口腔清潔護(hù)理用品 牙膏中黃芩苷含量的測(cè)定 高效液相色譜法(T/COCIA 15—2021)

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。

本文件由中國(guó)口腔清潔護(hù)理用品工業(yè)協(xié)會(huì)提出。

本文件由全國(guó)口腔護(hù)理用品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)牙膏分技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC492/SC1)歸口。

本文件主要起草單位：無(wú)限極(中國(guó))有限公司、云南白藥集團(tuán)健康產(chǎn)品有限公司、淮安縱橫生物科技有限公司淮陰分公司、柳州兩面針股份有限公司、廣州質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)研究院。

本文件主要起草人：高艷、陳杰鋒、肖蕾、高鷹、王兆鵬、郭婷婷、黃華來(lái)、夏澤敏。

本文件為首次發(fā)布。

1 范圍

本文件規(guī)定了用高效液相色譜法測(cè)定牙膏中黃芩苷含量的試劑和材料、儀器和設(shè)備、分析步驟、結(jié)果計(jì)算、檢出限和定量限、回收率、精密度、允許差。

本文件適用于碳酸鈣基質(zhì)、二氧化硅基質(zhì)、磷酸氫鈣基質(zhì)牙膏中黃芩苷含量的測(cè)定。

2 規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

3 術(shù)語(yǔ)和定義

本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。

4 試劑和材料

4.1 乙腈(色譜純)。

4.2 無(wú)水乙醇(色譜純)。

4.3 磷酸(優(yōu)級(jí)純)。

4.4 0.1%磷酸溶液(體積分?jǐn)?shù))。

4.5 乙醇-磷酸混合溶液：無(wú)水乙醇(4.2)+磷酸(4.3)+水=50+6+44(體積比)。

4.6 黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥95%，CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)式參見(jiàn)附錄A表A.1。

4.7 除非另有規(guī)定，所用試劑均為分析純。水為符合GB/T6682中一級(jí)用水規(guī)定。

4.8 黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液

稱(chēng)取黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品(4.6)50mg(精確至0.01mg，純度修正)于250mL的棕色容量瓶中，用無(wú)水乙醇(4.2)溶解并定容至刻度，此溶液濃度為0.20mg/mL。該溶液于棕色瓶中0～4℃冰箱避光可保存7天。

4.9 黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液

分別吸取0.20mg/mL黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(4.7)0.25mL、2.5mL、5.0mL、10.0ml、15.0mL、25.0mL于50mL棕色容量瓶中，再用無(wú)水乙醇(4.2)稀釋至刻度；配制成濃度為1.00μg/mL、10.00μg/mL、20.00μg/mL、40.00μg/mL、60.00μg/mL、100.00μg/mL標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(現(xiàn)配現(xiàn)用)。

4.10 石英砂：40-80目，含量≥99.0%。

5 儀器和設(shè)備

5.1 高效液相色譜儀：與二極管陣列(或紫外)檢測(cè)器聯(lián)用。

5.2 分析天平：感量為0.1mg、0.01mg。

5.3 棕色容量瓶：50mL、250mL。

5.4 具塞刻度離心管：50mL。

5.5 超聲波儀。

5.6 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不小于5000r/min。

5.7 微孔濾膜：孔徑0.22μm。

5.8 渦旋振蕩器。

5.9 移液管或移液器：1mL、5mL、10mL、15mL、25mL。

6 分析步驟

6.1 試樣處理

稱(chēng)取試樣1g(精確至0.1mg)于具塞刻度離心管(5.4)中，加入約1g石英砂(4.10)，再準(zhǔn)確加入乙醇-磷酸混合溶液(4.5)20mL，稱(chēng)定重量，渦旋振蕩2min，25℃水浴中超聲提取40min，冷卻至室溫后用乙醇-磷酸混合溶液(4.5)補(bǔ)足損失重量，5000rpm/min離心分離10min，取上清液經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，濾液作為試樣溶液上機(jī)待測(cè)。

6.2 測(cè)定條件

高效液相色譜測(cè)定參考條件如下：

a)色譜柱規(guī)格：C18色譜柱：250mm×4.6mm(粒徑5μm)，或等效色譜柱；

b)流動(dòng)相：A：乙腈(4.1)B：0.1%磷酸溶液(4.4)，梯度洗脫，見(jiàn)表1；

表1 流動(dòng)相梯度洗脫表

c)流量：1.0mL/min；

d)柱溫：30℃；

e)進(jìn)樣量：10μL；

f)檢測(cè)波長(zhǎng)：277nm；

6.3 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制

按6.2色譜條件檢測(cè)，以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(4.8)的濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。

黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC色譜圖參見(jiàn)附錄B中的圖B.1。

6.4 測(cè)定

按6.2的色譜條件，取6.1步驟中的待測(cè)試樣溶液進(jìn)樣，得到試樣溶液的峰面積，根據(jù)保留時(shí)間和二極管陣列的光譜圖定性，黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品的DAD光譜圖參見(jiàn)附錄B中的圖B.2。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得試樣溶液中黃芩苷的含量。

注：試樣溶液中黃芩苷的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，超過(guò)線性范圍則應(yīng)將提取液稀釋后測(cè)定或增加提取溶液的濃度重新檢測(cè)。

6.5 空白試驗(yàn)

除不稱(chēng)取試樣外，均按上述步驟進(jìn)行。

6.6 平行試驗(yàn)

樣品中的黃芩苷含量應(yīng)根據(jù)兩次獨(dú)立的平行試驗(yàn)結(jié)果的算術(shù)平均值確定。

7 結(jié)果計(jì)算

試樣中的黃芩苷含量按公式(1)計(jì)算：

(1)

式中：X——試樣中黃芩苷的含量，單位為毫克每千克(mg/kg)；

c——從標(biāo)準(zhǔn)曲線中得出的黃芩苷濃度(應(yīng)扣除空白值)，單位為微克每毫升(μg/mL)；

V——試樣溶液的體積，單位為毫升(mL)；

m——試樣質(zhì)量，單位為克(g)；

計(jì)算結(jié)果保留3位有效數(shù)字。

8 檢出限和定量限

當(dāng)樣品稱(chēng)樣量為1g，混合溶液加入量為20mL時(shí)，本方法黃芩苷的檢出限為1mg/kg，定量限為3mg/kg。

9 允許差

在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不應(yīng)超過(guò)算術(shù)平均值的10%。

附錄A

(資料性附錄)

附錄A芩苷的CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)式

黃芩苷的CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)式，信息見(jiàn)表A.1。

表A.1 黃芩苷的CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)式

附錄B

(資料性附錄)

黃芩苷的CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)式

黃芩苷的參考液相譜圖和光譜圖，見(jiàn)圖B.1和圖B.2。

注：黃芩苷參考保留時(shí)間20.2min

圖B.2黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品的DAD光譜圖