福建省閩西地區(qū)乙肝病毒基因分型與臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析

盧志華 張洪彬 黃文濱 張滿娥 鄧文華 鄧巧芳

乙型肝炎（又稱乙肝），是因?yàn)橐腋尾《舅鶎?dǎo)致具有著極大危害性的一類病毒性肝炎，在中國(guó)乙型肝炎患病率較高。乙肝肝硬化是一種因多種病因反復(fù)發(fā)作引起的肝臟彌漫性損害，主要表現(xiàn)出肝功能減退、門(mén)靜脈高壓、全身性系統(tǒng)惡心、嘔吐等癥狀，臨床目前多使用抗病毒性藥物治療乙肝肝硬化失代償患者，以此阻斷肝硬化進(jìn)程，緩解患者癥狀。乙肝病毒基因（即HBV-DNA）是主要判斷乙肝病毒是否存在復(fù)制的“黃金標(biāo)準(zhǔn)”。依據(jù)乙肝病毒復(fù)制過(guò)程里核苷酸堿基錯(cuò)誤配對(duì)的差異性，可分成8種基因型，其分別使用A～H進(jìn)行表示。據(jù)相關(guān)研究數(shù)據(jù)顯示，對(duì)乙肝患者的不同臨床特點(diǎn)給予研究，對(duì)HBV的治療以及評(píng)估有著重要意義[1-2]。HBV感染的臨床轉(zhuǎn)歸不僅與患者年齡和免疫力有關(guān)，而且也與病毒株的基因型密切相關(guān)，鑒于此，文章將分析福建閩西地區(qū)乙肝病毒基因分型與臨床指標(biāo)的相關(guān)性，文章選擇2019年2月—2020年2月于本院就診的300例HBV感染者的血清標(biāo)本作為研究對(duì)象，通過(guò)HBV基因分型的研究，可以了解基因型的地區(qū)分布特點(diǎn)以及在人群中的變異和進(jìn)化趨勢(shì)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2019年2月—2020年2月于本院就診的300例HBV感染者的血清標(biāo)本數(shù)據(jù)資料進(jìn)行整合分析，數(shù)據(jù)分析結(jié)果歸入本次研究數(shù)據(jù)庫(kù)。300例感染者，B型151例，男性111例，女性40例，年齡12～75歲，平均（38.12±2.41）歲；C型87例，男性65例，女性22例，年齡12～74歲，平均（37.52±2.19）歲；非B非C型62例，男性49例，女性13例，年齡12～76歲，平均（38.21±2.94）歲。所有患者均同意參與本次研究調(diào)查，并均簽署知情同意書(shū)，并征得院倫理委員會(huì)同意并批準(zhǔn)，所有感染者均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)2015年病毒性肝炎會(huì)議制定的標(biāo)準(zhǔn)[3]，原發(fā)性肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范（2011年版）》[3]。所有病例均排除甲、丙、戊型肝炎病毒陽(yáng)性。

1.2 檢測(cè)方法

采用熒光定量 PCR測(cè)定300例分類感染人群的HBV-DNA含量和基因芯片反向斑點(diǎn)雜交技術(shù)檢測(cè)乙肝病毒基因分型，熒光定量PCR檢測(cè)HBV-DNA定量檢測(cè)采用達(dá)安公司試劑盒，具體操作按說(shuō)明書(shū)。基因芯片反向斑點(diǎn)雜交檢測(cè)采用深圳亞能生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，具體操作按說(shuō)明書(shū)[4]。

乙型肝炎病毒去氧核糖核酸是提取的乙型肝炎病毒試劑盒和擴(kuò)增的讀出時(shí)間飯后內(nèi)電阻熒光法。操作步驟按照說(shuō)明書(shū)執(zhí)行，并提供負(fù)控制和正調(diào)節(jié)[5]。

采用熒光定量乙型肝炎病毒內(nèi)電阻法測(cè)定了300例分類感染人群的HBV-DNA含量。所有操作都嚴(yán)格按照熒光定量試驗(yàn)指南進(jìn)行。用拷貝數(shù)表達(dá)HBV-DNA載量。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)

目的觀察乙型肝炎病毒（HBV，Hepatitis B）感染者HBV基因型及其與HBV-DNA、HBsAg、HBeAg的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包，計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，行χ2檢驗(yàn)或Fisher精確檢驗(yàn)法，計(jì)量資料以（±s）表示，行t檢驗(yàn)，P＜0.05則差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 基因分型測(cè)定結(jié)果

福建省閩西地區(qū)300例感染者基因分布是：B型151例，C型87例，非B非C型62例。

2.2 基因分型與乙肝病毒 DNA 定量測(cè)定

HBV-DNA定量與HBV基因分型有一定的相關(guān)性。結(jié)果表明，福建省閩西地區(qū)C型與B型HBV-DNA定量檢測(cè)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義t＝2.517，P＜0.012。C型HBV-DNA定量檢測(cè)均值高于B型。見(jiàn)表1。

表1 乙肝病毒DNA定量測(cè)定（IU/mL， ±s）

表1 乙肝病毒DNA定量測(cè)定（IU/mL， ±s）

2.3 基因分型與乙肝表面抗原定量測(cè)定

在兩對(duì)乙型肝炎病毒半定量檢測(cè)項(xiàng)目中，HBsAg和HBeAg與HBV基因分型高度相關(guān)。結(jié)果表明，C型乙型肝炎表面抗原定量值高于B型肝炎，χ2=6.014，P＜0.014。見(jiàn)表2。

表2 基因分型與乙肝表面抗原[例（%）]

2.4 基因分型與乙肝 E 抗原定量測(cè)定

對(duì)300例感染者乙型肝炎E抗原定量測(cè)定值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果表明：福建省閩西地區(qū)C型患者乙型肝炎E抗原定量測(cè)定值高于B型感染者，t=157.052，P＜0.001。見(jiàn)表3。

表3 乙肝E抗原定量測(cè)定（IU/mL， ±s）

表3 乙肝E抗原定量測(cè)定（IU/mL， ±s）

2.5 乙肝E抗原定量陽(yáng)性率

C型肝炎E抗原陽(yáng)性率高于B型肝炎，χ2=23.985，P＜0.001。見(jiàn)表4。

表4 乙肝E抗原定量陽(yáng)性率[例（%）]

3 討論

乙型肝炎病毒其是一種嗜肝DNA病毒（hepadnaviridae），就目前研究現(xiàn)狀來(lái)看，乙型肝炎病毒是能夠感染人類DNA最小的病毒之一，其能夠?qū)е氯祟惣毙曰蚵圆《拘愿窝?，且能夠發(fā)展為肝硬化，其與肝癌疾病的病發(fā)有密切聯(lián)系，繼而能夠嚴(yán)重威脅人們的生命健康。全球78億人口中約有25億人感染過(guò)乙型肝炎病毒，現(xiàn)今依舊有近3億慢性乙型肝炎感染者，全球每年約有80萬(wàn)人死于與HBV感染相關(guān)的肝臟疾病。據(jù)相關(guān)研究數(shù)據(jù)顯示，2019年中國(guó)人口乙肝表面抗原陽(yáng)性率約為7.5%，乙型肝炎病毒攜帶者約有9 800萬(wàn)人。由此，乙型肝炎病毒問(wèn)題仍舊是對(duì)全球國(guó)家安全的威脅。

乙型肝炎病毒是最主要導(dǎo)致乙肝的病原菌，在人體表面能長(zhǎng)時(shí)間生存，并可影響到未注射乙肝病毒者的易傳播群，其傳播源一般為：急性乙肝患者、緩慢乙肝患者，以及乙型肝炎病毒攜帶者。一般的傳染性路徑分為：母嬰傳染、透過(guò)血漿和血漿制品傳染、醫(yī)源性傳染，以及親密接觸傳染。HBV感染者，不管在潛伏時(shí)間、急性期或者慢性期，其血漿中均存在著感染性。不同地區(qū)的乙型肝炎病毒感染情況大不相同，感染情況主要取決于當(dāng)?shù)氐貐^(qū)人們的生活習(xí)慣、免疫水平以及主要傳播途徑等相關(guān)影響因素。由于目前全世界執(zhí)行乙型肝炎病毒疫苗免費(fèi)接種方針以及地區(qū)人口流動(dòng)等相關(guān)因素的影響，全世界乙型肝炎病毒流行病學(xué)有所變化。就現(xiàn)狀而言，我國(guó)防止乙型肝炎病毒的主要方法是免費(fèi)注射疫苗，以提升新生兒乙肝疫苗的接種率。從1992年開(kāi)始我國(guó)就于各省市范圍內(nèi)廣泛推行乙型肝炎病毒疫苗的接種工作，在2002年時(shí)我國(guó)將乙型肝炎病毒疫苗納入計(jì)劃免疫中，目前全國(guó)乙型肝炎病毒疫苗接種率＞98%。從2012年開(kāi)始，我國(guó)對(duì)乙肝表面抗原陽(yáng)性的準(zhǔn)父母所生下的新生兒采取乙肝免疫球蛋白聯(lián)合乙肝疫苗注射，乙型肝炎病毒母嬰傳播途徑的阻斷率大大提升。WHO于2016年提出了“2030年消除病毒性肝炎公共衛(wèi)生威脅的目標(biāo)”，其中明確提到2030年中國(guó)新發(fā)乙型肝炎病毒感染者下降90%，病死率下降65%。我國(guó)目前7 800萬(wàn)左右的乙型肝炎病毒攜帶者中，僅有0.2%的攜帶者進(jìn)行了有效治療，離實(shí)現(xiàn)目標(biāo)依舊有著很大的距離。除此之外，在治療方面全世界的慢性乙型肝炎患者僅有8.6%及時(shí)接受抗病毒治療，近90.0%的慢性乙型肝炎患者仍舊未能得到有效治療，在我國(guó)慢性乙型肝炎患者及時(shí)接受抗病毒治療的占比為10.0%。

不同國(guó)家的乙型肝炎病毒感染情況大不相同，其中，不同地區(qū)乙肝病毒基因型有顯著差異性，不同國(guó)家和地區(qū)乙肝患病率的差異除了生活習(xí)慣、免疫水平以及主要傳播途徑等相關(guān)影響因素之外，還與乙肝病毒的生物基因型、血清亞型和基因變異有顯著關(guān)系。不同地理區(qū)域的乙型肝炎病毒基因型不同，不同種族間乙型肝炎病毒的流行及傳播方式也不同。我國(guó)乙型肝炎病毒主要流行于A、B、C、D型肝炎，分別占1.5%、40.0%、51.0%和8.4%。不同省區(qū)的基因型也有很大差異。北部以C型為主，占81.6%；南部以B型為主，C型較少[6-7]。

本次研究中福建省閩西地區(qū)300例感染者基因分布是：B型151（50.33%）例，C型87（29.00%）例，非B非C型62（20.67%）例。統(tǒng)計(jì)結(jié)果與我國(guó)南方地區(qū)常見(jiàn)的乙型肝炎病毒感染情況一致。

不同基因型的乙型肝炎病毒具有不同的致病性和流行特征，因此了解乙型肝炎病毒基因型具有重要的臨床意義。結(jié)果表明，杭州地區(qū)C型乙型肝炎病毒DNA定量值高于B型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示C型乙型肝炎病毒DNA復(fù)制更為活躍。然而，乙型肝炎病毒引起的免疫應(yīng)答和血清中乙型肝炎病毒的高滴度是危險(xiǎn)因素之一。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，C型患者HBV-DNA水平高于B型患者，這可能是由于長(zhǎng)期存在高HBV-DNA復(fù)制水平，導(dǎo)致C型患者肝臟炎癥活動(dòng)更為嚴(yán)重，發(fā)生肝硬化所[8-9]。本研究報(bào)告，乙型和丙型感染者血清HBV-DNA差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。盡管HBV復(fù)制狀態(tài)與其基因型的關(guān)系仍存在爭(zhēng)議，但筆者認(rèn)為C型感染患者的乙肝病毒反復(fù)進(jìn)入免疫清除期，造成肝組織持續(xù)損傷，預(yù)后比B型差。

據(jù)相關(guān)報(bào)道結(jié)果顯示，乙型肝炎病毒相較于丙型肝炎病毒（HCV）更加簡(jiǎn)單的通過(guò)前C區(qū)基因突變引誘e抗原轉(zhuǎn)化，據(jù)本次研究結(jié)果顯示：丙型肝炎表面抗原定量值高于乙型肝炎（P＜0.05），丙型肝炎E抗原定量值高于乙型肝炎，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）乙型肝炎病毒復(fù)制活躍，易形成持久性病毒血癥，但不容易出現(xiàn)e系統(tǒng)的血清轉(zhuǎn)化，據(jù)相關(guān)報(bào)道結(jié)果顯示，有83%的肝癌患者出現(xiàn)甲胎蛋白水平升高，肝硬化患者的甲胎蛋白水平也出現(xiàn)不同程度的升高。據(jù)相關(guān)報(bào)道結(jié)果顯示，乙型肝炎病毒感染者相較于慢性乙型肝炎患者更加易發(fā)展成嚴(yán)重肝病，例如肝硬化，且疾病發(fā)展程度更為嚴(yán)重。與肝癌的發(fā)生關(guān)系更密切[10]。乙型肝炎病毒基因分型結(jié)果與AFP定量值是否存在相關(guān)性，有待進(jìn)一步的統(tǒng)計(jì)學(xué)研究[11]。大量研究表明，抗HBV藥物治療尤其是干擾素治療的臨床療效直接關(guān)系到HBV-DNA的定量水平，低HBV-DNA載量可使干擾素治療有效，高HBV-DNA載量可導(dǎo)致干擾素治療效果差[12-13]。

本研究分析了福建省閩西地區(qū)乙型肝炎病毒基因型的分布，以及乙型肝炎病毒基因型與HBV-DNA定量、HBV雙半定量和AFP定量指標(biāo)的關(guān)系。由于不同乙型肝炎病毒基因型的地理分布、分子生物學(xué)特征和臨床轉(zhuǎn)歸不同，深入研究乙型肝炎病毒基因型對(duì)于進(jìn)一步闡明乙型肝炎病毒的分子流行病學(xué)特征，確定傳播關(guān)系，具有重要意義，明確感染源，闡明發(fā)病機(jī)制及臨床治療效果。通過(guò)與其他研究進(jìn)行對(duì)比，本研究數(shù)據(jù)結(jié)果與相關(guān)參考文獻(xiàn)相符[14]。

總而言之，通過(guò)對(duì)福建省閩西地區(qū)乙肝病毒基因分型的研究，對(duì)福建省閩西地區(qū)乙肝防治工作有著重要作用，并未乙肝病毒的精準(zhǔn)抗病毒治療提供臨床研究資料，由于本次研究樣本不多，需擴(kuò)大樣本病例數(shù)，深入研究福建省閩西地區(qū)乙肝病毒基因分型情況。