劉 英

（中國林業(yè)科學(xué)研究院 熱帶林業(yè)研究所，廣東 廣州 510520）

檀香Santalum album為檀香科Santalaceae 檀香屬Santalum常綠小喬木，主要分布于印度、印度尼西亞、澳大利亞以及太平洋群島，我國在20世紀(jì)初開始引種檀香，目前已有百余年歷史。檀香是一種半寄生植物，其根端著生吸盤，吸附于寄主植物從而吸收其水分和養(yǎng)分。其木材可用作高級(jí)工藝雕刻品原材，亦可用于提煉檀香油。檀香油常用于香薰、香水及中藥[1-2]，深受人們喜愛。然而，當(dāng)前我國生產(chǎn)上采用實(shí)生苗造林，往往出現(xiàn)個(gè)體分化嚴(yán)重、管理難度大、產(chǎn)量低等問題，制約了檀香的推廣種植。應(yīng)用經(jīng)選育的優(yōu)樹材料，通過組培快繁將其無性系化并予以推廣應(yīng)用，有助于推動(dòng)檀香種植業(yè)的快速發(fā)展。

眾所周知，制約檀香無性系組培快繁成敗的最關(guān)鍵之處在于生根培養(yǎng)，盡管已有繁殖少量植株的報(bào)道，然而其方法尚有待優(yōu)化[3]。此技術(shù)瓶頸一直困擾檀香優(yōu)良無性系的推廣應(yīng)用，學(xué)者們也重點(diǎn)關(guān)注其生根研究。Sanjaya 等[3]從50 ～60年生成年樹上采集枝條作為外植體開展組培研究，其生根率最高達(dá)50%，生根誘導(dǎo)難度大。馬國華等[4]亦采取成年枝開展組培研究，生根率高達(dá)87%，移植成活率達(dá)95%以上，但生根誘導(dǎo)需要時(shí)間長達(dá)3 個(gè)月，煉苗及田間移植成活又需要3個(gè)月；由于生根不整齊，移植成活時(shí)間長，導(dǎo)致管理難度大。陳偉玉等[5]采用檀香種胚開展組培試驗(yàn)，瓶苗能誘導(dǎo)出根原基，但未能長出根系，且瓶苗隨培養(yǎng)時(shí)間的延長而落葉甚至死亡。筆者曾以1/4MS 為生根誘導(dǎo)基本培養(yǎng)基，調(diào)整AB 生根粉1 號(hào)、NAA 和IBA 的質(zhì)量濃度，開展6 個(gè)優(yōu)樹無性系的組培生根誘導(dǎo)，未能成功生根，80%以上的無根瓶苗出現(xiàn)落葉并逐漸死亡?？梢?，檀香無性系間組培生根誘導(dǎo)差異明顯，生根難度大。

組培苗瓶外微扦插是解決難生根樹種優(yōu)質(zhì)苗木擴(kuò)繁的一種主要技術(shù)措施[6-8]，可縮短育苗周期，降低生產(chǎn)成本，提高經(jīng)濟(jì)效益[9-11]。微扦插成敗關(guān)鍵在于瓶苗質(zhì)量與微扦插技術(shù)。在組織快繁中，蔗糖為植物提供碳源和能源，氮為植物蛋白質(zhì)合成的重要元素，以NH4NO3和KNO3為常用氮源，硝銨態(tài)氮配比顯著影響植物生長[12]，糖[13-16]和氮[17-18]濃度的高低直接影響瓶苗的生長及質(zhì)量。組培苗瓶外微扦插過程中，基質(zhì)為植物提供必要的根系生長發(fā)育環(huán)境，其成分和配比顯著影響基質(zhì)的物理性質(zhì)[19]，進(jìn)而影響苗木生長[20]和生根率及根系發(fā)育[21-24]。此外，瓶苗質(zhì)量亦顯著影響微扦插成活率。王蓉等[25]發(fā)現(xiàn)，葡萄組培瓶苗莖髓部的老化程度可能影響其根源基的形成，培育40 d的瓶苗優(yōu)于20 d 及60 d，扦插后生根率最高，污染率最低，宜用于瓶外扦插；澳洲茶樹組培瓶苗在高度≥3 cm 時(shí)瓶外生根效果最好[26]。因此，本研究設(shè)置系列蔗糖質(zhì)量濃度以及NH4NO3和KNO3質(zhì)量濃度開展預(yù)生根試驗(yàn)，以培育健壯的預(yù)生根瓶苗；設(shè)置系列基質(zhì)配比、預(yù)生根瓶苗規(guī)格開展瓶外微扦插試驗(yàn)，篩選適宜的微扦插基質(zhì)及預(yù)生根瓶苗高度。進(jìn)一步應(yīng)用6 個(gè)檀香優(yōu)良無性系驗(yàn)證研發(fā)技術(shù)的應(yīng)用效果，評(píng)定其微扦插難易程度，為檀香種植業(yè)提供適宜規(guī)模推廣的優(yōu)良無性系及組培苗生產(chǎn)技術(shù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

參試檀香無性系共6 個(gè)，其中1 號(hào)無性系選自廣東省南海市林農(nóng)種植的檀香林，12、18、19、21、22 號(hào)為廣東省高明檀香基地8年生種源試驗(yàn)林內(nèi)的優(yōu)樹無性系。所有試驗(yàn)于中國林業(yè)科學(xué)研究院熱帶林業(yè)研究所良種繁育中心完成。

1.2 方 法

基于LY 培養(yǎng)基[27]進(jìn)行改良，將NH4NO3使用質(zhì)量濃度提高為660 mg·L-1，6-BA 使用質(zhì)量濃度降低為0.08 mg·L-1，作為檀香繼代增殖培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基。6 個(gè)無性系繼代培養(yǎng)15 次。以1 號(hào)無性系繼代苗為材料進(jìn)行預(yù)生根培養(yǎng)試驗(yàn)及瓶外微扦插試驗(yàn)；應(yīng)用全部6 個(gè)優(yōu)良無性系的繼代苗對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，并開展無性系對(duì)比試驗(yàn)。

1.2.1 預(yù)生根培養(yǎng)基的篩選

剪取繼代培養(yǎng)中高度約2.5 cm 的單芽，分別接種于預(yù)生根培養(yǎng)基上，于室溫24±1℃、光照強(qiáng)度1 800 ～3 000 Lux、光照8 h/d 的條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)30 d 后，調(diào)查苗高、基徑、葉片數(shù)、落葉率（落葉數(shù)/總?cè)~片數(shù)×100%）以及最大葉長和葉寬，篩選預(yù)生根培養(yǎng)基。

預(yù)生根培養(yǎng)基的研制考慮糖質(zhì)量濃度和氮源及質(zhì)量濃度篩選兩個(gè)試驗(yàn)。每個(gè)處理重復(fù)4 次，每次重復(fù)20 個(gè)單芽。

糖質(zhì)量濃度的篩選：以1/2MS 大量元素、MS微量元素和有機(jī)質(zhì)為預(yù)生根誘導(dǎo)基本培養(yǎng)基，添加0.8 mg·L-1ABT 1 號(hào) 生 根 粉、0.4 mg·L-1IBA 及0.4 mg·L-1NAA。參 考 山 薯Dioscorea fordii[15]和金鉆蔓綠絨Philodendron‘Con-go’[16]組培試驗(yàn)的蔗糖質(zhì)量濃度梯度，設(shè)置0、5、10、15、20、25、30、35、40 和45 g·L-1共計(jì)10 個(gè)蔗糖質(zhì)量濃度處理，參試單芽共800 個(gè)。

NH4NO3和KNO3質(zhì)量濃度的篩選：基于糖質(zhì)量濃度的篩選結(jié)果，選擇最佳蔗糖質(zhì)量濃度，參照本研究中檀香增殖培養(yǎng)以及茶樹Camellia sinensis[17]和多花黃精Polygonatum cyrtonema[18]組培試驗(yàn)所使用的NH4NO3和KNO3質(zhì)量濃度，設(shè)置0、330、660、1 320 mg·L-1的NH4NO3及380、760、1 520、3 040 mg·L-1的KNO3進(jìn)行氮源及質(zhì)量濃度篩選試驗(yàn)，共16 個(gè)處理（表1），KH2PO4、CaCl2、MgSO4等質(zhì)量濃度、激素種類和質(zhì)量濃度以及微量元素和有機(jī)質(zhì)含量與蔗糖質(zhì)量濃度篩選試驗(yàn)相同，參試單芽共1 280 個(gè)。

表1 氮源及質(zhì)量濃度試驗(yàn)設(shè)計(jì)?Table 1 Tests of nitrogen sources and their concentrations

1.2.2 瓶外微扦插

瓶外微扦插共設(shè)置3 個(gè)試驗(yàn)，均按照隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)。采取經(jīng)10 d 煉苗的預(yù)生根瓶苗進(jìn)行瓶外微扦插。扦插前用0.5%高錳酸鉀消毒各處理基質(zhì)，扦插時(shí)取出預(yù)生根瓶苗，清水清洗去除殘余培養(yǎng)基，不修剪基部，直接插入基質(zhì)，2 個(gè)星期內(nèi)蓋薄膜保濕，并適當(dāng)遮陰。扦插25 d 后，每周噴施1 次1/4 MS 的大量元素，每月噴施1 次MS 的微量元素。

基質(zhì)配比試驗(yàn)：以蛭石和黃心土為主、泥炭土為輔，設(shè)置不同配比的9 種基質(zhì)開展微扦插試驗(yàn)（表2）。每個(gè)處理重復(fù)10 次，每次重復(fù)40 株，參試預(yù)生根瓶苗共3 600 株。

表2 檀香瓶外微扦插參試基質(zhì)?Table 2 The tested media for the micro-cutting of Santalum album

預(yù)生根瓶苗高選擇試驗(yàn)：依據(jù)基質(zhì)配比試驗(yàn)結(jié)果，采用效果最佳的基質(zhì)，設(shè)置2.0 ～3.0、3.1 ～3.5、3.6 ～4.0、4.1 ～4.5、4.6 ～5.0、5.1 ～5.5 cm 共6 個(gè)瓶苗高度處理，開展預(yù)生根瓶苗微扦插試驗(yàn)，每個(gè)處理重復(fù)3 次，每次重復(fù)50 株，參試瓶苗共900 株。

無性系對(duì)比試驗(yàn)：采用糖質(zhì)量濃度及NH4NO3和KNO3質(zhì)量濃度篩選試驗(yàn)得出的最佳方案培育1、12、18、19、21、22 等6 個(gè)無性系的預(yù)生根瓶苗。應(yīng)用基質(zhì)配比和預(yù)生根瓶苗高選擇試驗(yàn)得出的最佳基質(zhì)和瓶苗高度，布設(shè)無性系微扦插對(duì)比試驗(yàn)。每個(gè)無性系重復(fù)3 次，每次重復(fù)50 株，參試預(yù)生根瓶苗共1 050 株。

基質(zhì)配比試驗(yàn)為早期試驗(yàn)，由于瓶苗數(shù)量有限，為了保障后期造林試驗(yàn)用苗，扦插2 個(gè)月后僅調(diào)查生根率。然后進(jìn)行預(yù)生根瓶苗高度篩選和無性系比較試驗(yàn)，扦插3 個(gè)月后，調(diào)查生根條數(shù)、根長、苗高、葉片數(shù)、吸盤數(shù)，吸盤數(shù)為生根苗根系上的吸盤個(gè)數(shù)。按照如下公式計(jì)算生根率和吸盤率。

1.3 數(shù)據(jù)分析

應(yīng)用SPSS13.0 軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和多重比較。方差分析之前，對(duì)百分?jǐn)?shù)數(shù)據(jù)進(jìn)行反正切轉(zhuǎn)換。

2 結(jié)果與分析

2.1 預(yù)生根瓶苗培養(yǎng)

2.1.1 蔗糖質(zhì)量濃度對(duì)預(yù)生根瓶苗生長的影響

由表3 可以看出，蔗糖質(zhì)量濃度對(duì)瓶苗生長及落葉影響極顯著（P＜0.01）。在0 ～45 g·L-1質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，落葉率、葉片長度和寬度隨蔗糖質(zhì)量濃度升高而降低并趨于穩(wěn)定，瓶苗高、葉片數(shù)隨蔗糖質(zhì)量濃度升高而增大并逐漸穩(wěn)定。無蔗糖培養(yǎng)基處理，95%的瓶苗出現(xiàn)基部壞死，63.75%的瓶苗死亡；5 g·L-1蔗糖質(zhì)量濃度處理，1.25%的瓶苗出現(xiàn)基部壞死，其落葉率在各加糖處理中最高，達(dá)65.71%。這兩個(gè)處理的苗高最小。苗高在25 g·L-1質(zhì)量濃度處理最大，顯著大于10 g·L-1及以下處理（P＜0.05）；葉片數(shù)在30 g·L-1質(zhì)量濃度處理最多，顯著高于15 g·L-1及更低蔗糖質(zhì)量濃度處理。葉片長度及寬度分別在45 g·L-1及40 g·L-1質(zhì)量濃度處理最小，顯著小于15 g·L-1及以下處理。落葉率在40 g·L-1處理最低，為0.67%，顯著低于20 g·L-1及以下處理。整體而言，40 g·L-1蔗糖質(zhì)量濃度處理不僅落葉率低，而且瓶苗生長旺盛，宜用于檀香組培瓶苗的預(yù)生根培養(yǎng)。

表3 蔗糖質(zhì)量濃度處理間檀香預(yù)生根苗生長的比較?Table 3 Comparison of the growth of the pre-rooted Santalum album plantlets treated with different sucrose concentrations

2.1.2 NH4NO3和KNO3質(zhì)量濃度對(duì)預(yù)生根瓶苗生長的影響

NH4NO3質(zhì)量濃度對(duì)瓶苗生長的影響較KNO3大（表4）。參試的NH4NO3質(zhì)量濃度處理間檀香瓶苗基徑、苗高、葉片數(shù)、最大葉長、落葉率達(dá)到極顯著差異，最大葉片寬達(dá)顯著差異。參試的KNO3質(zhì)量濃度處理間，最大葉片寬差異極顯著，基徑、最大葉長及落葉率差異顯著，苗高及葉片數(shù)差異不顯著（P≥0.05）。NH4NO3和KNO3質(zhì)量濃度的交互作用對(duì)基徑及最大葉寬生長影響極顯著，對(duì)葉片數(shù)影響顯著。

在參試質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，落葉率隨NH4NO3質(zhì)量濃度的增加呈先降后升的趨勢(shì)，各質(zhì)量濃度處理間差異極顯著；在380 ～1 520 mg·L-1的KNO3質(zhì)量濃度范圍內(nèi)落葉率基本穩(wěn)定，3 040 mg·L-1處理則顯著升高?；鶑诫S兩氮源質(zhì)量濃度的增加呈先升后降的趨勢(shì)，各處理間差異極顯著或顯著。苗高隨NH4NO3及KNO3質(zhì)量濃度的增加分別呈現(xiàn)極顯著的單調(diào)遞增和無顯著差異的先升后降的趨勢(shì)。葉片數(shù)隨NH4NO3質(zhì)量濃度的增加極顯著增多，隨KNO3質(zhì)量濃度的增加緩慢減少并趨于穩(wěn)定，差異不顯著。最大葉長、最大葉寬隨NH4NO3及KNO3質(zhì)量濃度的增加分別呈現(xiàn)單調(diào)遞增和先升后降的趨勢(shì)，各處理間差異達(dá)極顯著或顯著水平。

由 表4 可 知，660 mg·L-1的NH4NO3和1 520 mg·L-1的KNO3組合，不僅落葉率低，瓶苗的各項(xiàng)生長指標(biāo)值均為最高或較高，適宜作為檀香預(yù)生根苗培養(yǎng)的氮源。

表4 NH4NO3 和KNO3 質(zhì)量濃度處理間預(yù)生根瓶苗的生長差異?Table 4 Growth differences of the pre-rooted Santalum album plantlets treated with various NH4NO3 and KNO3 concentrations

2.1.3 預(yù)生根培養(yǎng)基的無性系驗(yàn)證

選取1、12、18、19、21、22 等6 個(gè)無性系，進(jìn)一步對(duì)上述適宜蔗糖質(zhì)量濃度及NH4NO3和KNO3質(zhì)量濃度進(jìn)行驗(yàn)證（圖1），發(fā)現(xiàn)1、18、21、22 等4 個(gè)無性系瓶苗生長旺盛，無落葉現(xiàn)象出現(xiàn)；相對(duì)于上述4 個(gè)無性系，12 號(hào)無性系葉片較大，19 號(hào)無性系葉片較小，兩者分別有約5%和13%的落葉率，仍能進(jìn)行預(yù)生根瓶苗生產(chǎn)。

圖1 6 個(gè)檀香無性系的預(yù)生根培養(yǎng)效果Fig. 1 The effect of pre-rooting tissue culture of the six Santalum album clones

2.2 預(yù)生根瓶苗瓶外微扦插

2.2.1 基質(zhì)對(duì)微扦插生根的影響

微扦插生根率隨黃心土比例的增加、蛭石比例的減少呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，各處理間差異極顯著（圖2，P＜0.01）。以4號(hào)基質(zhì)處理(蛭石∶泥炭土∶黃心土=6∶1∶3，V/V)的生根率最高(68.08%±0.04%)，顯著高于其他處理（P＜0.05），3 號(hào)(2∶1∶7)和2 號(hào)(1∶1∶8)基質(zhì)處理的生根率最低，與7 號(hào)基質(zhì)處理(3∶1∶6)差異不顯著，而顯著低于其他處理。由此可見，蛭石∶泥炭土∶黃心土按6∶1∶3 配比的混合基質(zhì)適宜用于檀香組培瓶苗的微扦插。

圖2 基質(zhì)處理間檀香預(yù)生根組培瓶苗微扦插60 d 后生根率的比較Fig. 2 Comparison of the rooting rates of the pre-rooted plantlets of Santalum album after micro-cutting for 60 days

2.2.2 瓶苗高對(duì)扦插生根的影響

表5 為預(yù)生根瓶苗高對(duì)檀香微扦插生根的影響。當(dāng)預(yù)生根瓶苗高為2.0 ～5.5 cm 時(shí)，生根率及吸盤率隨苗高的增大呈先上升后下降的趨勢(shì)，根數(shù)、根長及吸盤數(shù)則升高。各苗高級(jí)處理間除了吸盤率差異不顯著之外（P≥0.05），其他根系指標(biāo)均差異顯著。3.6 ～5.5 cm 高度范圍內(nèi)各處理間生根率、根條數(shù)、根長、吸盤數(shù)等4 項(xiàng)根系指標(biāo)值差異不顯著，顯著高于2.0 ～3.0 cm 高度范圍內(nèi)各處理。以4.6 ～5.0 cm 高度級(jí)處理的生根率最高(69.74%±0.13%)；5.1 ～5.5 cm 高度級(jí)處理的根條數(shù)、根長、吸盤數(shù)最大，分別為1.50±0.17、11.10±0.40 cm 和7.833±1.03；4.1 ～4.5 cm高度級(jí)處理的吸盤率最高(86.60%±0.06%)?？梢姡A(yù)生根苗高度顯著影響微扦插的生根成活率，3.6 ～5.5 cm 高檀香組培瓶苗適宜用于微扦插，尤以4.6 ～5.0 cm 高的組培瓶苗微扦插效果最好。

表5 預(yù)生根瓶苗高對(duì)檀香微扦插生根的影響(90 d)?Table 5 Effects of the height of plantlets on the rooting properties of Santalum album after micro-cutting for 90 days

2.2.3 無性系間微扦插生根特性差異分析

由表6 可知，不同無性系間微扦插生根能力差異顯著。6 個(gè)無性系中，18 號(hào)無性系的生根率、吸盤率、根條數(shù)、根長、吸盤數(shù)為最高（87.12%、83.09%、1.64、13.78 cm、7.80），顯著高于其他5個(gè)無性系，屬易扦插無性系；21 號(hào)和1 號(hào)無性系的生根率、吸盤率、吸盤數(shù)顯著高于22 號(hào)、19 號(hào)和12 號(hào)無性系，為較易扦插無性系；22 號(hào)無性系的生根率、吸盤率顯著高于19 號(hào)及12 號(hào)，為較難扦插無性系；12 號(hào)和19 號(hào)無性系的生根率、吸盤率及吸盤數(shù)最低，為難扦插無性系。圖3 為18 號(hào)無性系瓶外微扦插3 個(gè)月后的生長和生根情況。

表6 6 個(gè)檀香無性系間微扦插3 個(gè)月后的生根差異?Table 6 Rooting differences between the six Santalum album clones after micro-cutting for 3 months

圖3 檀香18 號(hào)無性系的瓶外微扦插3 個(gè)月后的生長和生根情況Fig. 3 Growth and rooting performance of Santalum album clone No. 18 after micro-cutting for 3 months

3 討 論

在預(yù)生根培養(yǎng)過程中，蔗糖的質(zhì)量濃度顯著影響檀香預(yù)生根瓶苗的苗高、葉片數(shù)、葉片長度和寬度及落葉率。其高度及葉片數(shù)隨質(zhì)量濃度的升高而增大并逐漸穩(wěn)定，而葉片長度和寬度及落葉率隨質(zhì)量濃度的升高而減小并趨于穩(wěn)定。蔗糖質(zhì)量濃度為25 g·L-1時(shí)，苗高均值最大(3.47 cm)，各項(xiàng)觀測指標(biāo)值與質(zhì)量濃度30 ～45 g·L-1處理差異不顯著；當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到40 g·L-1時(shí)，落葉率最低(0.67%)。本研究與徐盼盼等[16]對(duì)金鉆蔓綠絨Philodendron‘Con-go’的研究結(jié)果有相似之處，亦不盡相同：相同之處在于瓶苗高生長隨蔗糖質(zhì)量濃度的變化趨勢(shì)及苗高最大值的出現(xiàn)時(shí)的蔗糖質(zhì)量濃度(25 g·L-1)，其不同之處在于金鉆蔓綠絨的葉長隨蔗糖質(zhì)量濃度(0 ～30 g·L-1)的升高而增大并趨于穩(wěn)定，而葉寬無明顯變化規(guī)律[16]。嚴(yán)華兵等[15]對(duì)山薯Dioscorea fordii組培的研究表明，瓶苗高生長隨蔗糖質(zhì)量濃度的增加(10 ～80 g·L-1)呈先升后降的變化趨勢(shì)，苗高最大值出現(xiàn)在蔗糖質(zhì)量濃度30 g·L-1處理。Gürel 等[13]對(duì)杏Amygdalus communis的研究發(fā)現(xiàn)，在20 ～60 g·L-1蔗糖質(zhì)量濃度試驗(yàn)范圍內(nèi)，50 ～60 g·L-1蔗糖質(zhì)量濃度處理下組培瓶苗生長速率最高。而對(duì)于椰子Cocos nucifera組培苗而言，在20 ～80 g·L-1蔗糖質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，糖的質(zhì)量濃度對(duì)苗高生長幾乎無影響[14]。由此可見，組培瓶苗高生長對(duì)蔗糖的敏感度因植物種類而異。從培育健壯預(yù)生根瓶苗的角度考慮，本研究中25 ～45 g·L-1蔗糖質(zhì)量濃度處理瓶苗高生長處于中等以上水平且落葉率低，宜用于預(yù)生根培養(yǎng)，以40 g·L-1的蔗糖質(zhì)量濃度效果最佳。

本研究發(fā)現(xiàn)，NH4NO3及KNO3的質(zhì)量濃度顯著影響檀香預(yù)生根瓶苗的質(zhì)量，其中NH4NO3對(duì)預(yù)生根瓶苗質(zhì)量的影響更大。以330 ～660 mg·L-1NH4NO3質(zhì)量濃度落葉率最低，基徑最大?；鶑酱笥欣谏T導(dǎo)。660 mg·L-1NH4NO3處理的苗高、葉片數(shù)、葉片長、葉寬顯著高于330 mg·L-1NH4NO3處理，與最大值的1 320 mg·L-1NH4NO3處理差異不顯著。因此認(rèn)為，660 mg·L-1NH4NO3質(zhì)量濃度適宜應(yīng)用于檀香預(yù)生根瓶苗培育，其效果在所有參試處理中最佳，該結(jié)果與楊娟等[17]對(duì)茶樹的研究結(jié)果不一致，該研究的最佳NH4NO3質(zhì)量濃度為1 240 mg·L-1，可能與植物種類及培養(yǎng)階段不同有關(guān)。

KNO3的質(zhì)量濃度對(duì)檀香預(yù)生根瓶苗生長的影響比NH4NO3小，落葉率及基徑在380 ～1 520 mg·L-1KNO3質(zhì)量濃度范圍內(nèi)基本穩(wěn)定，當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到3 040 mg·L-1時(shí)，落葉率顯著升高，基徑顯著下降，1 520 mg·L-1KNO3處理的基徑、苗高生長均最大。可見，1 520 mg·L-1KNO3處理的檀香預(yù)生根瓶苗生長旺盛，質(zhì)量最好。本研究還發(fā)現(xiàn)，H4NO3和KNO3間存在顯著的交互作用，極顯著影響檀香基徑及葉寬生長，顯著影響葉片數(shù)的生長，以660 mg·L-1NH4NO3質(zhì)量濃度與1 520 mg·L-1KNO3質(zhì)量濃度組合，預(yù)生根瓶苗質(zhì)量最好。綜上分析，NH4NO3為檀香敏感氮源，是影響檀香預(yù)生根瓶苗質(zhì)量的主要氮源。周新華等[18]發(fā)現(xiàn)多花黃精組培瓶苗的生長隨NH4NO3及KNO3使用質(zhì)量濃度的升高而先升后降，2 個(gè)氮源分別以2 475 mg·L-1及2 850 mg·L-1的使用質(zhì)量濃度為最好，變化規(guī)律及適宜質(zhì)量濃度均與本研究差異很大，可能為物種差異所致?？偠灾煌参飳?duì)NH4NO3及KNO3的感應(yīng)不同，適用的質(zhì)量濃度差異亦大，可能與植物在長期進(jìn)化過程中形成的不同氮素吸收偏好[28]或氮素吸收偏好隨環(huán)境條件變化而改變有關(guān)[29]，從而形成植物對(duì)NH4+及N敏感性及忍耐性差異[28]。

基質(zhì)配比及瓶苗高度顯著影響瓶外微扦插的生根率。基質(zhì)是瓶外微扦插的基礎(chǔ)環(huán)境，瓶苗高度為苗木質(zhì)量指標(biāo)，二者外因、內(nèi)因共同作用，決定微扦插的成敗。本研究發(fā)現(xiàn)，過高或過低的蛭石含量均不利于檀香預(yù)生根瓶苗的微扦插生根，當(dāng)蛭石∶泥炭土∶黃心土為7∶1∶2 或6∶1∶3 時(shí)，微扦插生根成活率最高(64.38%～68.08%)，是檀香瓶苗微扦插的最佳基質(zhì)。當(dāng)蛭石比例為60%～70%時(shí)有利于檀香微扦插生根，與蛭石的特性有關(guān)，蛭石具有質(zhì)量輕、持水性好、透氣性高、密度均勻、陽離子交換能力強(qiáng)、利于根聚體形成等優(yōu)點(diǎn)[30]。以該配比為微扦插基質(zhì)，將苗高2.0 ～5.5 cm 的瓶苗分成6 個(gè)等級(jí)，開展微扦插試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)高3.6 cm及以上莖芽有利于微扦插生根，扦插生根率顯著提高，高4.6 ～5.0 cm 莖芽的扦插生根效果最佳。

根據(jù)以上研究結(jié)果，采用40 g·L-1蔗糖、660 mg·L-1NH4NO3與1 520 mg·L-1KNO3進(jìn)行預(yù)生根培養(yǎng)6 個(gè)無性系發(fā)現(xiàn)，1、18、21、22 號(hào)等4 個(gè)無性系瓶苗生長旺盛，12 和19 號(hào)無性系分別有約5%和13%的落葉率，但仍能進(jìn)行預(yù)生根瓶苗的生產(chǎn)。以苗高3.6 cm 以上的瓶苗，在蛭石∶泥炭土∶黃心土為7∶1∶2(V/V)的基質(zhì)上進(jìn)行微扦插試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，檀香無性系間生根能力差異顯著，19 號(hào)無性系生根成活率最低，僅為29.9%。18 號(hào)無性系生根率最高，達(dá)87.12%。由此可見，本研究獲得的檀香組培瓶苗微扦插技術(shù)是可行的，具有較為廣泛的實(shí)用性。目前已生產(chǎn)6 個(gè)優(yōu)良無性系6 000株以上苗木，營造檀香無性系試驗(yàn)示范林6.67 hm2以上。

本研究僅應(yīng)用1 個(gè)無性系開展預(yù)生根培養(yǎng)試驗(yàn)，篩選出適宜的培養(yǎng)基并選用6 個(gè)無性系加以驗(yàn)證，盡管其瓶外微扦插的生根效果較好，尤其是18 號(hào)無性系的生根率超過85%，滿足規(guī)模生產(chǎn)之需要，然而其他無性系的生根率未達(dá)80%，19號(hào)無性系甚至在30%以下。未來將重點(diǎn)針對(duì)生根率低及難生根的無性系，從預(yù)生根培養(yǎng)基的生根促進(jìn)劑類型及質(zhì)量濃度、大量元素配比以及瓶外微扦插前的煉苗等方面開展試驗(yàn)研究，以提高其生根率，實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)。

4 結(jié) 論

1）糖和氮的質(zhì)量濃度顯著影響檀香預(yù)生根瓶苗的生長和落葉；當(dāng)培養(yǎng)基的蔗糖質(zhì)量濃度在25 g·L-1以上時(shí)，能為瓶苗提供充足的碳源和能量，保證瓶苗正常生長；660 mg·L-1NH4NO3與1 520 mg·L-1KNO3組合對(duì)于檀香預(yù)生根瓶苗的培養(yǎng)效果最佳。

2）基質(zhì)和瓶苗高度顯著影響檀香微扦插生根率；采用蛭石∶泥炭土∶黃心土(6∶1∶3，V/V)混合基質(zhì)，瓶苗高度在3.6 cm 以上，微扦插效果最好，其生根率接近70%。

3）檀香6 個(gè)優(yōu)良無性系間微扦插生根率差異顯著，變化范圍為19 號(hào)無性系的29.9%至18 號(hào)無性系的87.12%。

4）本研究建立了檀香組培苗瓶外微扦插技術(shù)，技術(shù)成果具有普遍實(shí)用性。18 號(hào)、21 號(hào)和1 號(hào)無性系生根較容易，具備大規(guī)模產(chǎn)苗能力，可以推廣應(yīng)用。