉(zhuǎn)接生根培養(yǎng)時(shí)，要防止葉片接觸培養(yǎng)基，以利生根。經(jīng)培養(yǎng)10天左右，在基部切口即可產(chǎn)生不定根，20天左右成為真根，變成完整幼苗。待植株長(zhǎng)到3～5厘米，則可進(jìn)行鍛煉、移栽。

6 鍛煉與移栽

組培苗是在嚴(yán)格的人工操控條件下長(zhǎng)成的，對(duì)自然生態(tài)環(huán)境條件下能否適應(yīng)，還需要一個(gè)過渡階段，這個(gè)過渡階段就是鍛煉。方法是，將試管苗轉(zhuǎn)移到較大的容器中培養(yǎng)，使小苗生長(zhǎng)健壯；或?qū)⒂忻绲脑嚬芤频阶匀还庹障?～3天，打開試管口2～3天，使試管苗得到鍛煉，然后移栽。

試管苗移栽時(shí)先用30℃左右溫水，洗凈苗上的瓊脂等培養(yǎng)基，再移入溫室栽植，不要直接移入露地栽植，因成活率很低。溫室保持20～25℃的溫度，95%的空氣相對(duì)濕度，土壤為腐殖土或人工配制的營(yíng)養(yǎng)土。溫室中生長(zhǎng)80天左右，葉可長(zhǎng)到8片以上，株高6厘米以上，新根數(shù)量500條以上，長(zhǎng)17厘米以上。然后再移栽到露地苗圃，成活率極高。

7 結(jié)語

獼猴桃的實(shí)生繁殖、嫁接繁殖、扦插繁殖與組織培養(yǎng)繁殖等4種繁殖方法，是目前中國(guó)和其他國(guó)家普遍采用的繁殖方法。除此之外，還有其他繁殖方法，如利用枝蔓進(jìn)行壓條繁殖，包括地面壓條和空中壓條；利用根際萌蘗進(jìn)行分株繁殖。這兩種繁殖技術(shù)因?yàn)榉敝陈实停槐悴僮?，因此不常采用?/p>