不同廠家阿莫西林膠囊聚合物含量的考察及影響因素

＊葉寧 吳愫青

（廣東省珠海市食品藥品檢驗所 廣東 519000）

阿莫西林，又名羥氨芐青霉素，是臨床上一種常用的口服半合成青霉素，屬于廣譜抗生素，通過抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成，引起細(xì)菌迅速溶解破裂，從而起到殺菌消炎的作用，對革蘭陰性菌和陽性菌均有強而迅速的殺滅作用，對鉤端螺旋體亦有殺滅作用?！吨袊幍洹肥蛰d的阿莫西林劑型有片劑、膠囊、顆粒、干混懸劑。阿莫西林膠囊口服易吸收，使用方便，是該品種市面上最主要的劑型，并且起效快，臨床使用廣泛。藥品質(zhì)量安全關(guān)系患者安全、醫(yī)院利益，阿莫西林在臨床應(yīng)用中大約存在5%～6%的不良反應(yīng)發(fā)生率，少數(shù)嚴(yán)重者會導(dǎo)致死亡，因此嚴(yán)格控制阿莫西林膠囊中高分子聚合物的含量有著重要的意義[2-3]。本文通過考察不同區(qū)域藥企阿莫西林膠囊聚合物的含量，為各企業(yè)優(yōu)化工藝流程、嚴(yán)格把關(guān)原輔料的供應(yīng)提供一定的參考，也可臨床安全用藥提供科學(xué)依據(jù)。

1.儀器與試藥

(1)儀器

METTLER-TOLEDOXS205電子分析天平；Elmasomicp P300H超聲波清洗器；Agilent 1260 infinity II高效液相色譜儀；色譜柱：Puxiang G-10 400×10mm凝膠色譜柱。

(2)試藥

青霉素對照品（由中國食品藥品檢定研究院提供；批號：130437-201707，含量：94.1%）磷酸氫二鈉，廣州化學(xué)試劑廠；磷酸二氫鈉，廣州化學(xué)試劑廠；無水碳酸鈉，天津市大茂化學(xué)試劑廠，均為分析純；水為超純水。

2.方法

(1)色譜條件

pH8.0的0.05mol/L磷酸鹽緩沖液[0.05mol/L磷酸氫二鈉溶液-0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液(95:5)]為流動相A（鹽相），水為流動相B（水相），波長254nm，進(jìn)樣量100μl，柱溫：25℃，流速：1.5ml/min。

(2)試劑配制

精密稱定青霉素對照品適量，置50ml量瓶中，加水溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.2mg的溶液，作為對照品溶液。另精密稱取供試品適量（約相當(dāng)于阿莫西林0.2g），置10ml量瓶中，加2%碳酸鈉溶液5ml使溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

(3)系統(tǒng)適用性要求

精密稱取供試品適量（約相當(dāng)于阿莫西林0.2g），置10ml量瓶中，加2%碳酸鈉溶液4ml使溶解，用0.3mg/ml的藍(lán)色葡聚糖2000溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻。量取100μl注入液相色譜儀，用流動相A進(jìn)行測定，記錄色譜圖，高聚體的峰高與單體與高聚體之間的谷高比應(yīng)大于2.0（圖1）。

圖1 系統(tǒng)色譜圖

(4)測定法

取供試品溶液注入色譜儀，以流動相A為流動相進(jìn)行測定，記錄色譜圖（圖2）。另精密量取對照溶液注入色譜儀，以流動相B為流動相，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計算，結(jié)果乘以校正因子0.1，含阿莫西林聚合物以阿莫西林計，不得過標(biāo)示量的0.2%。

圖2 樣品色譜圖

3.結(jié)果

我國地域遼闊，各個行政區(qū)之間的溫濕度差異很大，我們將25家藥企按照東北、華北、華東、西南、華南五個區(qū)域劃分進(jìn)行考察，通過數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析得出，各個區(qū)域之間的聚合物含量結(jié)果不存在顯著性差異。但是，假設(shè)將聚合物含量結(jié)果落在0～0.05%之間的作為低風(fēng)險考察區(qū)域，0.05%～ 0.10%之間的作為中風(fēng)險考察區(qū)域，大于0.10%的作為高風(fēng)險考察區(qū)域，大于0.15%的作為極高風(fēng)險考察區(qū)域，現(xiàn)在根據(jù)阿莫西林聚合物含量的結(jié)果對阿莫西林膠囊質(zhì)量進(jìn)行風(fēng)險評估，我們發(fā)現(xiàn)，13家企業(yè)的聚合物含量結(jié)果落在低風(fēng)險考察區(qū)域，20家企業(yè)的結(jié)果落在低風(fēng)險和中風(fēng)險考察區(qū)域，5家的結(jié)果落在高風(fēng)險考察區(qū)域，只有1家企業(yè)的結(jié)果落在極高風(fēng)險考察區(qū)域，說明落實藥品質(zhì)量管理上市許可人主體責(zé)任后，企業(yè)在藥品全生命周期的安全性、有效性的保證義務(wù)已經(jīng)得到強化。考察結(jié)果見表1和圖3。

圖3 不同區(qū)域藥企阿莫西林膠囊聚合物含量分布

表1 不同區(qū)域藥企聚合物含量結(jié)果

我們在考察區(qū)域之間聚合物含量的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步考慮到藥品流通過程的影響因素，將25家藥企按照抽樣來源分類對聚合物含量進(jìn)行考察，抽樣來源分為批發(fā)企業(yè)10家、零售藥店10家、醫(yī)院5家三類，從表1和圖4可以看出，9家批發(fā)企業(yè)的結(jié)果落在低風(fēng)險和中風(fēng)險考察區(qū)域，對于結(jié)果落在高風(fēng)險考察區(qū)域的1家企業(yè)，表1中顯示生產(chǎn)日期和檢驗日期相差24個月，而零售藥店結(jié)果落在極高風(fēng)險考察區(qū)域的那家企業(yè)，表1中也顯示同樣情況。這也進(jìn)一步提示我們可以從樣品的儲存時間長短來考察對聚合物含量形成的影響。

圖4 流通渠道中阿莫西林膠囊聚合物含量的分布

我們將25家的產(chǎn)品按照生產(chǎn)日期和檢驗日期間隔時間的長短作為橫坐標(biāo)，聚合物含量結(jié)果作為縱坐標(biāo)繪制趨勢曲線，見圖5，從圖中可以看出，生產(chǎn)日期和檢驗日期間隔時間的長短對聚合物含量結(jié)果呈現(xiàn)上升趨勢，考慮可能是樣品儲存過程中聚合物含量的升高，提示企業(yè)應(yīng)該從這方面進(jìn)一步提高產(chǎn)品質(zhì)量。

圖5 阿莫西林膠囊樣品生產(chǎn)和收檢時間間隔含量趨勢圖

4.討論

阿莫西林膠囊為目前國內(nèi)使用較多的青霉素類抗生素藥物，作為過敏原的高分子聚合物是其質(zhì)量控制的重點[4]。從以上聚合物含量結(jié)果看，均符合規(guī)定，但不同區(qū)域藥企聚合物含量存在較大差異。阿莫西林膠囊聚合物含量的影響因素有很多，其中主要與制劑的生產(chǎn)工藝和儲存條件相關(guān)，生成工藝可影響聚合反應(yīng)方式，而不同方式聚合形成的高分子聚合物的過敏反應(yīng)特性存在差異，儲存條件可影響聚合的速度和聚合物的形成，從圖4可知，因批發(fā)企業(yè)的儲存條件最好，所以批發(fā)企業(yè)的聚合物含量較低。從圖5趨勢圖可知，生產(chǎn)與收檢周期越長，聚合物含量越大，因為阿莫西林結(jié)構(gòu)中含有結(jié)晶水，有引濕性，對高溫不穩(wěn)定，吸潮會使分子中的β-內(nèi)酰胺環(huán)開環(huán)降解，導(dǎo)致雜質(zhì)增多，聚合物含量增大[5]，藥品溫濕度管理體制要求藥品應(yīng)儲存在常溫（10～ 30℃），相對濕度應(yīng)保持在45%～75%環(huán)境中，因此，各廠家在生產(chǎn)、儲存、運輸過程中要嚴(yán)格控制環(huán)境，溫度低于30℃，濕度小于75%[6]。

我們總結(jié)了聚合物含量測定實驗中的一些注意事項，希望對大家今后的檢驗工作有所幫助和借鑒。

（1）開啟新的Sephadex G-10葡聚糖凝膠色譜柱時，先用70～80℃的超純水沖洗一段時間，使內(nèi)部凝膠充分溶脹，再用超純水，低流速沖洗一周，使其充分活化，達(dá)到更好 柱效[7]。

（2）阿莫西林膠囊樣品在5%無水碳酸鈉中較易溶解，一般手動振搖即可，超聲或加熱溶解都容易導(dǎo)致聚合物含量增高。

（3）分子排阻色譜法是以淋出體積作為分子量的相對檢測，基線的穩(wěn)定性直接影響計算結(jié)果，每次實驗前宜先用對應(yīng)水相或鹽相低流速沖洗色譜柱一晚，讓基線更加穩(wěn)定[8]。

（4）色譜柱使用完后先用超純水沖洗至基線穩(wěn)定，再用0.03%疊氮鈉溶液沖洗保存色譜柱，用堵頭密封兩端，放 4～8℃冰箱保存。

（5）國產(chǎn)凝膠色譜柱因其特性，不宜高壓高溫沖洗使用，使用時和使用后均不宜用帶有機(jī)相的溶液沖洗，會導(dǎo)致柱效變差，峰形變形，且使用的流動相必須經(jīng)過脫氣處理，氣泡進(jìn)入色譜柱會難以排除，長期使用也會導(dǎo)致柱效降低。