乙肝患者HBV-DNA定量檢測(cè)與血清標(biāo)志物的關(guān)系研究

金 輝 李洪杰 李肖寒

(1.天津華大醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所 天津 300308；2.天津市海河醫(yī)院檢驗(yàn)科 天津 300350)

乙型肝炎病毒(HBV)感染作為乙肝疾病的基礎(chǔ)病理，HBV-DNA載量與乙肝發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系一直是臨床關(guān)注的熱點(diǎn)。目前，國(guó)內(nèi)外諸多前沿文獻(xiàn)報(bào)道已經(jīng)證實(shí)，HBV-DNA載量與乙肝患者肝功能損害程度及肝纖維化程度均呈正相關(guān)，臨床上通過(guò)乙肝患者HBV-DNA的定量檢測(cè)，可作為判斷患者肝功能及肝纖維化病理特點(diǎn)的重要依據(jù)[1]。而近年來(lái)，隨著傳染病學(xué)對(duì)乙肝疾病病理機(jī)制研究進(jìn)程的不斷推進(jìn)，諸多前沿文獻(xiàn)報(bào)道證實(shí)，氧化應(yīng)激與炎癥反應(yīng)在乙肝患者肝損傷中起著關(guān)鍵的作用[2]，而患者HBV-DNA載量與氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)之間的關(guān)系亦成為臨床研究的創(chuàng)新點(diǎn)。本研究主要探討乙肝患者HBV-DNA載量與血清氧化應(yīng)激標(biāo)志物、炎癥反應(yīng)標(biāo)志物之間的關(guān)系，以期為乙肝疾病診療體系的完善提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2020年1月-2021年12月我院收治的乙肝患者120例為研究對(duì)象。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合乙肝診斷規(guī)范及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)；(2)所收集的病例資料符合本研究需要。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)肝炎病毒重疊感染者；(2)合并肝癌者；(3)合并其他部位感染性疾病者。其中，男70例，女50例；年齡23～72歲，平均年齡(58.24±4.25)歲；病程3～22年，平均病程(8.35±1.02)年。

1.2 方法

1.2.1HBV-DNA定量檢測(cè)

采集本組120例患者晨起、空腹靜脈血，采集量6mL，離心分離后取血清予以HBV-DNA定量檢測(cè)，檢測(cè)儀器采用熒光定量分析儀，檢測(cè)方法采用FQ-PCR。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，將120例患者分為低量組(HBV-DNA在0～104U/mL范圍)16例，中量組(104U/mL106U/mL)26例。

1.2.2血清氧化應(yīng)激標(biāo)志物檢測(cè)

參照1.2.1項(xiàng)下的方法，采集患者血液標(biāo)本，離心分離后取血清予以氧化應(yīng)激標(biāo)志物檢測(cè)，包括超氧化物歧化酶(SOD，檢測(cè)方法采用化學(xué)比色法)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px，檢測(cè)方法采用化學(xué)比色法)、丙二醛(MDA，檢測(cè)方法采用TBA比色法)。

1.2.3血清炎癥反應(yīng)標(biāo)志物檢測(cè)

參照1.2.1項(xiàng)下的方法，采集患者血液標(biāo)本，離心分離后取血清予以炎癥反應(yīng)標(biāo)志物檢測(cè)，包括腫瘤壞死因子-α(TNF-α，檢測(cè)方法采用ELISA)、白細(xì)胞介素-10(IL-10，檢測(cè)方法采用ELISA)、白細(xì)胞介素-2(IL-2，檢測(cè)方法采用ELISA)。

1.3 觀(guān)察指標(biāo)

1.3.1HBV-DNA定量與Child-Pugh 評(píng)分的關(guān)系

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，對(duì)比分析HBV-DNA低量組、中量組、高量組患者Child-Pugh 評(píng)分，其中Child-Pugh 評(píng)分越高，提示肝功能越差。

1.3.2HBV-DNA定量與血清氧化應(yīng)激標(biāo)志物的關(guān)系

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，對(duì)比分析HBV-DNA低量組、中量組、高量組患者血清SOD、GSH-Px、MDA指標(biāo)值。

1.3.3HBV-DNA定量與血清炎癥反應(yīng)標(biāo)志物的關(guān)系

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，對(duì)比分析HBV-DNA低量組、中量組、高量組患者血清TNF-α、IL-10、IL-2指標(biāo)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 乙肝患者HBV-DNA定量與Child-Pugh評(píng)分的關(guān)系

在Child-Pugh 評(píng)分上，HBV-DNA低量組<中量組<高量組(P<0.05)，即隨HBV-DNA載量的升高，Child-Pugh 評(píng)分隨之升高，見(jiàn)表1。

表1 乙肝患者HBV-DNA定量與與Child-Pugh 評(píng)分的關(guān)系

2.2 HBV-DNA定量與血清氧化應(yīng)激標(biāo)志物的關(guān)系

在血清SOD、GSH-Px指標(biāo)值上，HBV-DNA低量組>中量組>高量組(P<0.05)；在血清MDA上，HBV-DNA低量組<中量組<高量組(P<0.05)。Spearman相關(guān)性分析，乙肝患者HBV-DNA定量與血清SOD、GSH-Px呈負(fù)相關(guān)(r=-0.524、-0.665，P=0.017、0.013)，HBV-DNA定量與血清MDA呈正相關(guān)(r=0.656，P=0.009)，見(jiàn)表2。

表2 乙肝患者HBV-DNA定量與血清氧化應(yīng)激標(biāo)志物的關(guān)系

2.3 HBV-DNA定量與血清炎癥反應(yīng)標(biāo)志物的關(guān)系

在血清TNF-α、IL-10指標(biāo)值上，HBV-DNA低量組<中量組<高量組(P<0.05)；在血清IL-2上，HBV-DNA低量組>中量組>高量組(P<0.05)。Spearman相關(guān)性分析，乙肝患者HBV-DNA定量與血清TNF-α、IL-10呈正相關(guān)(r=0.786、0.713，P=0.007、0.08)，HBV-DNA定量與血清IL-2呈負(fù)相關(guān)(r=-0.562，P=0.004)，見(jiàn)表3。

表3 乙肝患者HBV-DNA定量與血清炎癥反應(yīng)標(biāo)志物的關(guān)系

3 討論

HBV-DNA定量檢測(cè)作為乙肝檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)項(xiàng)目的重要組成部分，近年來(lái)從最初的免疫學(xué)檢測(cè)發(fā)展到今天的核酸檢測(cè)，其靈敏度和精確度均得到明顯提高。2021年，《中國(guó)慢乙肝防治指南》強(qiáng)調(diào)了HBV-DNA定量檢查在實(shí)現(xiàn)乙肝治愈目標(biāo)中的價(jià)值，其不僅是監(jiān)測(cè)HBV病毒感染復(fù)制水平的客觀(guān)指標(biāo)，更是乙肝抗病毒治療適應(yīng)證判斷及療效評(píng)估的可靠標(biāo)準(zhǔn)[3]。近年來(lái)，隨著臨床醫(yī)學(xué)對(duì)HBV-DNA定量檢測(cè)與乙肝病理特征之間關(guān)系研究的不斷深入，國(guó)內(nèi)外諸多前沿文獻(xiàn)從肝功能、肝硬化、肝纖維化等方面探討了 HBV-DNA定量在乙肝疾病發(fā)生、發(fā)展機(jī)制中的參與作用，HBV-DNA定量與乙肝患者肝損傷程度呈正相關(guān)性已得到臨床一致認(rèn)可[4]。本研究中，在Child-Pugh 評(píng)分上，HBV-DNA低量組<中量組<高量組(P<0.05)，即隨HBV-DNA載量的升高，Child-Pugh 評(píng)分隨之升高，肝損傷程度隨之加重，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。HBV病毒感染所造成的肝損傷機(jī)制一直是臨床研究的重點(diǎn)。本研究主要從分析乙肝患者HBV-DNA定量與血清氧化應(yīng)激標(biāo)志物、炎癥反應(yīng)標(biāo)志物的關(guān)系，探討HBV病毒經(jīng)氧化應(yīng)激途徑、炎癥反應(yīng)途徑參與肝損傷的機(jī)制。研究結(jié)果顯示：

SOD為抗氧化因子，GSH-Px為過(guò)氧化物分解酶，MDA為氧化應(yīng)激重要的產(chǎn)物，Spearman相關(guān)性分析，乙肝患者HBV-DNA定量與血清SOD、GSH-Px呈負(fù)相關(guān)，HBV-DNA定量與血清MDA呈正相關(guān)，即隨HBV-DNA定量的升高，機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)程度隨之加重。據(jù)相關(guān)研究報(bào)道強(qiáng)調(diào)，機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)會(huì)誘發(fā)肝脂質(zhì)過(guò)氧化，并誘導(dǎo)肝細(xì)胞損傷和凋亡，進(jìn)而加重肝損傷。而HBV的S或者前S蛋白可通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線(xiàn)粒體途徑引發(fā)二者發(fā)生功能障礙，并導(dǎo)致氧化應(yīng)激刺激。因此，HBV是誘發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)并造成肝損傷的重要介質(zhì)，且隨乙肝患者HBV-DNA載量的升高，其氧化應(yīng)激刺激越劇烈，肝損傷越嚴(yán)重[5-6]。因此，臨床上通過(guò)對(duì)乙肝患者HBV-DNA定量的檢測(cè)，可為機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)程度的判斷提供參考，并指導(dǎo)臨床針對(duì)性的干預(yù)措施以抗氧化應(yīng)激，減輕肝損傷程度。

TNF-α、IL-10均為重要的炎癥反應(yīng)介質(zhì)，IL-2為炎癥反應(yīng)抑制因子，本研究中Spearman相關(guān)性分析顯示，乙肝患者HBV-DNA定量與血清TNF-α、IL-10呈正相關(guān)，與血清IL-2呈負(fù)相關(guān)，即隨HBV-DNA定量的升高，機(jī)體炎癥反應(yīng)程度隨之加重。臨床上，機(jī)體炎癥反應(yīng)的發(fā)生導(dǎo)致中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等在肝臟組織逐步侵潤(rùn)和激活，容易引發(fā)過(guò)度炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，造成肝細(xì)胞的損傷及死亡，導(dǎo)致患者肝功能下降[7]。而從病理、生理來(lái)講，HBV侵入肝臟后大量復(fù)制，激活機(jī)體免疫反應(yīng)，是導(dǎo)致大量炎癥介質(zhì)釋放，誘發(fā)炎癥反應(yīng)的重要因子[8]。因此，乙肝患者隨機(jī)體HBV-DNA載量的升高，炎癥反應(yīng)逐趨劇烈，肝損傷程度逐漸加重。因此，臨床上通過(guò)對(duì)乙肝患者HBV-DNA定量的檢測(cè)，可為機(jī)體炎癥反應(yīng)程度的判斷提供參考，并通過(guò)抗炎干預(yù)以預(yù)防肝功能進(jìn)行性損傷。

綜上所述，隨乙肝患者HBV-DNA定量的升高，機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)及炎癥反應(yīng)程度加重，造成肝功能損傷。臨床上通過(guò)對(duì)乙肝患者HBV-DNA定量的檢測(cè)，可用以判斷機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)程度和炎癥反應(yīng)程度，進(jìn)而采取針對(duì)性的抗氧化應(yīng)激及抗炎干預(yù)，以減輕患者肝損傷程度，改善預(yù)后。