胃癌組織中COX-2蛋白、UHRF1蛋白表達(dá)及其與胃癌患者臨床病理特征的相關(guān)性分析

張凱 高建華 路志宇 謝元元

(榆林市第一醫(yī)院，(1.普通外科二病區(qū)；(2.消化內(nèi)科，陜西 榆林 719000)

研究[1]證實(shí)，環(huán)氧化酶2(COX-2)在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用，且在消化道大部分腫瘤中有過(guò)度表達(dá)。泛素樣含PHD和環(huán)指域蛋白1(UHRF1)屬于表觀遺傳學(xué)調(diào)節(jié)因子，主要與細(xì)胞生長(zhǎng)有關(guān)，現(xiàn)有研究[2-3]發(fā)現(xiàn)其在喉癌、肺腺癌等腫瘤疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程具有重要的作用。本文主要探討胃癌組織中COX-2蛋白、UHRF1表達(dá)及其與胃癌患者臨床病理特征的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年5月至2019年4月于我院普通外科就診的124例胃癌患者作為研究對(duì)象。納入患者符合胃癌相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，并經(jīng)影像學(xué)及病理活檢證實(shí)者；患者TNM分期：Ⅰ～Ⅳ期；凝血及造血功能正常；未合并其他腫瘤者；患者均經(jīng)外科手術(shù)切除治療，且術(shù)前均未行放化療。已排除轉(zhuǎn)移情況或胃癌分期存在分歧者；既往胃部手術(shù)史者；臨床資料不完整，伴有嚴(yán)重臟器功能不全、精神性疾病、認(rèn)知功能以及交流障礙等的患者；出現(xiàn)肝腎肺等遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，無(wú)法耐受手術(shù)切除治療者；胸膜粘連、肺膿腫等導(dǎo)致鄰近臟器轉(zhuǎn)移者；手術(shù)未能順利完成或術(shù)中切除脾臟者。納入患者中，男95例，女29例；年齡(59.14±6.79)歲；腫瘤≤5 cm 86例，腫瘤>5 cm 38例；局部浸潤(rùn)深度T1+242例，T3+482例；高分化5例，中分化39例，低分化80例；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移63例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移61例；臨床病理分期：Ⅰ～Ⅱ期70例，Ⅲ～Ⅳ期54例；病變部位：胃體癌28例，胃食管交界癌96例。患者均對(duì)本研究知情同意，并經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理研究協(xié)會(huì)同意。

1.2方法 患者均經(jīng)外科手術(shù)切除治療，并于手術(shù)中留取距腫瘤邊緣>1 cm處的胃癌組織以及距腫瘤邊緣5 cm處的癌旁組織，常規(guī)脫水，石蠟包埋，連續(xù)切片(厚度4 μm)。COX-2蛋白及UHRF1蛋白的表達(dá)水平均采用免疫組織化學(xué)法(SP法)進(jìn)行檢測(cè)，主要試劑包括鼠抗人UHRF1的多克隆抗體及免疫組化染色試劑盒(英國(guó)Abcam公司)，鼠抗人COX-2單克隆抗體及免疫組化染色試劑盒(美國(guó)Cay-man公司)，DAB顯色試劑盒、SP免疫組化試劑盒、磷酸緩沖鹽溶液(PBS)均由武漢博士德生物工程有限公司提供。實(shí)驗(yàn)步驟參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，以試劑公司提供的陽(yáng)性照片作陽(yáng)性對(duì)照。

1.3結(jié)果判定 采用雙盲法進(jìn)行判定，依據(jù)每個(gè)點(diǎn)的陽(yáng)性染色細(xì)胞構(gòu)成比和染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分和判讀。COX-2的判定：無(wú)色0分，淺黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；陽(yáng)性細(xì)胞<5% 0分，陽(yáng)性細(xì)胞構(gòu)成比為5%～25% 1分，陽(yáng)性細(xì)胞構(gòu)成比為26%～50% 2分，陽(yáng)性細(xì)胞構(gòu)成比為51%～75% 3分，陽(yáng)性細(xì)胞構(gòu)成比為>75% 4分。根據(jù)染色強(qiáng)度分值與陽(yáng)性細(xì)胞百分比分值的乘積判定，陰性(-)：0～1分，弱陽(yáng)性(+)：2～3分，中等陽(yáng)性(++)：4～6分，強(qiáng)陽(yáng)性(+++)：6分以上。UHRF1的判定：無(wú)色0分，淺黃色1分，淺黃色和棕黃色之間2分，深黃色3分，陽(yáng)性染色細(xì)胞構(gòu)成比為0為0分，陽(yáng)性細(xì)胞構(gòu)成比為0%～25% 1分，陽(yáng)性細(xì)胞構(gòu)成比為25%～50% 2分，陽(yáng)性細(xì)胞構(gòu)成比為50%～75% 3分，陽(yáng)性細(xì)胞構(gòu)成比為>75% 4分。根據(jù)染色強(qiáng)度分值與陽(yáng)性細(xì)胞百分比分值的乘積判定，陰性(-)：0分，弱陽(yáng)性(+)：1～4分，中等陽(yáng)性(++)：5～8分，強(qiáng)陽(yáng)性(+++)：9～12分。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料使用頻數(shù)表示，行χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1COX-2蛋白及UHRF1蛋白 胃癌組織中COX-2蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為66.94%，高于癌旁組織的22.58%(χ2=54.669，P<0.05)；HRF1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為65.32%，高于癌旁組織的48.39%(χ2=27.811，P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 COX-2蛋白及UHRF1蛋白在胃癌組織及癌旁組織中的比較[n(%)，N=124]

2.2相關(guān)性分析 COX-2蛋白表達(dá)與局部浸潤(rùn)程度、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān)(χ2=8.231、14.09、11.622，P均<0.05)；UHRF1蛋白表達(dá)與腫瘤大小、局部浸潤(rùn)程度、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān)(χ2=11.201、8.788、16.66，P均<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 COX-2蛋白表達(dá)與胃癌患者臨床病理特征的相關(guān)性分析

3 討 論

研究[5]顯示，胃癌在我國(guó)的惡性腫瘤發(fā)病率中位列第一位，以腺癌較為多見(jiàn)。現(xiàn)階段胃癌的診斷主要借助于胃十二指腸鏡檢查及病理學(xué)檢查，但大部分胃癌患者就診時(shí)已處于進(jìn)展期，分析與胃癌患者相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)志物對(duì)其早期診斷、控制胃癌進(jìn)展及探討治療靶點(diǎn)均有重要意義。COX是花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素(PG)過(guò)程中的限速酶，也是炎癥發(fā)展過(guò)程中的一個(gè)重要的誘導(dǎo)酶。COX-2屬于COX中與腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)的同工酶，受COX-2基因的控制，存在于核膜和微粒體膜，研究[6]指出其具有促進(jìn)腫瘤增殖、腫瘤血管新生等作用，還可以通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的侵襲、抑制細(xì)胞凋亡等多種途徑參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。研究[7]顯示，胃癌組織中COX-2陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于癌旁組織，可明顯促進(jìn)胃癌組織中腫瘤血管新生；本研究得到了與之相似的結(jié)果，胃癌組織中COX-2蛋白表達(dá)陽(yáng)性率高于癌旁組織，且卡方分析顯示，COX-2蛋白表達(dá)與局部浸潤(rùn)程度、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān)，進(jìn)一步說(shuō)明COX-2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)與胃癌細(xì)胞的生物學(xué)行為、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。

UHRF1屬UHRF超家族成員之一，含有多個(gè)功能結(jié)構(gòu)域，是新發(fā)現(xiàn)的一種與細(xì)胞生長(zhǎng)相關(guān)的核蛋白基因，可參與機(jī)體維持子細(xì)胞的DNA甲基化狀態(tài)、調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)及維持基因組穩(wěn)定、調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞的發(fā)育和功能等多種生理及代謝過(guò)程，在增殖旺盛的正常組織具有較高表達(dá)。UHRF1現(xiàn)已成為某些腫瘤早期診斷和預(yù)后評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)之一，既往研究[8]顯示其在多種腫瘤組織中呈過(guò)表達(dá)狀態(tài)，還能通過(guò)調(diào)控抑癌基因失活、細(xì)胞周期、凋亡等多種過(guò)程來(lái)影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，胃癌組織中UHRF1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率高于癌旁組織，且卡方分析顯示，UHRF1蛋白表達(dá)與局部浸潤(rùn)程度、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān)，提示UHRF1 在胃癌組織中過(guò)表達(dá)，且其表達(dá)與胃癌發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。研究[9-10]指出，UHRF1可通過(guò)其SRA 結(jié)構(gòu)域結(jié)合半甲基化的DNA，并趨化DNA甲基轉(zhuǎn)移酶到DNA復(fù)制的分叉處，催化新合成的DNA鏈發(fā)生甲基化，進(jìn)而調(diào)控基因表達(dá)。UHRF1可通過(guò)增加p16 INK4A 、hMLH1、p21和RB等腫瘤抑癌基因甲基化，從而抑制其表達(dá)，最終促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。此外，UHRF1還能調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞的發(fā)育和功能，調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)等，加之UHRF1在維持基因組的穩(wěn)定性以及細(xì)胞中的DNA甲基化方面具有重要作用，一旦機(jī)體受到外力侵害或刺激破壞這種維持作用，將觸發(fā)多基因的隨機(jī)表達(dá)，破壞細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)態(tài)，使得細(xì)胞凋亡或者細(xì)胞周期阻滯，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述，胃癌組織中COX-2蛋白及UHRF1蛋白呈過(guò)表達(dá)狀態(tài)，且與胃癌腫瘤大小、局部浸潤(rùn)程度、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān)。