膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)液中蛋白質(zhì)組學(xué)的變化及意義

膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎 ( knee osteoarthritis，KOA ) 是一種會(huì)影響整個(gè)關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)的退化性慢性疾病，其特征在于軟骨的逐漸退化和軟骨下骨的改變。據(jù)報(bào)道，骨關(guān)節(jié)炎 ( osteoarthritis，OA ) 的總體患病率為5%～14%

。在歐洲國(guó)家據(jù)預(yù)測(cè)，到 2022 年，將有超過 6000 萬人受到 OA 的影響，我國(guó)男性 OA 的發(fā)病率為 58%，女性更上升至 65%～67%

。KOA主要是由于機(jī)械負(fù)荷和炎癥使關(guān)節(jié)組織損傷所致，但 KOA 高發(fā)的根本原因仍不清楚，并且相關(guān)研究還不充分，影響其預(yù)防和治療

。為了加速 KOA 的研究從被動(dòng)干預(yù)轉(zhuǎn)向主動(dòng)的早期預(yù)防和治療轉(zhuǎn)變過程，需要對(duì)發(fā)病機(jī)制有透徹的了解，并結(jié)合有效的診斷生物標(biāo)志物來指示疾病的發(fā)生發(fā)展。近年來，科研工作者在探索 KOA 早期診斷、病情預(yù)估的生物標(biāo)記物中開展了大量科研工作?？焖侔l(fā)展的基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、肽組學(xué)、代謝組學(xué)等組學(xué)平臺(tái)為篩選 KOA 生物標(biāo)記物開拓了新的思路

。

習(xí)近平總書記指出：“我們既要綠水青山，也要金山銀山。”“保護(hù)生態(tài)環(huán)境就是保護(hù)生產(chǎn)力，改善生態(tài)環(huán)境就是發(fā)展生產(chǎn)力。良好生態(tài)環(huán)境是最公平的公共產(chǎn)品，是最普惠的民生福祉。”

蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)使研究人員能夠快速闡明疾病的發(fā)病機(jī)制，并揭示包括血清、關(guān)節(jié)液和尿液在內(nèi)的獨(dú)特體液中的生化標(biāo)志物。因此，蛋白質(zhì)組學(xué)研究越來越多地用于測(cè)量 OA 患者的體液

。在上述生物流體中，尿液是 OA 蛋白質(zhì)組學(xué)研究的理想來源。與血清和關(guān)節(jié)液相比，它易于獲取并且可以無創(chuàng)收集

。但 OA 患者尿液中蛋白水平的變化可能受體內(nèi)其它疾病的影響，并不能完全反應(yīng) OA 的變化，但關(guān)節(jié)液中蛋白水平的變化則可以。鑒于關(guān)節(jié)液蛋白組學(xué)在 OA 中的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)和應(yīng)用的可行性，本研究納入 2017 年 8 月至 2018 年 10 月，新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院骨關(guān)節(jié)科膝關(guān)節(jié)滑膜切除患者為研究對(duì)象，采用同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量( isobaric tags for relative and absolute quantification，iTRAQ ) 的方法篩選 KOA 關(guān)節(jié)液中的差異蛋白，分析其通路并驗(yàn)證其在體內(nèi)表達(dá)。

資料與方法

一、納入標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.納入標(biāo)準(zhǔn)：( 1 ) 符合《骨關(guān)節(jié)炎診治指南( 2018 年版 ) 》中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)

者；( 2 ) 單膝患病者；( 3 ) 根據(jù) Kellgren-Lawrecne 分期標(biāo)準(zhǔn)診斷分期為 Ⅱ、Ⅲ 期者；( 4 ) 年齡 30～80 歲者。

2.排除標(biāo)準(zhǔn)：( 1 ) 對(duì)花粉及其它藥物有過敏反應(yīng)史者；( 2 ) 并發(fā)嚴(yán)重感染疾病、惡性腫瘤、凝血障礙、先天性疾病和其它可能引起并發(fā)癥的疾病者；( 3 ) 存在除 KOA 外其它類型的關(guān)節(jié)炎者；( 4 )有注射透明質(zhì)酸或皮質(zhì)類固醇史情況者；( 5 ) 妊娠婦女或哺乳期婦女。

目前各在運(yùn)核電廠依據(jù)《核電廠營(yíng)運(yùn)單位報(bào)告制度》中的建造階段事件的報(bào)告準(zhǔn)則向國(guó)家核安全局上報(bào)建造事件，報(bào)告準(zhǔn)則包含：違反認(rèn)可的質(zhì)保大綱的要求；最終設(shè)計(jì)違反認(rèn)可的初步安全分析報(bào)告中的承諾或違反建造許可證條件；不符合法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)、技術(shù)條件或其他設(shè)計(jì)要求的建造活動(dòng)或物項(xiàng)；建造或施工中的重大偏差、缺陷、故障或損壞、可能導(dǎo)致不滿足預(yù)期使用要求和安全功能的物項(xiàng)或者需要重新評(píng)價(jià)驗(yàn)證的物項(xiàng)或活動(dòng)等。

二、一般資料

本組共納入 40 例 ( 試驗(yàn)組 )，其中男 22 例，年齡 30～75 歲，中位年齡 53 歲；女 18 例，年齡30～76 歲，中位年齡 48 歲，BMI 為 20～28，平均24。患者手術(shù)方式主要包括人工膝關(guān)節(jié)置換手術(shù)及膝關(guān)節(jié)鏡手術(shù)。KOA 的診斷由膝關(guān)節(jié)正側(cè)位 X 線片( Kellgren-Lawrence 放射學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn) ) 和臨床檢查結(jié)果共同判定

。從健康檢查中心招募了 40 名年齡、性別和 BMI 匹配的無 KOA 的個(gè)體作為正常對(duì)照組。其中男 22 例，年齡 32～73 歲，中位年齡 50 歲；女 18 例，年齡 35～70 歲，中位年齡 45 歲，BMI 為20～28，平均 23。本研究在新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)藥研究院完成并獲得研究院倫理委員會(huì)的同意，所有最終參與研究的對(duì)象閱讀后同意并簽署知情同意書。

我小學(xué)同學(xué)的母親、有一半東歐血統(tǒng)且在蘇聯(lián)多年的亞蘭阿姨，在1982年左右曾專門跟我說過“三種樹比擬三種人”，印象深刻，令人叫絕，但我卻一直沒有替她寫出來，欠疚至今。

三、關(guān)節(jié)液收集

試驗(yàn)者取仰臥位，試驗(yàn)膝置于床椅邊保持放松、伴直位。取髖骨上方、股四頭肌外側(cè)為穿刺進(jìn)針點(diǎn)，75% 酒精棉球消毒皮膚，用無菌 5 ml 注射器取少量 0.5% 利多卡因于穿刺點(diǎn)皮下局部麻醉。選取5 ml 注射器換上 1 ml 注射器的針頭，刺入關(guān)節(jié)腔。將收集的關(guān)節(jié)液注入無菌 Eppendorf 管內(nèi)，以 3000 rpm的速度在 4 ℃ 下離心 30 min。小心吸取上清液后置于 -80 ℃ 冰箱內(nèi)備用。

四、試驗(yàn)設(shè)計(jì)

最終的對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)計(jì)算采用 Perseus 1.3.0.4。當(dāng)滿足

＜ 0.05 和比率 ＞ 1.50 或 ＜ 0.66 時(shí)定義為差異表達(dá)的蛋白質(zhì)。通過參考實(shí)驗(yàn)中內(nèi)部控制的分布來指定比率截止值。PANTHER 平臺(tái) ( http://www.pantherdb.org/ ) 用于基因本體論 ( gene ontology，GO ) 注釋

，從細(xì)胞組分 ( cellular component )、分子功能 ( molecular ftunction ) 和生物過程 ( biological process ) 層次立體化分析差異蛋白的功能網(wǎng)絡(luò)。網(wǎng)絡(luò)和路徑分析通過路徑分析軟件 IPA 分析完成。層次聚類分析通過 Perseus 軟件完成。

筆者用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn) ( enzyme linked immunosorbent assay，ELISA ) 的方法驗(yàn)證了炎性細(xì)胞因子 IL-1β、IL-6 和 TNF-α 在漢族和維吾爾族對(duì)照組和病例組中的表達(dá)。結(jié)果表明，試驗(yàn)組血清中IL-1β、IL-6 和 TNF-α 均顯著高于對(duì)照組 (

＜ 0.05 )。

五、胰蛋白酶消化和 iTRAQ 標(biāo)記

總蛋白質(zhì)含量通過 Bradford 方法測(cè)定：通過與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較采用 559 nm 處的吸光度來定量總蛋白質(zhì)。取 200 μg 蛋白變性，烷基化，然后在 37 ℃ 的胰蛋白酶消化過夜。按照說明書要求取 100 μg 蛋白質(zhì)與 1 單位 iTRAQ 試劑混合后，制備成為標(biāo)記蛋白。將標(biāo)記的蛋白質(zhì)與流動(dòng)相 A 混合，并在 RIGOL L-3000 系統(tǒng)中以 0.7 ml / min 的流速均勻上樣到色譜柱上。逐步注入流動(dòng)相 B 以 300 nl / min 洗脫樣品。使用移動(dòng)設(shè)備 B 的階躍梯度收集最終洗脫液。

原始數(shù)據(jù)通過 ProteoWizard 版本 3.0.8789 提取。根據(jù) SwissProt 數(shù)據(jù)庫(kù)搜索了 Mascot。半胱氨酸的氨基甲酰甲基化和賴氨酸的 iTRAQ 8 plex 指定了固定修飾。通過蛋氨酸的氧化，N 末端的乙?；屠野彼岬?iTRAQ 8 復(fù)合體進(jìn)行了各種修飾。使用支架 Q + 版本 4.4.8 計(jì)算標(biāo)記的肽和蛋白質(zhì)的豐度。肽的接受閾值為 91% 的概率，錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率 ( false discovery rate，F(xiàn)DR ) 設(shè)定為 ＜ 1.0%，而相應(yīng)的蛋白質(zhì)接受值分別為 99.0% 和 1.0%，使用 median 將所有實(shí)驗(yàn)中獲得的強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)化。

六、質(zhì)譜儀分析

質(zhì)譜儀分析在 Q-Exactive 質(zhì)譜儀和液相色譜系統(tǒng) ( Thermo，美國(guó) ) 上完成。含 A 相和 B 相二元溶劑系統(tǒng)中加入標(biāo)記的肽后進(jìn)入質(zhì)譜分析步驟。洗脫液引入配備有 EASY-Spray 離子源的質(zhì)譜儀，該質(zhì)譜儀的預(yù)設(shè)參數(shù)為：噴霧電壓 2.3 kV，毛細(xì)管溫度320 ℃，完全質(zhì)譜 ( mass spectrometry，MS ) 模型，離子轉(zhuǎn)移 20 ms，質(zhì)子數(shù) / 電荷數(shù)范圍 300～1800，強(qiáng)度閾值 8.30 E + 03，霧化氣 32%。

七、數(shù)據(jù)庫(kù)搜索

“鋼琴過了八級(jí)，長(zhǎng)笛是我們學(xué)校交響樂隊(duì)首席，花樣滑冰現(xiàn)在我在做教練助手，壘球我曾代表學(xué)校出訪過很多國(guó)家?！?/p>

八、蛋白質(zhì)統(tǒng)計(jì)分析

選擇 4 例 KOA 患者 ( KOA 1～4 ) 和 8 名正常對(duì)照 ( Con 1～8 ) 的關(guān)節(jié)液裂解，并提取蛋白質(zhì)。將兩組中編號(hào) 1～4 的樣品混合，用作質(zhì)量控制。通過iTRAQ 標(biāo)記方法標(biāo)記所有這 16 個(gè)樣品 ( 4 例患者，8 名對(duì)照和 4 種混合物 )，然后通過質(zhì)譜分析法進(jìn)行分析。通過蛋白質(zhì)印跡法鑒定并確認(rèn)了 KOA 患者中差異豐富的蛋白質(zhì)。

九、血清指標(biāo)檢測(cè)

通過臨床和影像確診為 KOA 的患者入院后，按照醫(yī)囑前夜少食，次日清晨 8 點(diǎn)左右抽取 3 ml 靜脈血。同期選取性別年齡匹配的健康人群為對(duì)照組，4 ℃ 條件下靜止過夜，分離血清。分離后的血清在4 ℃ 放置，并采用酶聯(lián)免疫吸附法及時(shí)測(cè)定腫瘤壞死因子-α ( tumor necrosis factor-α，TNF-α )、白介素-6( interleukin-6，IL-6 ) 和白介素-1β ( IL-1β ) 濃度，比較變化情況。

十、蛋白免疫印跡分析

蛋白免疫印跡 ( Western blot ) 分析目標(biāo)蛋白表達(dá)，包括 Ⅳ 型膠原蛋白 ( type Ⅳ collagen，COL-4，1∶1000；Abcam，USA )，基質(zhì)金屬蛋白酶 9 ( matrix metalloproteinase-9，MMP-9，1∶1000，Abcam，USA )，水通道蛋白 1 ( aquaporin 1，AQP1，1∶1000；碧云天，南京 )，水通道蛋白 3 ( AQP3，1∶1500；碧云天，南京 )，丁甜菜堿雙加氧酶 1 ( butyrobetaine dioxygenase 1，BBOX1，1∶2000；Abcam，USA )，纖維介素蛋白 2 ( fibrin 2，F(xiàn)GL2，1∶1000；碧云天，南京 )。步驟如下：用含 0.1% PMSF 的 RIPA 裂解液消化 30 μg 蛋白關(guān)節(jié)液蛋白，聚氰基丙烯酸正丁酯 ( polybutylcyanoacrylate，PBCA ) 法測(cè)定蛋白濃度。取等量蛋白在制備好的 12% 的聚丙烯酰胺凝( polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE ) 膠中電泳后將蛋白轉(zhuǎn)印至聚偏氟乙烯 ( polyvinylidene fluoride，PVDF ) 膜上 ( 電壓為 60 V )。5% 脫脂奶粉封閉 1 h 后用磷酸緩沖鹽溶液 ( phosphate buffer saline，PBS ) 洗凈，添加相應(yīng)一抗孵育過夜 ( 置于 4 ℃ 冰箱中 )。用 PBS 清洗后，用二抗 ( 辣根過氧化物酶，1∶2500；Abcam，USA ) 耦聯(lián)在室溫下孵育 40 min。在膜上滴加化學(xué)發(fā)光試劑后成像，電泳凝膠成像分析系統(tǒng)分析灰度值。

結(jié) 果

一、關(guān)節(jié)液蛋白測(cè)序患者的一般資料

在試驗(yàn)組隨機(jī)選擇 4 例，按照年齡和性別匹配的原則在對(duì)照組中選擇 8 人收集關(guān)節(jié)液。結(jié)果兩組BMI 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 ( 56.8±1.0

57.3±1.3，

=0.86 )，KOA 患者的 K-L 等級(jí)均為 4 級(jí) ( 表1 )。

二、KOA 關(guān)節(jié)液蛋白組圖譜

在試驗(yàn)組和對(duì)照組之間總共定量了 1412 種蛋白質(zhì)。其中

＜ 0.05 的蛋白質(zhì) 178 個(gè)。對(duì)于差異豐富的蛋白質(zhì)的分配，進(jìn)一步篩選了同時(shí)滿足以下兩個(gè)條件的蛋白質(zhì)

：( 1 ) Student

檢驗(yàn)

＜ 0.05；( 2 ) 與對(duì)照組相比，其比值 ＞ 1.50 或 ＜ 0.66。共產(chǎn)生 102 種差異表達(dá)的蛋白質(zhì) ( differentially expressed protein，DEP )，包括 56 種下調(diào)的蛋白質(zhì) ( 比值 ＜0.66 ) 和 46 種上調(diào)的蛋白質(zhì) ( 比值 ＞ 1.50 )，上調(diào)前10 和下調(diào)前 10 的蛋白見表2。差異蛋白的分層聚類結(jié)果表明 102 種蛋白質(zhì)在列上分為兩組，在行上也分為兩組。在列方向上疾病或?qū)φ諣顟B(tài)正確一致，沒有一個(gè)樣本作為 outsider，證明了該試驗(yàn)的有效性( 圖 1 )。

三、基因本體注釋分析

花鳥畫作為我國(guó)傳統(tǒng)繪畫題材的重要組成部分，憑借其獨(dú)特的藝術(shù)魅力俘虜了眾多畫者與欣賞者的心。在傳承與發(fā)展的過程中，通過不斷地發(fā)展和創(chuàng)新形成了三種各具魅力的花鳥繪畫方式，工筆花鳥畫，寫意花鳥畫，兼工帶筆花鳥畫，都各有特色，各有美感。

四、路徑和網(wǎng)絡(luò)注釋分析

在這項(xiàng)研究中，筆者應(yīng)用了尖端的 iTRAQ 方法探索 KOA 和正常對(duì)照組關(guān)節(jié)液中的總蛋白質(zhì)和差異表達(dá)的蛋白質(zhì)。質(zhì)譜檢測(cè)到總共 1412 種蛋白質(zhì)，其中 102 種蛋白質(zhì)的豐度差異顯著 (

＜ 0.05 和比值 ＞1.50 或 ＜ 0.66 )。發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)可能在蛋白質(zhì)水平上為KOA 的發(fā)病機(jī)制及其潛在的生物標(biāo)志物提供了依據(jù)。

五、炎癥反應(yīng)信號(hào)通路相關(guān)因子的驗(yàn)證

智慧管理主要是實(shí)現(xiàn)對(duì)學(xué)校人、財(cái)、物的智能化管理，并在數(shù)據(jù)完善和業(yè)務(wù)流暢的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)校務(wù)平臺(tái)和數(shù)據(jù)分析、輔助決策，需要新建或完善的系統(tǒng)有學(xué)生數(shù)據(jù)一體化系統(tǒng)、教師數(shù)據(jù)一體化系統(tǒng)、資產(chǎn)管理系統(tǒng)、新數(shù)據(jù)中心機(jī)房、個(gè)性收費(fèi)平臺(tái)、輔助決策系統(tǒng)、綜合服務(wù)中心等。在智慧校園環(huán)境下，充分利用大數(shù)據(jù)創(chuàng)新服務(wù)管理的方式，優(yōu)化管理決策。利用數(shù)據(jù)挖掘，為學(xué)校、各業(yè)務(wù)部門和院系提供分級(jí)、分類授權(quán)的統(tǒng)計(jì)信息報(bào)表，從而為各種科學(xué)決策提供基礎(chǔ)的數(shù)據(jù)支持。

六、差異關(guān)鍵蛋白在兩組中的表達(dá)驗(yàn)證

為了確定新的潛在標(biāo)記，通過 PubMed 文獻(xiàn)分析了差異豐富的蛋白質(zhì)的功能。最后，通過蛋白質(zhì)印跡分析進(jìn)一步檢測(cè)了 6 種與 KOA 發(fā)生發(fā)展可能相關(guān)的蛋白質(zhì) ( COL-4、MMP-9、AQP1、AQP3、BBOX1 和 FGL2 )。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，KOA患者血液中 COL-4、MMP-9、AQP1 和 AQP3 均顯著增加，BBOX1 和 FGL2 顯著減少 ( 圖 4 )。

GO 分析結(jié)果表明，蛋白質(zhì)涉及細(xì)胞膜 - 細(xì)胞膜物質(zhì)交換 ( 30.4% )，細(xì)胞外區(qū)域 ( 25.0% )，細(xì)胞部分( 16.1% )，細(xì)胞連接 ( 8.9% )，細(xì)胞外基質(zhì) ( 8.9% )，大分子復(fù)合物 ( 7.1% ) 和細(xì)胞器 ( 3.6% )。此外，對(duì)生物學(xué)過程的分析區(qū)分為以下 13 類：細(xì)胞過程( 22.7% )，代謝過程 ( 20.5% )，發(fā)育過程 ( 10.9% )，對(duì)刺激的反應(yīng) ( 8.7% )，多細(xì)胞生物過程 ( 7.9% )，生物調(diào)節(jié) ( 7.0% )，生物黏附 ( 7.0% )，定位 ( 6.1% )，免疫系統(tǒng)過程 ( 5.2% )，細(xì)胞生物發(fā)生 ( 2.6% )，生殖 ( 0.4% )，機(jī)體 ( 0.4% ) 和細(xì)胞殺傷 ( 0.4% )。此外，通過分子功能分析將蛋白質(zhì)分為 6 類，分別為催化活性 ( 35.3% )，結(jié)合活性 ( 34.6% )，受體活性 ( 15.8% )，轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性 ( 6.8% )，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)活性( 4.5% ) 以及結(jié)構(gòu)分子活性 ( 3.0% ) ( 圖 2 )。

討 論

將鑒定出的 102 種差異豐富的蛋白質(zhì)提交給IPA 軟件，以分析途徑和網(wǎng)絡(luò)功能。路徑分析表明，肝纖維化 / 肝星狀細(xì)胞活化是涉及的最主要途徑。其它隨后的途徑是 TNF-α 信號(hào)通路，細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶 5 ( extracellular signal regulated kinase 5，ERK5 ) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子 3 ( signal transducer and activator of transcription 3，STAT 3 )途徑，核因子 κB ( nuclear factor kappa B，NF-κB )信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，X 受體 / 類視黃醇 X 受體 ( X receptor /retinoid X receptor，LXR / RXR ) 活化和神經(jīng)膠質(zhì)瘤入侵信號(hào)等 ( 圖 3a )。差異豐富的蛋白質(zhì)的網(wǎng)絡(luò)分析由 16 個(gè)蛋白組成。排名第一的蛋白得分最高，為43，其與“心血管系統(tǒng)發(fā)育和功能，細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，結(jié)締組織疾病”等有關(guān) ( 圖 3b )。

OA 的病因是多方面的，涉及許多風(fēng)險(xiǎn)因素，包括年齡、性別、體重、創(chuàng)傷和炎癥。本研究中，筆者設(shè)定了嚴(yán)格的入組標(biāo)準(zhǔn)，以匹配兩組之間的這些因素。在智能路徑分析中，第 1 個(gè)分配的網(wǎng)絡(luò)包括結(jié)締組織疾病。對(duì)于像 KOA 這樣的“磨損”疾病，結(jié)締組織存在降解

。在關(guān)節(jié)軟骨中，很少有人關(guān)注諸如 COL-4。本研究中，COL-4 ( 最早發(fā)現(xiàn)于關(guān)節(jié)軟骨的細(xì)胞間質(zhì) ) 蛋白在 KOA 患者中表達(dá)較低。膠原蛋白的研究表明，它們與多種結(jié)締組織疾病有關(guān)，尤其是退化性關(guān)節(jié)疾病。

MMP-9 是另一種值得注意的蛋白質(zhì)，與 OA 的退化機(jī)制有關(guān)。MMP 家族可能影響關(guān)節(jié)炎的疾病過程中層粘連蛋白和膠原蛋白分解

。本研究中，MMP-9 在 KOA 關(guān)節(jié)液中明顯被抑制，這可能提示KOA 軟骨中破壞性的細(xì)胞外基質(zhì)形成。MMP-9 是一種明膠酶，是 MMP 家族中最復(fù)雜的成員，具有針對(duì)Ⅳ 型膠原的蛋白水解活性。與 KOA 早期關(guān)節(jié)軟骨退變有關(guān)的生物標(biāo)記物包括多種基質(zhì)降解酶，例如MMP 家族具有血小板反應(yīng)蛋白 1 型基序的雙整合素和金屬蛋白酶、軟骨聚集蛋白聚糖酶等

。

商務(wù)辦公功能是商務(wù)酒店的重要組成部分，保利濱湖廣場(chǎng)配置了會(huì)議室和宴會(huì)廳，大型會(huì)議和普通業(yè)務(wù)洽談均可兼顧。在裙樓西側(cè)設(shè)有單獨(dú)的宴會(huì)廳主入口，可便捷到達(dá)宴會(huì)廳和會(huì)議區(qū)，會(huì)議區(qū)在大堂右側(cè)，既相對(duì)獨(dú)立又可便捷聯(lián)系。健身房、泳池等康體設(shè)施集中設(shè)計(jì)在三層，滿足旅客的休閑娛樂需求，為旅客創(chuàng)造一個(gè)輕松、舒暢、愉悅的社交環(huán)境。

此外發(fā)現(xiàn)水通道蛋白家族的兩個(gè)成員 AQP1 和AQP3 在 KOA 組中上調(diào)。Mobasheri 等

在馬關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中發(fā)現(xiàn) AQP1 和 AQP3 除了參與運(yùn)輸水之外，還在小分子溶質(zhì)和活性代謝產(chǎn)物等一些物質(zhì)通過軟骨細(xì)胞的漿膜中發(fā)揮重要作用。研究還表明，當(dāng)發(fā)生關(guān)節(jié)病變時(shí)，關(guān)節(jié)內(nèi)的軟骨細(xì)胞內(nèi)外滲透壓環(huán)境改變，軟骨間質(zhì)遭到破壞，導(dǎo)致 AQPs 家族蛋白在體內(nèi)表達(dá)變化，增加細(xì)胞膜水通透性

。

蛋白質(zhì)組學(xué)的途徑分析表明，肝纖維化 / 肝星狀細(xì)胞活化是差異蛋白發(fā)揮作用最主要的途徑。其中，排名前 10 的蛋白中 FGL2 在調(diào)節(jié)肝脂質(zhì)代謝中起關(guān)鍵作用

。此外，已有研究證實(shí)，與對(duì)照組相比，F(xiàn)GL2 在 OA 患者的血漿中高表達(dá)，而在肥胖人群中低表達(dá)

。BBOX1 是負(fù)責(zé)左旋肉堿生物合成的酶，在 OA 患者中較低。據(jù)報(bào)道，血脂異常在 OA中起關(guān)鍵作用，可能是一個(gè)危險(xiǎn)因素

。因此，GO 生物學(xué)過程證實(shí)了代謝過程在 OA 病理過程中很重要。本研究證實(shí)，F(xiàn)GL2 和 BBOX1 的關(guān)節(jié)液中的濃度差異可以作為判斷 KOA 的一種方式。然而，F(xiàn)GL2 和 BBOX1 在 KOA 病理生理中的確切機(jī)制仍然未知。

通過組學(xué)篩選的差異蛋白質(zhì)應(yīng)能代表 KOA 這種復(fù)雜疾病發(fā)生發(fā)展的多個(gè)方面。因此，筆者提出了差異蛋白列表中的 6 種蛋白作為 KOA 生物標(biāo)志物的潛在候選物。為了闡明這些蛋白質(zhì)在 KOA 發(fā)病中的機(jī)制和作為生物標(biāo)志物及靶向藥物開發(fā)的可能性，需要對(duì)這些蛋白質(zhì)的生物化學(xué)機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步研究。

綜上所述，通過分析 KOA 關(guān)節(jié)液中的蛋白質(zhì)表達(dá)譜，確定 COL-4、MMP-9、AQP1、AQP3、BBOX1和 FGL2 作為 KOA 中的候選生物標(biāo)志物。對(duì)這些新型生物標(biāo)記物的進(jìn)一步研究將有助于了解 KOA 的病理狀況、藥物開發(fā)或干細(xì)胞研究，并改善早期診斷和治療。

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