銅鐵合劑、敵百蟲、甲醛和聚維酮碘對異育銀鯽“中科3 號”魚苗的急性毒性試驗

戴瑜來，謝楠，戴楊鑫，許寶青，林啟存，王宇希

（杭州市農(nóng)業(yè)科學研究院，浙江 杭州 310024）

異育銀鯽“中科3 號”（Carassius auratus gibelio“CASⅢ”）是中國科學院水生生物研究所培育的鯽品種，因其具有生長快、抗病力強、出肉率高、營養(yǎng)豐富、養(yǎng)殖效益好等特點，深受養(yǎng)殖者和消費者歡迎。但高密度、集約化養(yǎng)殖會增加其疾病發(fā)生的風險，研究發(fā)現(xiàn)，苗種培育期是異育銀鯽“中科3號”的疾病易發(fā)期。目前，關于異育銀鯽“中科3 號”對于藥物敏感性方面的研究鮮見報道?，F(xiàn)采用靜態(tài)急性毒性試驗法，開展了銅鐵合劑、敵百蟲、甲醛和聚維酮碘對異育銀鯽“中科3 號”的急性毒性試驗，分析異育銀鯽“中科3 號”對藥物的敏感性，旨在為異育銀鯽“中科3 號”苗種養(yǎng)殖期間的病害防治和科學用藥提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

試驗所用異育銀鯽“中科3 號”（以下簡稱試驗魚）來自杭州市農(nóng)業(yè)科學研究院水產(chǎn)研究所，體格健康，體表無損，體長為（3.2±0.16）cm，體質(zhì)量為（0.8±0.22）g。

1.2 試驗藥物

銅鐵合劑[純度99.0%，m（硫酸銅）∶m（硫酸亞鐵）=5∶2，國藥集團化學試劑有限公司]；敵百蟲（含量≥90%，南通江山農(nóng)業(yè)化工股份有限公司）；聚維酮碘（有效含量10%，武漢九州神農(nóng)藥業(yè)有限公司）；甲醛（純度37.0%～40.0%，西隴化工股份有限公司）。

1.3 試驗條件

每種藥物準備15 個玻璃缸（96.5 cm×47.5 cm×49 cm），另設一個對照缸，每個玻璃缸水體積均為150 L，試驗用水為經(jīng)存放并曝氣處理24 h 的自來水，pH 值6.98～7.80，ρ（溶解氧）6.7～7.25 mg/L，水溫（25.5±0.5）℃，每個缸各設一個充氣頭，投放20 尾試驗魚。

1.4 試驗方法

試驗前，將試驗魚暫養(yǎng)于玻璃缸中1 周，正常投飼，待其適應實驗室的環(huán)境后，采用靜態(tài)急性毒性試驗法進行試驗。先進行預試驗，每個藥物分別設置5 個濃度梯度組（Ⅰ—Ⅴ）和1 個對照組（對照組為不含藥物的曝氣自來水，其他條件均相同），濃度梯度按照等對數(shù)間距設置，同時設2 個平行，見表1。

表1 試驗魚用藥濃度 mg/L

試驗藥物先配置成高濃度母液，現(xiàn)配現(xiàn)用。用藥后，8 h 內(nèi)連續(xù)觀察試驗魚中毒癥狀和死亡情況，8 h 后按用藥后24，48，96 h 記錄試驗死亡魚數(shù)量，其間及時撈除死亡個體（以喪失游泳能力，觸碰無反應為準）。試驗期間不投飼，且以對照組不出現(xiàn)死魚為本試驗進行的必要條件。

1.5 半致死濃度和安全濃度的計算

根據(jù)24，48，96 h 不同藥物、濃度條件下受試魚的死亡率數(shù)據(jù)，采用改進寇氏法計算24，48，96 h 的半致死濃度（LC。

標準誤差（S）=i（Σp（1-p）/n）1/2，

LC的95%置信區(qū)間=lg（lg LC±1.96S lg LC）。

式中：X——試驗組最大劑量的對數(shù)；

i——相鄰組濃度對數(shù)之差；

p——各組的死亡率，%；

∑p——各組死亡率的總和，%；

n——每組受試魚數(shù)量，尾。

安全濃度（SC）根據(jù)24 h 和48 h 的半致死量濃度求得。

SC=48 h LC×0.3/（24 h LC/48 h LC）。

2 結果與分析

2.1 銅鐵合劑的毒性試驗

將銅鐵合劑母液按試驗濃度要求，稀釋后潑灑在養(yǎng)殖試驗魚的玻璃缸中。經(jīng)觀察發(fā)現(xiàn)，各缸中的試驗魚起初均未有明顯反應，1 h 后可見高濃度組（9.06 和15.00 mg/L）試驗魚的平衡能力明顯受到影響，游動無力。受藥物影響，魚體色變淺，體表黏液增多，并有白色絮狀黏附物，2 h 后死亡。銅鐵合劑對試驗魚的毒性試驗結果見表2。

表2 銅鐵合劑對試驗魚的毒性試驗結果

2.2 敵百蟲的毒性試驗

將敵百蟲母液按試驗濃度要求，稀釋后潑灑到養(yǎng)有試驗魚的玻璃缸中。2.5 h 后試驗魚出現(xiàn)異常，6 h 后死亡。受藥物影響，魚體扭曲，翻轉側游，死魚體表發(fā)白，魚體僵硬，鰓絲發(fā)紫。敵百蟲對試驗魚的毒性試驗結果見表3。

表3 敵百蟲對試驗魚的毒性試驗結果

續(xù)表

2.3 甲醛的毒性試驗

將甲醛母液按試驗濃度要求，稀釋后潑灑在養(yǎng)殖試驗魚的玻璃缸中。3 h 后試驗魚出現(xiàn)異常，8 h 后死亡。受藥物影響，試驗魚出現(xiàn)急速旋轉、焦躁不安、上下竄游、來回游動的現(xiàn)象，不久后沉入缸底，對刺激反應敏感。甲醛對試驗魚的毒性試驗結果見表4。

表4 甲醛對試驗魚的毒性試驗結果

2.4 聚維酮碘的毒性試驗

將聚維酮碘母液按試驗濃度要求，潑灑到養(yǎng)有試驗魚的玻璃缸中。發(fā)現(xiàn)試驗魚最高濃度組（200.0 mg/L）在用藥后10 min 時，出現(xiàn)亂竄、打轉，不久后失去平衡，呼吸緩慢，浮于水面或沉入水底；在30 min 時，死亡。聚維酮碘對試驗魚的毒性試驗結果見表5。

表5 聚維酮碘對試驗魚的毒性試驗結果

3 討論

3.1 4 種漁藥對試驗魚的毒性強度

藥物對試驗魚毒性的大小常用LC來衡量。本試驗結果表明，藥物對異育銀鯽“中科3 號”毒性由強到弱依次為：銅鐵合劑、敵百蟲、甲醛、聚維酮碘。參照《危險化學品魚類急性毒性分級試驗方法》（GB/T 21281—2007），96 h LC≤1 mg/L 時為急性毒性Ⅰ級，1 mg/L<96 h LC≤10 mg/L 為急性毒性Ⅱ級，10 mg/L<96 h LC≤100 mg/L 為急性毒性Ⅲ級。4 種藥物對試驗魚的毒性分類為：銅鐵合劑和敵百蟲為急性毒性Ⅱ級；甲醛為急性毒性Ⅲ級，而聚維酮碘則不在急性毒性Ⅰ級至Ⅲ級范圍內(nèi)。

3.2 用藥注意事項

硫酸銅與硫酸亞鐵合劑在生產(chǎn)上主要用于殺滅中華鳋、車輪蟲、斜管蟲、舌杯蟲、水網(wǎng)藻和青苔等，其對魚類的毒性受水中溶解氧、pH 值、有機物含量、鹽度等影響。本研究發(fā)現(xiàn)，硫酸銅對試驗魚的SC 是0.68 mg/L，高于淇河鯽（0.16 mg/L），低于異育銀鯽“中科5 號”（0.94 mg/L），相比較銅鐵合劑常用濃度（0.7～1.0 mg/L）要低。因此，本規(guī)格試驗魚在使用銅鐵合劑時要注意藥物使用安全。

敵百蟲是一種廣譜性有機磷類殺蟲劑，主要用于殺滅體表的中華鳋、魚鲺、錨頭鳋、指環(huán)蟲和三代蟲等。本試驗中，敵百蟲對試驗魚幼魚的SC 是2.04 mg/L，遠高于異育銀鯽的SC（0.016 mg/L），高于敵百蟲的常用濃度（0.3～0.7 mg/L）。因此，敵百蟲對于本規(guī)格試驗魚而言是一種較為安全的藥物。

甲醛是一種有刺激性臭味的化學試劑，可凝固蛋白和溶解類脂，在氣態(tài)或液態(tài)下，均具有強烈的殺菌作用，是一類廣譜的殺菌劑。本研究中甲醛對于試驗魚的SC 是10.98 mg/L，低于彩鯽的SC（21 mg/L），也較甲醛的常用浸泡濃度（30～40 mg/L）要低，但從試驗魚試驗濃度（25 和39.13 mg/L）組的死亡情況，以及浸泡方法接觸藥物時間較短來分析，甲醛可安全用于該規(guī)格試驗魚的浸泡。而甲醛在生產(chǎn)上作為遍灑藥物因用量大而導致其應用受到一定的限制。

聚維酮碘是聚乙烯吡咯烷酮與碘的絡合物，對大部分細菌、真菌、真菌孢子及部分病毒均有一定的殺滅作用。本試驗結果中，聚維酮碘的SC 為28.83 mg/L，高于異育銀鯽（7.48 mg/L），遠高于常用濃度（0.2～0.5 mg/L）。因此，聚維酮碘對于本研究規(guī)格的試驗魚是一種較為安全的藥物。