乳源肽的抗衰老功效研究

欒媛媛，謝雨佳，李政，王娟，彭小杰，李明逸，肖珊珊，曾星星，張少輝,

（1.上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院，上海 200240；2.浙江輝肽生命健康科技有限公司，浙江 溫州 325800）

0 引言

人體的皮膚老化分為內(nèi)在老化和外在老化兩種形式。內(nèi)在老化即隨著時(shí)間流逝人體正常的老化現(xiàn)象；外在老化則是由于一些外部因素導(dǎo)致的老化，其中紫外線(UV,Ultraviolet)照射被認(rèn)為是誘發(fā)皮膚損傷和老化的主要外部環(huán)境因素，占外在老化的80%[1]。UV根據(jù)波長(zhǎng)范圍的不同可以劃分為3種：長(zhǎng)波紫外UVA（320～400 nm）、中波紫外UVB（290～320 nm）和短波UVC（100～290 nm）[2]。其中UVB造成的輻射最強(qiáng)，能夠穿透表皮到達(dá)真皮細(xì)胞，導(dǎo)致DNA的損傷[3]；誘導(dǎo)ROS的產(chǎn)生和促炎因子的增加[4]。UVB照射的皮膚內(nèi)ROS的含量會(huì)出現(xiàn)顯著升高，從而導(dǎo)致基質(zhì)金屬蛋白酶含量的升高，進(jìn)一步導(dǎo)致I型膠原蛋白的降解[5]。

近幾年有研究表明某些植物提取物具有抗光老化的效果，如當(dāng)歸根提取物可通過(guò)抑制MAPK/AP-1通路磷酸化和誘導(dǎo)TGF-β的激活，抑制基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的活性，從而促進(jìn)膠原蛋白合成[6]；佛手柑多酚組分可通過(guò)促炎細(xì)胞因子IL-1β的調(diào)節(jié)恢復(fù)細(xì)胞活力，增強(qiáng)端粒酶活性[7]，以及茶葉提取物[8]、廢咖啡渣[9]、大豆肽[10]和海洋生物中提取的膠原蛋白肽[11]均具有抗光老化的效果。而對(duì)于乳源多肽的研究多集中于抗癌[12]、抗氧化[13]、降血壓[14-15]、降血糖[16]等。

本文旨在探討牛乳蛋白經(jīng)酶解后產(chǎn)生的多肽，其在經(jīng)UVB照射后的人皮膚成纖維細(xì)胞中的抗光老化作用。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

人皮膚成纖維細(xì)胞(human foreskin fibroblasts-1,HFF-1)，中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)；乳源肽，浙江輝肽生命健康科技有限公司；96孔和6孔細(xì)胞培養(yǎng)板，血球計(jì)數(shù)板等。

DMEM高糖不完全培養(yǎng)基和胎牛血清，美國(guó)Sigma公司；青霉素-鏈霉素溶液(100×)、細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒，上海碧云天生物技術(shù)有限公司；胰酶細(xì)胞消化液（含酚紅）和1×PBS緩沖液，Biosharp；MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒、活性氧ROS檢測(cè)試劑盒，南京凱基生物生物技術(shù)股份有限公司；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒 (PrimeScriptTMRT reagent Kit)、SYBR green法實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒(TB Green Premix Ex TaqTM)，日本Takara公司。

1.2 儀器與設(shè)備

倒置顯微鏡，日本尼康公司；離心機(jī)，中國(guó)醫(yī)療器械（上海）股份有限公司；GI36T高壓滅菌鍋，廈門至微儀器公司；BJ-2CD超凈工作臺(tái)，上海屹明凈化設(shè)備有限公司；Froma 700低溫冰箱，賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；多功能酶標(biāo)儀，瑞士帝肯公司；二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱，德國(guó)MEMMERT公司；NanoDrop超微量分光光度儀，賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；Thermal熱循環(huán)儀，美國(guó)Applied Biosystems公司；PCR儀，美國(guó)Bio-Rad公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)

將HFF-1細(xì)胞用含1%100×雙抗、15%FBS的DMEM高糖培養(yǎng)液置于二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：37℃，二氧化碳5%，濕度95%。將凍存細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)2～3 d后，置于倒置顯微鏡下觀察，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到80%～90%聚合度時(shí)，用PBS清洗，胰酶消化后進(jìn)行傳代培養(yǎng)，傳代后的細(xì)胞接種于96孔板或6孔板，用于下一步實(shí)驗(yàn)。

1.3.2 細(xì)胞活力測(cè)定和UVB照射

本實(shí)驗(yàn)主要探討不同濃度的乳源肽對(duì)細(xì)胞的毒性作用。將傳代后的HFF-1細(xì)胞以1×104/mL的密度接種于96孔板（100μL/孔），經(jīng)24 h培養(yǎng)后，將不同濃度（0.05、0.08、0.10、0.12、0.50、1.00、2.50、5.00 mg/mL）的乳源肽添加到96孔板中，設(shè)為實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組添加15%FBS的DMEM高糖培養(yǎng)液，繼續(xù)在37℃培養(yǎng)48 h。根據(jù)MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑使用方法，將5×MTT溶液稀釋成1×MTT溶液，以50μL/孔的量添加到96孔板中，于37℃恒溫培養(yǎng)箱中避光孵育4 h，吸棄上清液，每孔加入150μL DMSO溶液，震蕩使甲臜充分溶解后，迅速用酶標(biāo)儀于490 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)OD值，以對(duì)照組為基礎(chǔ)計(jì)算細(xì)胞活力。

為探討UVB對(duì)HFF-1細(xì)胞造成的亞細(xì)胞毒性的輻照劑量，采用不同紫外輻照劑量（1.2、2.4、3.6、4.8 J/cm2）對(duì)HFF-1細(xì)胞進(jìn)行照射，輻照劑量用紫外輻照計(jì)進(jìn)行測(cè)定，將傳代后的HFF-1細(xì)胞以1×104/mL的密度接種于96孔板（100μL/孔），經(jīng)48 h培養(yǎng)后，吸棄培養(yǎng)液，用PBS緩沖液覆蓋薄薄的一層連續(xù)3次照射，每次間隔12 h，在最后一次照射后24 h測(cè)定細(xì)胞活力。

為探究預(yù)給予不同濃度的乳源多肽對(duì)UVB損傷的HFF-1細(xì)胞活力的修復(fù)作用，將傳代后的HFF-1細(xì)胞以1×104/mL的密度接種于96孔板（100μL/孔），經(jīng)24 h培養(yǎng)后，更換培養(yǎng)液為含有不同濃度（0.08、0.1 mg/mL）的乳源多肽，對(duì)照組為含15%FBS的DMEM培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)24 h后，吸棄培養(yǎng)液，用PBS緩沖液覆蓋薄薄的一層，用3.6 J/cm2的紫外輻照劑量對(duì)細(xì)胞進(jìn)行紫外照射（對(duì)照組避光），照射結(jié)束后，棄掉PBS緩沖液，加入培養(yǎng)液，每次間隔12 h，共照射3次，在最后一次照射結(jié)束后24 h進(jìn)行細(xì)胞活力測(cè)定。每組設(shè)6個(gè)平行。

1.3.3 ROS測(cè)定

在UVB照射后12、24 h時(shí)后分別進(jìn)行ROS的測(cè)定。ROS用2’,7’-dichlorodihydrofluorescein diacetate(DCFH-DA)熒光探針進(jìn)行測(cè)定，將用無(wú)血清培養(yǎng)液稀釋后的DCFH-DA加入到96孔板中，37℃恒溫培養(yǎng)箱孵育20 min，用無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌3次，多功能酶標(biāo)儀測(cè)定熒光強(qiáng)度，激發(fā)波長(zhǎng)488 nm，發(fā)射波長(zhǎng)525 nm。同時(shí)將96孔板中加入MTT，孵育4 h后用酶標(biāo)儀測(cè)定OD值，作為內(nèi)參。每組設(shè)6個(gè)平行。

1.3.4β-半乳糖苷酶測(cè)定

與衰老有關(guān)的胞內(nèi)β-半乳糖苷酶在細(xì)胞衰老時(shí)可表現(xiàn)出高酶活性，為測(cè)定乳源肽的抗衰老情況，在最后一次照射后48 h，吸棄培養(yǎng)液，加入β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定15 min后，用PBS洗滌3次，加入染色工作液，于37℃孵育過(guò)夜，在倒置顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)，每次計(jì)400個(gè)，計(jì)3次。

1.3.5 ELISA測(cè)定

用ELISA方法對(duì)I型膠原蛋白和基質(zhì)金屬蛋白酶-1（MMP-1）的活性進(jìn)行測(cè)定。將細(xì)胞接種于96孔板中，在最后一次照射24 h后使用ELISA試劑盒進(jìn)行活性測(cè)定。

1.3.6 RT-qPCR測(cè)定

在最后一次照射后12 h和24 h分別用RNA提取試劑盒提取RNA，提取的RNA用NanoDrop超微量分光光度儀進(jìn)行濃度及純度測(cè)定，用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行RNA逆轉(zhuǎn)錄（20μL），逆轉(zhuǎn)錄條件為：37℃、15 min；85℃、5 s；4℃。逆轉(zhuǎn)錄后的cDNA根據(jù)試劑盒使用說(shuō)明用PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)分兩步：95℃、30 s(Step 1);95℃、5 s，60℃、30 s，GOTO 39(Step 2)。溶解曲線條件為：95℃，65～95℃，增量0.5℃。每次實(shí)驗(yàn)取3個(gè)平行。1.4 數(shù)據(jù)分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果以實(shí)驗(yàn)平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（SD）的形式表示，用EXCEL，SPSS和GraphPad 9軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，分析結(jié)果顯著性以*：P＜0.05表示。

2 結(jié)果與討論

2.1 細(xì)胞活力測(cè)定和UVB照射

對(duì)細(xì)胞給予不同濃度的乳源肽，來(lái)測(cè)定乳源肽對(duì)細(xì)胞的毒性作用。如圖1所示，與多肽濃度為0 mg/mL的對(duì)照組相比，乳源肽在0.5～2.5 mg/mL的范圍內(nèi)，對(duì)于細(xì)胞增殖均無(wú)明顯的抑制作用，其中0.08 mg/mL和0.1 mg/mL的乳源肽對(duì)細(xì)胞增殖均有顯著性的促進(jìn)作用。這與本實(shí)驗(yàn)室之前乳源肽相關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致[17]，說(shuō)明乳源肽在0.1 mg/mL的添加量以下對(duì)細(xì)胞增殖有較好的促進(jìn)作用，因此選用0.08 mg/mL和0.1 mg/mL的乳源肽進(jìn)行功效實(shí)驗(yàn)。

圖1 乳源肽濃度對(duì)細(xì)胞活力的影響

為確定合適的UVB輻照劑量，對(duì)HFF-1細(xì)胞分別進(jìn)行1.2、2.4、3.6、4.8 J/cm2劑量的照射。24 h后的細(xì)胞活力測(cè)定結(jié)果如圖2所示。結(jié)果表明，當(dāng)紫外輻照計(jì)量達(dá)到3.6 J/cm2時(shí)，對(duì)細(xì)胞增殖有顯著性抑制作用，可顯著降低細(xì)胞活力，而當(dāng)輻照劑量為2.4 J/cm2時(shí)，對(duì)細(xì)胞活力無(wú)顯著性影響。因此，選用3.6 J/cm2的紫外輻照強(qiáng)度用于測(cè)定預(yù)給予乳源肽對(duì)UVB照射后的細(xì)胞活力的影響，選用2.4 J/cm2的紫外輻照強(qiáng)度用于預(yù)給予乳源肽對(duì)UVB損傷細(xì)胞的抗光老化影響研究。

圖2 紫外輻照劑量對(duì)細(xì)胞活力的影響

用3.6 J/cm2的紫外輻照強(qiáng)度測(cè)定預(yù)給予0.08 mg/mL和0.1 mg/mL的乳源肽對(duì)UVB照射后的細(xì)胞活力的影響，同時(shí)選用棕櫚酰五肽-4作為陽(yáng)性對(duì)照。棕櫚酰五肽-4能很好地促進(jìn)膠原蛋白的合成，具有抗皺效果，其商品名為Matrixyl，目前已廣泛的用于抗皺化妝品中[18]。結(jié)果表明，如圖3所示，UVB（3.6 J/cm2）照射后的細(xì)胞較未被照射的細(xì)胞活力均有下降，而預(yù)給予乳源肽和棕櫚酰五肽-4的細(xì)胞相較于陰性對(duì)照組來(lái)說(shuō)，其細(xì)胞活力均有增長(zhǎng)，但都沒(méi)有顯著性差異，說(shuō)明乳源肽對(duì)于UVB照射的細(xì)胞活力無(wú)顯著影響，且會(huì)一定程度的促進(jìn)細(xì)胞活力的增長(zhǎng)。

圖3 預(yù)給予乳源肽對(duì)紫外損傷細(xì)胞的細(xì)胞活力影響

2.2 乳源肽可抑制ROS的生成

炎癥反應(yīng)和ROS的產(chǎn)生是導(dǎo)致光損傷主要原因[19]。ROS的產(chǎn)生會(huì)對(duì)下游多個(gè)信號(hào)通路產(chǎn)生影響，如MAPK信號(hào)通路，TGF-β/SMAD信號(hào)通路等，對(duì)信號(hào)通路中的多種衰老因子，如JNK,p38,NF-kB,TGF-β產(chǎn)生影響。最終導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶的效率降低，抗氧化物質(zhì)的減少，導(dǎo)致DNA損傷的累積，并對(duì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生影響[4,20-21]。研究表明，對(duì)于紫外誘導(dǎo)的小鼠細(xì)胞來(lái)說(shuō)，在紫外照射后1 h內(nèi)會(huì)有明顯的變化，在輻照后25 min內(nèi)ROS含量會(huì)顯著性的增高，25 min后逐漸下降并恢復(fù)到正常水平[5]。

因此，ROS在紫外輻照導(dǎo)致的光老化中發(fā)揮巨大的作用，可用于探究乳源肽對(duì)于抗光老化的效果。如圖4所示，在2.4 J/cm2的亞細(xì)胞毒性劑量下分別測(cè)定了紫外照射后12 h和24 h的ROS產(chǎn)量，結(jié)果表明在紫外照射12 h后，經(jīng)紫外照射后的細(xì)胞內(nèi)ROS呈極顯著的升高(P<0.001)，而預(yù)給予乳源肽組及陽(yáng)性對(duì)照組都呈現(xiàn)極顯著性的降低，其中預(yù)給予0.08 mg/mL的乳源肽相較于0.1 mg/mL的乳源肽添加量效果更為顯著；在紫外照射24 h后，實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)的ROS都逐漸趨于正常生長(zhǎng)的細(xì)胞水平，說(shuō)明對(duì)于紫外照射的細(xì)胞來(lái)說(shuō)，ROS含量會(huì)顯著升高并在24 h后恢復(fù)正常，而預(yù)給予乳源肽的細(xì)胞會(huì)在細(xì)胞接受紫外照射時(shí)起到修復(fù)作用，防止ROS的升高。說(shuō)明在紫外照射前預(yù)先添加乳源肽有助于紫外損傷的細(xì)胞內(nèi)ROS的清除，并降低ROS的產(chǎn)量，有效防止紫外輻照所導(dǎo)致的氧化損傷。

圖4 乳源肽對(duì)紫外誘導(dǎo)的ROS產(chǎn)量的影響

2.3 乳源肽可抑制紫外照射的細(xì)胞中β-半乳糖苷酶活性

正常體細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中在經(jīng)過(guò)有限數(shù)量的細(xì)胞分裂后，即進(jìn)入不可逆的衰老階段[22]。而β-半乳糖苷酶是測(cè)定衰老細(xì)胞的常見指標(biāo)，其主要以pH為6.0時(shí)細(xì)胞內(nèi)的β-半乳糖苷酶活性為衰老指標(biāo)，細(xì)胞老化越嚴(yán)重，β-半乳糖苷酶活性就越高[23]。β-半乳糖苷酶試劑盒可使衰老細(xì)胞呈深藍(lán)色，即陽(yáng)性，在普通光學(xué)顯微鏡下即可觀察。該指標(biāo)在多個(gè)研究中被用于判斷細(xì)胞衰老情況[24-25]。

如圖5所示，乳源肽組可明顯抑制紫外照射后的細(xì)胞衰老，對(duì)于紫外照射的細(xì)胞，其β-半乳糖苷酶陽(yáng)性細(xì)胞的比例是對(duì)照組的3.29倍，而乳源肽組和陽(yáng)性組的陽(yáng)性細(xì)胞都出現(xiàn)了顯著性的降低，說(shuō)明預(yù)給予乳源肽可能會(huì)有效延緩紫外照射所導(dǎo)致的細(xì)胞衰老現(xiàn)象。

圖5 β-半乳糖苷酶活性及陽(yáng)性細(xì)胞比例

2.4 預(yù)給予乳源肽可抑制MMP-1的分泌，促進(jìn)I型膠原蛋白的合成

細(xì)胞經(jīng)一定程度的紫外照射后，會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞損傷，而損傷累積到一定程度時(shí)，便會(huì)出現(xiàn)衰老現(xiàn)象，產(chǎn)生一系列衰老相關(guān)的分泌表型（SASP,senescenceassociated secretory phenotype），包括一些細(xì)胞因子，生長(zhǎng)因子和基質(zhì)金屬蛋白酶等[26]。同時(shí)，早有研究表明紫外輻照引起的光老化會(huì)導(dǎo)致膠原蛋白、彈性蛋白等胞外基質(zhì)的減少，從而產(chǎn)生皺紋，阻礙傷口的愈合[27]。

為研究乳源肽的抗光老化效果，用ELISA方法測(cè)定了不同處理方式的細(xì)胞其MMP-1和I型膠原蛋白的分泌量。如圖6(a)，在紫外照射后24 h，經(jīng)紫外照射的細(xì)胞（NC）相較于未受紫外照射的對(duì)照組細(xì)胞（C），其MMP-1的分泌量有極顯著的升高，是對(duì)照組的1.76倍，而預(yù)給予不同濃度的乳源肽及陽(yáng)性對(duì)照組相較于陰性對(duì)照組都有極顯著的下降，預(yù)給予0.08 mg/mL和0.1 mg/mL的乳源肽組分別下降了30.38%和27.42%。而圖6(b)的結(jié)果顯示，細(xì)胞經(jīng)紫外照射后，其I型膠原蛋白的分泌量會(huì)顯著下降，而實(shí)驗(yàn)組和陽(yáng)性對(duì)照組都很好地抑制了I型膠原蛋白的降解，相較于陰性對(duì)照組其分泌量有極顯著的升高。圖6的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，紫外照射會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)MMP-1的分泌增多，從而導(dǎo)致I型膠原蛋白的降解，而乳源肽能夠很好地抑制MMP-1的分泌，從而防止I型膠原蛋白的降解。

圖6 乳源肽對(duì)紫外誘導(dǎo)的細(xì)胞中MMP-1及I型膠原蛋白分泌量的影響

為進(jìn)一步驗(yàn)證預(yù)給予乳源肽抗光老化的效果及對(duì)MMP-1的調(diào)控，分別提取了最后一次UVB照射后12、24 h細(xì)胞內(nèi)的RNA進(jìn)行RT-qPCR實(shí)驗(yàn)以測(cè)定細(xì)胞內(nèi)MMP-1及I型膠原蛋白的mRNA表達(dá)情況。如圖7(a)所示，紫外照射后的細(xì)胞在照射后24 h內(nèi)MMP-1的表達(dá)量均呈現(xiàn)極顯著的升高，其中在照射后12 h的表達(dá)量是照射后24 h的1.5倍，而經(jīng)乳源肽處理后的細(xì)胞與陰性對(duì)照組相比顯著的抑制了MMP-1的表達(dá)。相應(yīng)的，圖7(b)的結(jié)果顯示，經(jīng)紫外照射的細(xì)胞在照射后24 h I型膠原蛋白的mRNA表達(dá)量出現(xiàn)顯著性下降，而經(jīng)乳源肽處理后的細(xì)胞在24 h內(nèi)I型膠原蛋白的mRNA表達(dá)量均出現(xiàn)顯著性的升高，且出現(xiàn)表達(dá)量隨時(shí)間的增長(zhǎng)而降低的趨勢(shì)。說(shuō)明乳源肽通過(guò)調(diào)控MMP-1和I型膠原蛋白mRNA的表達(dá)來(lái)控制其分泌，可抑制紫外照射細(xì)胞中MMP-1的表達(dá)，并且促進(jìn)I型膠原蛋白的表達(dá)。而乳源肽對(duì)MMP-1基因的下調(diào)可能與ROS含量的降低有關(guān)。

圖7 乳源肽對(duì)紫外誘導(dǎo)的細(xì)胞中MMP-1及I型膠原蛋白mRNA表達(dá)量的影響

之前研究表明，紫外引發(fā)的DNA氧化損傷會(huì)導(dǎo)致NF-κB的激活[28]。而很多細(xì)胞因子其基因的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子部位都存在可與NF-κB結(jié)合的位點(diǎn)，NFκB的激活會(huì)導(dǎo)致炎癥反應(yīng)與光老化，其中涉及炎癥因子TNF-α,IL-6 and IL-10與光老化相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2 and MMP-9的調(diào)控[29]。同時(shí)，研究表明在成纖維細(xì)胞與U937巨噬細(xì)胞的共培養(yǎng)體系中，成纖維細(xì)胞分泌的IL-6細(xì)胞因子會(huì)對(duì)U937巨噬細(xì)胞分泌MMP-1產(chǎn)生影響[30]。由于紫外照射會(huì)誘導(dǎo)炎癥因子，如IL-6的表達(dá)，IL-6會(huì)繼而誘導(dǎo)MMP-1的表達(dá)[31]。同時(shí)，對(duì)于紫外損傷的修復(fù)也有可能通過(guò)對(duì)損傷細(xì)胞DNA的修復(fù)來(lái)調(diào)控MMP-1的表達(dá)以及防止MAPKs的磷酸化[32]。另外紫外誘導(dǎo)的ROS的產(chǎn)生，會(huì)促進(jìn)MAPK信號(hào)通路的磷酸化，繼而誘導(dǎo)下游激活蛋白（AP-1）的生成，AP-1能通過(guò)上調(diào)MMP-1的表達(dá)來(lái)降低I型膠原蛋白的含量，并且抑制轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子TGF-β1的表達(dá)[33]，而TGF-β1可促進(jìn)膠原蛋白的合成[34]。因此本實(shí)驗(yàn)中乳源肽對(duì)MMP-1調(diào)節(jié)可能是ROS及炎癥因子調(diào)控的結(jié)果，對(duì)I型膠原蛋白的調(diào)節(jié)可能與TGF-β1有關(guān)。

3 結(jié)束語(yǔ)

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)HFF-1細(xì)胞探究了預(yù)給予乳源肽對(duì)紫外損傷細(xì)胞的抗光老化效果。結(jié)果表明，在細(xì)胞經(jīng)多次紫外照射后，會(huì)產(chǎn)生衰老現(xiàn)象，添加一定濃度的乳源肽會(huì)有效防止細(xì)胞的老化，0.08 mg/mL和0.1 mg/mL的乳源肽均能有效抑制紫外照射細(xì)胞內(nèi)ROS的升高，通過(guò)控制MMP-1的基因表達(dá)來(lái)抑制MMP-1的分泌，從而減少對(duì)膠原蛋白的降解，同時(shí)乳源肽可促進(jìn)I型膠原蛋白的表達(dá)和分泌，與未處理過(guò)的紫外損傷細(xì)胞相比，其含量顯著升高。本研究為乳源肽在化妝品行業(yè)的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)，而其相關(guān)的具體機(jī)制通路還有待探究。