卡式微柱凝膠技術(shù)在血型鑒定及輸血前紅細胞不規(guī)則抗體檢驗中的作用

羅純生，周 揚，展秀君

（1.佳木斯市中心血站檢驗科，黑龍江 佳木斯 154002；2.佳木斯市中醫(yī)醫(yī)院檢驗科，黑龍江 佳木斯 154002）

輸血（blood transfusion）是臨床治療疾病的措施和搶救急危重癥患者的有效手段，利于維持患者生命安全，具有較高的臨床應(yīng)用價值。但在輸血過程中，不規(guī)則抗體容易引起不良反應(yīng)，嚴重影響治療者的身體健康[1，2]。因此，輸血前進行血型鑒定是預(yù)防輸血不良事件、確保輸血安全的關(guān)鍵。目前，臨床血型鑒定方法較多，主要包括試管法、蛋白酶法、聚凝胺法、抗體人球蛋白法等，其中試管法是血型鑒定的“金標準”方法，但其操作復(fù)雜、耗時較長，臨床應(yīng)用具有一定的局限性[3]。因此，尋找一種科學(xué)合理、簡便的檢驗方式是當(dāng)前迫切需要解決的問題之一?？ㄊ轿⒅z技術(shù)是一種現(xiàn)代化檢驗方式，與傳統(tǒng)方式比較，其可避免配血期間對紅細胞的反復(fù)洗滌，一定程度改善檢驗靈敏度[4，5]。但是卡式微柱凝膠技術(shù)在血型鑒定及輸血前紅細胞不規(guī)則抗體檢驗中的作用尚未完全明確，需要臨床進一步探究證實[6]?；诖耍狙芯恐饕^察卡式微柱凝膠技術(shù)在血型鑒定及輸血前紅細胞不規(guī)則抗體檢驗中的作用，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017 年1 月-2021 年12 月佳木斯市中醫(yī)醫(yī)院送佳木斯市中心血站進行配血的200例輸血患者為研究對象，其中男109 例，女91 例；年齡31～85 歲，平均年齡（63.14±3.08）歲。本研究患者自愿參加，并簽署知情同意書。

1.2 納入和排除標準 納入標準：①無輸血治療禁忌證[7]；②認知、精神正常。排除標準：①合并肝、腎、心、腦血管系統(tǒng)等嚴重疾病者；②合并嚴重血液系統(tǒng)疾??；③依從性較差，不能配合者；④隨訪資料不完善者。

1.3 方法 所有研究對象均進行血型鑒定及輸血前紅細胞不規(guī)則抗體檢驗，以試管法檢測為金標準。

1.3.1 試管法 取晨起空腹外周靜脈血2 ml，置于乙二胺四乙酸二鉀抗凝真空無菌采血管內(nèi)，標本要求：正定型：取5%的ABO 紅細胞懸液1 滴，然后分別加1 滴抗-A、抗-B、抗-D 血清，輕搖混勻后離心15 min；反定型：取樣本血漿2 滴，分別加標準的A、B、O 細胞懸液1 滴，混勻后離心，然后依據(jù)根據(jù)《輸血技術(shù)學(xué)》[8]試管法操作標準對患者的血型進行鑒定。

1.3.2 聚凝胺法 采用改良凝聚胺試劑盒（上海血液生物醫(yī)藥有限公司，國械注準20163400557），取4支相同試管，分別標記為對照管、Ⅰ管、Ⅱ管、Ⅲ管，對照管中裝陽性對照組血漿，加入1 滴獻血者3%～5%的紅細胞；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ管中分別裝受血者血漿2滴，加入1 滴3%～5%的不規(guī)則抗體篩選紅細胞，所有檢測試管加入0.6 ml 的低離子溶液，混合均勻后置于室溫下孵育1 min；同時，所有試管置入2 滴凝聚胺溶液，混合均勻后以3100 r/min 離心1 min 后，棄去上層清夜，檢測紅細胞是否出現(xiàn)凝聚反應(yīng)，若未見凝集則需要重做；最后滴入2 滴重懸液，輕輕搖動觀察結(jié)果，若是由凝聚胺引起的紅細胞非特異性凝集應(yīng)在1 min 內(nèi)散開，若是由免疫抗體引起的凝集反應(yīng)則不會完全散開。嚴格按照改良凝聚胺試劑盒說明書進行操作[9]。

1.3.3 卡式微柱凝膠技術(shù) 采用微柱凝膠卡（美國BIO-RAD 公司，規(guī)格：6×AHG），取篩選紅細胞中壓積紅細胞10 μl，置于紅細胞稀釋液（1.2 ml）中，觀察懸液顏色呈均勻淺紅色且無絮狀物后向微柱凝膠卡中加入1.0%混合篩選細胞50 μl 和受測者懸液25 μl，隨后置于37 ℃的卵育器中卵育15 min，然后以1500 r/min 速率離心3 min 取出觀察。嚴格按照卡微柱凝膠卡說明書進行操作[10]。

1.4 觀察指標 比較兩種檢驗方法血型鑒定準確率、紅細胞不規(guī)則抗體檢出率。

1.4.1 聚凝胺法結(jié)果判定[11，12]陽性：紅細胞不完全散開，即出現(xiàn)凝集反應(yīng)；陰性：紅細胞迅速散開，并在1 min 內(nèi)完全散開則無凝集反應(yīng)，表示血型合適。

1.4.2 卡式微柱凝膠法結(jié)果判定[13]陽性：凝集的紅細胞在凝膠表面形成一條紅線，或凝集物分散在凝膠中端或表面；陰性：紅細胞在凝膠管底部處紅細胞完全降解，形成密集的扣形物，表示血型合適。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用統(tǒng)計軟件包SPSS 21.0 對本研究數(shù)據(jù)進行處理，計數(shù)資料采用[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗；P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 試管法鑒定血型結(jié)果 200 例輸血患者經(jīng)試管法檢測，結(jié)果顯示正反定型符合率為90.50%（181/200），正反正型不符合率為9.50%（19/200）。

2.2 兩種檢驗方法血型鑒定準確率比較 卡式微柱凝膠技術(shù)ABO、RhD 血型鑒定準確率均高于聚凝胺法（P＜0.05），見表1。

表1 兩種檢驗方法血型鑒定準確率比較[n（%）]

2.3 兩種檢驗方法紅細胞不規(guī)則抗體檢出率比較卡式微柱凝膠技術(shù)檢驗不規(guī)則抗體陽性率高于聚凝胺法（P＜0.05），見表2。

表2 兩種檢驗方法紅細胞不規(guī)則抗體檢出率比較[n（%）]

3 討論

輸血是臨床常用的治療方法，需要遵循輸同型血原則，但臨床受血液、血液制品抗原、抗體成分多樣性的影響，可能發(fā)生不同程度、不同類型的不良反應(yīng)，尤其異體/自提輸血、免疫刺激等產(chǎn)生的不規(guī)則抗體可導(dǎo)致血型正反定型不符，從而影響輸血安全性。因此，輸血前應(yīng)重視對不規(guī)則抗體的篩查，提高輸血安全性的同時，實現(xiàn)良好的輸血臨床作用。常規(guī)的輸血檢驗方法具有自動化程度低、人為干擾因素多、操作流程缺乏標準化、最低檢測限較高等不足，會影響不規(guī)則抗體檢測結(jié)果的準確性[14]。臨床需要輸血治療的患者通常為危急重癥患者，如不及時輸血，可能致殘，甚至致死；若輸注血型不匹配血漿，可引起急性溶血反應(yīng)，造成血管內(nèi)溶血，嚴重威脅患者的生命安全[15]。相關(guān)研究顯示[16]，不規(guī)則抗體引起的輸血反應(yīng)，主要以免疫溶血反應(yīng)為主，由于免疫刺激的產(chǎn)生，從而對相應(yīng)的紅細胞產(chǎn)生致敏作用，并且會直接影響抗體（IgG）效應(yīng)。而抗-c、抗-C、抗-e、抗-D、抗-E 均屬于IgG 抗體[17]。研究表明[18]，卡式微柱凝膠技術(shù)能有效結(jié)合離心速率和細小凝膠顆粒網(wǎng)，可將非凝結(jié)和凝結(jié)的紅細胞快速分離，并且凝膠卡微孔只能通過1 個紅細胞，如果紅細胞凝結(jié)則無法通過，通過該方法可實現(xiàn)陽性判斷，一定程度提高檢測準確性率。

本研究結(jié)果顯示，200 例輸血患者經(jīng)試管法檢測，結(jié)果顯示正反定型符合率為90.50%，正反正型不符合率9.50%，表明試管法進行血型鑒定準確率較高。同時研究結(jié)果顯示，卡式微柱凝膠技術(shù)ABO、RhD 血型鑒定準確率高于聚凝胺法（P＜0.05），表明卡式微柱凝膠技術(shù)可提高血型鑒定準確率，分析認為紅細胞和不規(guī)則抗體結(jié)合會發(fā)生凝聚，增大紅細胞體積，使其不能通過凝膠間隙漂浮于上層；而卡式微柱凝膠技術(shù)能夠在離心速率配合和細小凝膠顆粒網(wǎng)下，實現(xiàn)非凝結(jié)和凝結(jié)紅細胞的快速分離，使每個微柱孔徑只能通過1 個正常紅細胞，從而有效分離正常紅細胞和發(fā)生凝聚紅細胞，一定程度提高提高血型鑒定準確性[19]。此外，卡式微柱凝膠技術(shù)檢驗不規(guī)則抗體陽性率高于聚凝胺法（P＜0.05），與薄濤[20]的報道基本相似，表明卡式微柱凝膠技術(shù)紅細胞不規(guī)則抗體檢出率相對較高，分析認為可能是由于IgG 抗體分子鏈均短小，無法進行有效凝聚，使聚凝胺法檢測受到影響；同時，卡式微柱凝膠技術(shù)已經(jīng)趨于標準化定量操作，有效應(yīng)用凝膠分子篩技術(shù)、免疫學(xué)檢測技術(shù)，可提高檢測方法的靈敏度、安全性。此外，該檢測方法改變了傳統(tǒng)繁瑣的洗滌紅細胞過程，有效預(yù)防人血球蛋白被中和，從而降低假陰性的發(fā)生，提高檢測的準確性。

綜上所述，卡式微柱凝膠技術(shù)在血型鑒定中準確性較高，并且對輸血前紅細胞不規(guī)則抗體的檢出率較高，加之規(guī)范性、標準化操作，可提高臨床輸血安全性，具有良好的應(yīng)用價值。