球孢白僵菌對(duì)雞皮刺螨體外殺滅效果試驗(yàn)

林 琳 吳勝會(huì) 江 斌 張世忠 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所 福州 350013

雞皮刺螨是雞場(chǎng)（尤其是規(guī)?；半u場(chǎng)）的重要體外寄生蟲，在飼養(yǎng)條件簡(jiǎn)陋的陳舊雞舍更為常見，是引起蛋雞場(chǎng)減蛋和雞只衰竭死亡的主要原因。 目前雞場(chǎng)多采用體外殺蟲劑（如溴氫菊脂、雙甲脒、敵百蟲等） 進(jìn)行定期噴殺或采用伊維菌素拌料飼喂來防控雞皮刺螨病[1]。 由于體外殺蟲劑耐藥性及藥物在禽肉產(chǎn)品或雞蛋內(nèi)殘留問題， 化學(xué)殺螨劑的使用越來越受到限制， 探索采用生物方法來防控雞場(chǎng)體外寄生蟲病是未來必由之路。 球孢白僵菌是廣泛應(yīng)用于農(nóng)林害蟲的一種高效、環(huán)保生物殺蟲劑，國(guó)內(nèi)外研究證實(shí)球孢白僵菌對(duì)柑橘木虱、 綿羊癢螨等昆蟲有較好的殺蟲效果[2-7]，對(duì)雞皮刺螨也有一定的驅(qū)殺效果，且對(duì)雞、羊等畜禽無任何毒副反應(yīng)。 為評(píng)價(jià)球孢白僵菌對(duì)雞皮刺螨的殺滅效果， 設(shè)計(jì)不同濃度的球孢白僵菌懸浮液對(duì)雞皮刺螨進(jìn)行體外殺滅效果評(píng)價(jià)，以期篩選出理想濃度的懸浮液應(yīng)用于生產(chǎn)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 球孢白僵菌 由廣西農(nóng)保生物工程有限公司提供，每克孢子粉含孢子1×1010個(gè)。

1.1.2 雞皮刺螨 采集于福州市郊區(qū)某蛋雞場(chǎng)，成蟲數(shù)量約1 500 只。 每批5 組，每組100 只，重復(fù)3 次試驗(yàn)。

1.1.3 其他材料 培養(yǎng)皿、濾紙、透明塑料袋、細(xì)毛筆、一次性注射器等。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)時(shí)間與條件 2021 年5~6 月，室溫20~28 ℃。

1.2.2 球孢白僵菌孢子懸液配制 A 組： 取1 g 球孢白僵菌+10 mL 生理鹽水混勻， 即1 mL 含1×109個(gè)孢子；B 組： 取A 組懸浮液1 mL+9 mL 生理鹽水混勻，即1 mL 含1×108個(gè)孢子；C 組：取B 組懸浮液1 mL+9 mL 生理鹽水混勻， 即1 mL 含1×107個(gè)孢子；D 組：取C 組懸浮液1 mL+9 mL 生理鹽水混勻，即1 mL 含1×106個(gè)孢子。

1.2.3 試驗(yàn)方法 取5 個(gè)潔凈的培養(yǎng)皿， 分別放入100 只皮刺螨成蟲，分別取A、B、C、D 組不同濃度菌液2 mL 采用一次性注射器均勻噴灑在100 只蟲體上，對(duì)照組噴灑生理鹽水2 mL，蓋上皿蓋，外套一個(gè)透明的塑料袋（防止蟲體逃逸），扎緊袋口，在室內(nèi)試驗(yàn)臺(tái)靜置觀察15 d。 每天早上8:00 松開袋口，觀察各組蟲體活動(dòng)情況（用毛筆尖拔動(dòng)蟲體，若蟲體不動(dòng)則判定為死亡），并清點(diǎn)死亡蟲體數(shù)量，觀察后再扎緊袋口。統(tǒng)計(jì)5 d 內(nèi)、10 d 內(nèi)、15 d 內(nèi)死亡蟲體數(shù)量。重復(fù)3 次試驗(yàn)。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)方法 用DPS 對(duì)不同濃度白僵菌導(dǎo)致每天雞皮刺螨累計(jì)死亡數(shù)量做線形回歸分析， 建立直線回歸模型， 計(jì)算LT50。 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和顯著性分析， 數(shù)據(jù)均用三次試驗(yàn)平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示[2]。

2 結(jié) 果

2.1 不同組螨蟲死亡情況 經(jīng)過15 d 試驗(yàn)觀察，A組在5 d 內(nèi)、10 d 內(nèi)及15 d 內(nèi)死亡蟲體數(shù)量分別為27.667±5.503 只、94.333±2.082 只、100 只；B 組 在5 d 內(nèi)、10 d 內(nèi)及15 d 內(nèi)死亡蟲體數(shù)量分別為26.333±3.786 只、95.000±1.000 只、100 只；C 組 在5 d 內(nèi)、10 d 內(nèi)及15 d 內(nèi)死亡蟲體數(shù)量分別為11.333±0.577 只、43.667±0.577 只、95.000±1.528 只；D 組在5 d 內(nèi)、10 d 內(nèi)及15 d 內(nèi)死亡蟲體數(shù)量分別為10.677±1.000 只、42.667±1.508 只、85.333± 3.512只； 對(duì)照組在組在5 d 內(nèi)、10 d 內(nèi)及15 d 內(nèi)死亡蟲體數(shù)量分別為4.333±0.577 只、20.667± 2.080 只、50.000±9.539 只（見表1、圖1）。

圖1 不同濃度白僵菌對(duì)雞皮刺螨的殺滅效果曲線圖

表1、 圖1 可以看出，4 個(gè)試驗(yàn)組與對(duì)照組之間差異都極顯著（P<0.01），A 組與B 組之間差異不顯著（P>0.05），C 組與D 組之間差異不顯著（P>0.05），A 組、B 組 與C 組、D 組 之 間 差 異 都 極 顯 著 （P<0.01）。表明A 組（菌液濃度1×109個(gè)/mL）和B 組（菌液濃度1×108個(gè)/mL）對(duì)雞皮刺螨有較好殺滅效果；C組、D 組對(duì)雞皮刺螨也有一定的殺滅效果，但起效時(shí)間比較慢。

表1 不同濃度球孢白僵菌對(duì)雞皮刺螨的體外殺滅效果

2.2 不同濃度白僵菌對(duì)雞皮刺螨的致死中時(shí)比較從表2 可以看出，A 組和B 組的致死中時(shí) （LT50）分別為5.70 d 和5.57 d， 兩組之間差異不顯著 （P>0.05），C 組和D 組的LT50分別為9.78 d 和10.02 d，兩組之間差異不顯著 （P>0.05）， 但A 組、B 組與C組、D 組之間差異極顯著（P<0.01）。

3 分析與討論

從試驗(yàn)結(jié)果看，1×109個(gè)/mL 和1×108個(gè)/mL 白僵菌濃度在10 d 內(nèi)可殺滅90%以上蟲體，LT50分別為5.70 d 和5.57 d； 而1×107個(gè)/mL 和1×106個(gè)/mL濃度要15 d 時(shí)間殺滅85%以上的蟲體，LT50分別為9.78 d 和10.02 d。 表明不同濃度的球孢白僵菌對(duì)雞皮刺螨有不同程度的殺滅效果， 在臨床上應(yīng)用效果有待于對(duì)發(fā)病雞場(chǎng)進(jìn)一步應(yīng)用驗(yàn)證。

球孢白僵菌是自然界中廣泛存在的特異性寄生型真菌，可寄生于蛛形綱、昆蟲綱中的鞘翅目、鱗翅目、膜翅目等多個(gè)綱目的蟲體，是一種廣泛應(yīng)用于農(nóng)林害蟲防治的微生物[3]。 其殺蟲機(jī)理是白僵菌孢子在接觸害蟲后產(chǎn)生芽管侵入蟲體， 并在蟲體內(nèi)大量繁殖，產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物對(duì)昆蟲體內(nèi)角質(zhì)層、細(xì)胞層、細(xì)胞核都會(huì)產(chǎn)生不利影響， 最終導(dǎo)致害蟲因代謝紊亂而死亡[3]。 雖然球孢白僵菌能侵害多種昆蟲，但不同菌株對(duì)害蟲寄生有一定的專一性或選擇性， 據(jù)張艷璇等[2]報(bào)道，白僵菌CQBb111 菌株對(duì)柑橘木虱有92.68%的殺滅效果， 而對(duì)胡瓜新小綏螨只有4.05%的殺滅效果。 環(huán)境因素對(duì)球孢白僵菌的致病力影響也較大，曹藝瀟等[8]測(cè)試了不同溫度、濕度下球孢白僵菌對(duì)草地螟幼蟲的致病力，結(jié)果表明：室溫26 ℃時(shí)致死率最高，死亡時(shí)間最短，而相對(duì)濕度越高，幼蟲死亡率也越高，在相對(duì)溫度95%時(shí)，幼蟲死亡率可達(dá)100%。

表2 不同濃度白僵菌對(duì)雞皮刺螨的致死中時(shí)

雞皮刺螨在適宜環(huán)境下不吃食可以存活3 個(gè)月，其生存適宜溫度為17~32 ℃，適宜濕度為40%~80%[9]，本試驗(yàn)中對(duì)照組也有部分成蟲死亡，分析與環(huán)境不良有關(guān)（特別是高濕度）。 不同階段蟲體對(duì)白僵菌的易感性是否存在差異，有待進(jìn)一步證實(shí)。