5-HT、IL-18、CGRP 在腹瀉型腸易激綜合征患者中的表達(dá)及其與癥狀嚴(yán)重程度、內(nèi)臟敏感度相關(guān)性的研究

楊露菡 劉 群

腹瀉型腸易激綜合征（IBS-D）患者占腸易激綜合征（IBS）患者的50%～70%，IBS-D 患者存在內(nèi)臟高敏感，以腹痛、腹脹、腹瀉、排便習(xí)慣和次數(shù)改變等為主要臨床特征，癥狀持續(xù)存在或間歇性發(fā)作，嚴(yán)重降低了患者的生活質(zhì)量，目前缺乏有效的治療方法[1-2]?！吨袊?guó)腸易激綜合征專(zhuān)家共識(shí)意見(jiàn)（2015 年，上海）》[3]指出，IBS-D 治療原則是根據(jù)主要癥狀類(lèi)型進(jìn)行癥狀治療和根據(jù)癥狀嚴(yán)重程度進(jìn)行分級(jí)治療。因此，準(zhǔn)確評(píng)估IBS-D 患者的癥狀嚴(yán)重程度，探究IBS-D 癥狀嚴(yán)重程度的影響因素具有重要的臨床意義。5-羥色胺（5-HT）參與機(jī)體的胃腸道運(yùn)動(dòng)、睡眠、情緒、攝食等多種生理活動(dòng)的調(diào)控，其在IBS-D 患者腸黏膜中表達(dá)水平升高[4]。IBS 小鼠模型的IL-18 表達(dá)水平升高，可誘導(dǎo)炎性因子產(chǎn)生[5]。降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）是由37個(gè)氨基酸殘基組成的神經(jīng)肽，其在IBS-D 大鼠模型中表達(dá)水平升高，采用藥物降低CGRP 表達(dá)水平可改善腸黏膜的炎性反應(yīng)和屏障功能[6]。目前關(guān)于IBS-D 患者的血清5-HT、IL-18、CGRP 表達(dá)水平及其與癥狀嚴(yán)重程度、內(nèi)臟敏感度相關(guān)性的文獻(xiàn)報(bào)道較少，本研究對(duì)此進(jìn)行探討，以期為深入了解IBS-D 的發(fā)病機(jī)制、癥狀嚴(yán)重程度的分層、治療策略的選擇提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2019 年2 月至2020 年2 月武漢科技大學(xué)附屬天佑醫(yī)院收治的99 例IBS-D 患者設(shè)為IBS-D組，另選擇同期體檢的99 名健康人設(shè)為對(duì)照組。IBS-D 組 中，女 性49 例，男 性50 例，年 齡29～ 57 歲，平均年齡為（42.26±6.30）歲，體質(zhì)量指數(shù)（BMI）為19～25 kg/m2，平均BMI 為（22.67± 1.12）kg/m2。對(duì)照組中，女性53 例，男性46 例，年齡27～56 歲，平均年齡為（41.89±7.05）歲，BMI為19～25 kg/m2，平均BMI 為（22.89±1.03）kg/m2。 兩組的性別、年齡和BMI 均具有可比性（P 均＞0.05）。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）IBS-D 患者符合《中國(guó)腸易激綜合征專(zhuān)家共識(shí)意見(jiàn)（2015 年，上海）》[3]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）心、肝、腎功能無(wú)明顯異常；（3）入組前4 周內(nèi)無(wú)相關(guān)治療史。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）消化系統(tǒng)等惡性腫瘤患者；（2）感染性腹瀉患者； （3）多發(fā)性硬化等自身免疫性疾病患者；（4）食管靜脈曲張、消化道潰瘍出血患者；（5）妊娠期、哺乳期婦女；（6）先天性消化道畸形患者。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，受試者均簽署知情同 意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 評(píng)估癥狀嚴(yán)重程度 采用IBS 癥狀嚴(yán)重程度量表（IBS-SSS）評(píng)估，包括腹脹程度、腹痛頻率、腹痛嚴(yán)重程度、排便滿意度、對(duì)生活的干擾程度，≤75 分為正常，76～175 分為輕度，176～300 分為中度，＞300 分為重度[7]。

1.2.2 評(píng)估內(nèi)臟敏感度 應(yīng)用ManoScan360 胃腸動(dòng)力學(xué)檢測(cè)儀（美國(guó)Given 公司）檢測(cè)兩組的初始感覺(jué)閾值、排便閾值和疼痛閾值，用以評(píng)估兩組的客觀內(nèi)臟敏感度。采用內(nèi)臟敏感指數(shù)（VSI）評(píng)估兩組的主觀內(nèi)臟敏感度，評(píng)分范圍為0～75 分，評(píng)分越高提示主觀內(nèi)臟敏感度越高[8]。

1.2.3 檢測(cè)血清5-HT、IL-18、CGRP 水平 采集受試者空腹肘部靜脈血5 mL，3 000 r/min 離心 10 min，保存于-20 ℃冰箱待測(cè)。應(yīng)用ELISA 法檢測(cè)血清5-HT、IL-18、CGRP 水平（試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司），所有標(biāo)本均在24 h內(nèi)完成檢測(cè)。

1.3 各項(xiàng)指標(biāo)的觀察比較

比較兩組的血清5-HT、IL-18、CGRP 水平；比較兩組的初始感覺(jué)閾值、排便閾值、疼痛閾值、VSI 評(píng)分；比較不同癥狀嚴(yán)重程度的IBS-D 患者的血清5-HT、IL-18、CGRP 水平；分析血清5-HT、IL-18、CGRP 水平與IBS-D 患者癥狀嚴(yán)重程度的關(guān)系；分析IBS-D 患者癥狀嚴(yán)重程度的影響因素；分析血清5-HT、IL-18、CGRP 水平與內(nèi)臟敏感度指標(biāo)的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；血清5-HT、IL-18、CGRP 水平與IBS-D 患者癥狀嚴(yán)重程度的關(guān)系采用Spearman 相關(guān)性分析，IBS-D患者癥狀嚴(yán)重程度的影響因素采用多因素logistic回歸分析，血清5-HT、IL-18、CGRP 水平與內(nèi)臟敏感度指標(biāo)的關(guān)系采用Pearson相關(guān)性分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組的血清5-HT、IL-18、CGRP 水平比較

結(jié) 果 顯 示，IBS-D 組 的 血 清5-HT、IL-18 和CGRP 水平均高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。詳見(jiàn)表1。

表1 兩組的血清5-HT、IL-18、CGRP 水平比較（x±s）

2.2 兩組的內(nèi)臟敏感度指標(biāo)比較

結(jié)果顯示，IBS-D 組的初始感覺(jué)閾值、排便閾值和疼痛閾值均低于對(duì)照組，VSI 評(píng)分高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 均＜0.05）。詳見(jiàn)表2。

2.3 不同癥狀嚴(yán)重程度的IBS-D 患者的血清5-HT、IL-18、CGRP 水平比較

比較不同癥狀嚴(yán)重程度的IBS-D 患者的血清5-HT、IL-18、CGRP 水平，結(jié)果均顯示重度＞中度＞輕度，兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 均＜0.05）。詳見(jiàn)表3。

2.4 血清5-HT、IL-18、CGRP 水平與IBS-D 患者癥狀嚴(yán)重程度的相關(guān)性分析

以IBS-D 組的血清5-HT、IL-18 和CGRP 水平為源數(shù)據(jù)，Spearman 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血清5-HT（r＝0.799，P＜0.001）、IL-18（r＝0.512，P＜ 0.001）、CGRP（r＝0.790，P＜0.001）水平與IBS-D 患者癥狀嚴(yán)重程度均呈正相關(guān)。詳見(jiàn)圖1。

表2 兩組的內(nèi)臟敏感度指標(biāo)比較（x±s）

表3 不同癥狀嚴(yán)重程度的IBS-D 患者的血清5-HT、IL-18、CGRP 水平比較（x±s）

圖1 血清5-HT、IL-18、CGRP 水平與IBS-D 患者癥狀嚴(yán)重程度的相關(guān)性分析 A 血清5-HT 水平與癥狀嚴(yán)重程度 B 血清IL-18 水平與癥狀嚴(yán)重程度 C 血清CGRP 水平與癥狀嚴(yán)重程度

2.5 IBS-D 患者癥狀嚴(yán)重程度影響因素的多因素logistic 回歸分析

采用多因素logistic 回歸法分析IBS-D 患者癥狀嚴(yán)重程度的影響因素。將癥狀嚴(yán)重程度作為因變量（輕度＝1，中度＝2，重度＝3），將血清5-HT、血清IL-18、血清CGRP、初始感覺(jué)閾值、排便閾值、疼痛閾值、VSI 評(píng)分作為自變量（各項(xiàng)指標(biāo)賦值均為低于IBS-D 組均值賦值1，高于IBS-D 組均值賦值2），納入多因素logistic 回歸模型，分析結(jié)果顯示血清5-HT、IL-18、CGRP 水平和VSI 評(píng)分是IBS-D 患者癥狀嚴(yán)重程度的危險(xiǎn)因素，初始感覺(jué)閾值、排便閾值、疼痛閾值是IBS-D 患者癥狀嚴(yán)重程度的保護(hù)因素（P 均＜0.05）。詳見(jiàn)表4。

表4 IBS-D 患者癥狀嚴(yán)重程度影響因素的多因素logistic 回歸分析

2.6 血清5-HT、IL-18、CGRP 水平與內(nèi)臟敏感度指標(biāo)的相關(guān)性分析

血清5-HT、IL-18、CGRP 水平與內(nèi)臟敏感度指標(biāo)的關(guān)系采用Pearson 相關(guān)性分析。以IBS-D 組血清5-HT、血清IL-18、血清CGRP、初始感覺(jué)閾值、排便閾值、疼痛閾值、VSI 評(píng)分為源數(shù)據(jù)，分析結(jié)果顯示，血清5-HT、IL-18、CGRP 水平與初始感覺(jué)閾值、排便閾值、疼痛閾值呈負(fù)相關(guān)，血清5-HT、IL-18、CGRP 水平與VSI 評(píng)分呈正相關(guān)（P 均＜0.05）。詳見(jiàn)表5。

表5 血清5-HT、IL-18、CGRP 水平與內(nèi)臟敏感度指標(biāo)的相關(guān)性分析

3 討論

5-HT 由腸黏膜基底部的腸嗜鉻細(xì)胞產(chǎn)生，是腦腸軸的重要遞質(zhì)[9]。本研究結(jié)果顯示，IBS-D 組的血清5-HT 水平高于對(duì)照組，這與孫羽中等[10]的研究結(jié)果相符。本研究還發(fā)現(xiàn)血清5-HT 水平隨著IBS-D 患者癥狀嚴(yán)重程度增加而升高，提示5-HT水平與IBS-D 相關(guān)，且與癥狀嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。當(dāng)機(jī)體胃腸道存在炎性反應(yīng)等刺激時(shí)，5-HT 可直接參與腦腸軸的化學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，并能與腸黏膜層、黏膜下層或肌間神經(jīng)叢的受體結(jié)合，影響胃腸道動(dòng)力和內(nèi)臟敏感度。IBS-D 患者的內(nèi)臟傳入神經(jīng)和腸神經(jīng)系統(tǒng)的敏感度增高，激活了相關(guān)神經(jīng)活性物質(zhì)，使5-HT 的合成增加；大量生成的5-HT 與腸黏膜、肌間神經(jīng)叢受體結(jié)合后，可導(dǎo)致胃腸道運(yùn)動(dòng)增強(qiáng)、敏感度增高，這樣形成惡性循環(huán)，從而參與了IBS-D 的發(fā)病及進(jìn)展[11]。內(nèi)臟高敏感是IBS-D的重要病理、生理基礎(chǔ)，初始感覺(jué)閾值、排便閾值和疼痛閾值降低可使IBS-D 患者頻繁產(chǎn)生排便、腹痛等感覺(jué)，并可使排便次數(shù)增加。本研究還發(fā)現(xiàn)，血清5-HT 水平與初始感覺(jué)閾值、排便閾值、疼痛閾值呈負(fù)相關(guān)，與VSI 評(píng)分呈正相關(guān)，表明血清5-HT 水平與IBS-D 患者的內(nèi)臟高敏感有關(guān)。血清5-HT 水平過(guò)高時(shí)，可通過(guò)調(diào)節(jié)γ-氨基丁酸、多巴胺等產(chǎn)生興奮性毒性作用，從而增高內(nèi)臟敏感度，加重臨床癥狀[12]。

IL-18 主要由單核巨噬細(xì)胞、抗原遞呈細(xì)胞分泌，可調(diào)節(jié)機(jī)體的適應(yīng)性免疫和固有免疫[13]。本研究結(jié)果顯示，IBS-D 組的血清IL-18 水平高于對(duì)照組，且輕度、中度、重度癥狀患者的血清IL-18水平依次升高，提示其與IBS-D 患者癥狀嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。趙斌等[14]的研究顯示，IBS 患者的血清IL-18 水平升高，與本研究結(jié)果相符。本研究還發(fā)現(xiàn)，血清IL-18 水平與初始感覺(jué)閾值、排便閾值、疼痛閾值呈負(fù)相關(guān)，與VSI 評(píng)分呈正相關(guān)，提示血清IL-18 水平與內(nèi)臟高敏感有關(guān)。IL-18 可使腸道益生菌減少、致病菌增多，從而破壞腸黏膜屏障功能，使腸黏膜通透性增高，從而引發(fā)腸黏膜炎性反應(yīng)，參與IBS-D 發(fā)?。荒c黏膜炎性反應(yīng)可進(jìn)一步激活疼痛感覺(jué)通路，同時(shí)持續(xù)增加的IL-18能介導(dǎo)促炎因子的產(chǎn)生，引起腸道感覺(jué)和運(yùn)動(dòng)功能改變，從而增高內(nèi)臟敏感度，加重IBS-D 的病情。由此可見(jiàn)，抑制IL-18 的合成和分泌可能有助于緩解IBS-D 患者的腸黏膜炎性反應(yīng)，從而改善病情，IL-18 有望成為IBS-D 治療的一個(gè)靶點(diǎn)。

CGRP 在感覺(jué)神經(jīng)元胞體、胃腸道壁內(nèi)神經(jīng)叢中廣泛存在，IBS-D 患者的CGRP 水平升高，經(jīng)對(duì)癥治療后降低[15]。本研究結(jié)果顯示，IBS-D 組的血清CGRP 水平較對(duì)照組升高，且與癥狀嚴(yán)重程度有關(guān)，提示CGRP 參與了IBS-D 的發(fā)病與病情進(jìn)展。CGRP 可參與腸黏膜肥大細(xì)胞的募集，可介導(dǎo)和促進(jìn)腸黏膜炎性反應(yīng)，且CGRP 是一種促炎性感覺(jué)神經(jīng)肽，其由腸道感覺(jué)神經(jīng)釋放，可造成神經(jīng)源性炎性反應(yīng)，從而損傷腸黏膜，參與IBS-D 的發(fā)病[16]。本研究還發(fā)現(xiàn)，血清CGRP 水平與初始感覺(jué)閾值、排便閾值、疼痛閾值呈負(fù)相關(guān)，與VSI 評(píng)分呈正相關(guān)，說(shuō)明血清CGRP 水平越高則IBS-D 患者的內(nèi)臟敏感度越高。CGRP 通過(guò)激活細(xì)胞膜上的受體調(diào)控神經(jīng)系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)的功能，其活化腸黏膜肥大細(xì)胞的作用可能是導(dǎo)致內(nèi)臟敏感度增高的重要機(jī)制。在直腸、乙狀結(jié)腸、末端回腸部位的腸黏膜中，肥大細(xì)胞與神經(jīng)纖維緊鄰，可直接進(jìn)行溝通，位于神經(jīng)、淋巴、血管附近的肥大細(xì)胞是一種理想的抗原感受器，肥大細(xì)胞識(shí)別抗原后將信號(hào)傳輸至神經(jīng)系統(tǒng)，成為神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)的重要組成部分，信息傳輸至神經(jīng)中樞后，可引發(fā)腸道功能紊亂、腸道運(yùn)動(dòng)和痛覺(jué)閾值異常，導(dǎo)致內(nèi)臟敏感度增 高[17-18]。

綜上所述，IBS-D 患者的血清5-HT、IL-18 和CGRP 水平升高，并且其與癥狀嚴(yán)重程度、內(nèi)臟敏感度有關(guān)，有望成為評(píng)估IBS-D 患者癥狀嚴(yán)重程度的指標(biāo)及改善內(nèi)臟敏感度的靶點(diǎn)，為臨床診療提供參考。